【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】高亲合力WT1 T细胞受体及其用途
[0001]关于序列表的声明
[0002]与本申请相关的序列表以文本格式代替纸质副本提供,并在此通过引用并入说明书。包含序列表的文本名称是360056_466WO_SEQUENCE_LISTING.txt。该文本文件是243KB,创建于2020年3月8日,正在通过EFS
‑
Web以电子方式提交。
技术介绍
[0003]使用基因工程T细胞的过继性T细胞免疫疗法在多项试验中显示出前景,其中使用具有足够亲和力的抗原受体靶向肿瘤相关抗原,包括基于抗体的嵌合受体1‑3和高亲和力TCR4‑8。虽然胸腺中多样性产生的自然过程采用RAG介导的TCR基因重排来产生长度和氨基酸组成不同的高度多样化的CDR3,但在中枢耐受施加的亲和力限制内分离有效的高亲和力TCR,仍然是对已确定候选细胞内自身/肿瘤抗原的多种恶性肿瘤实施过继性T细胞免疫疗法的实质性障碍
9,10
。此外,TCR过继免疫疗法具有检测由MHC I类呈递在细胞表面的细胞内抗原的能力。
[0004]由于WT1蛋白的免疫特性(Cheever et al.,Clin.Cancer Res.15:5323,2009)及其在许多与不良预后相关的侵袭性肿瘤类型中的表达,WT1蛋白是临床开发的一个有吸引力的目标。WT1涉及促进增殖和致癌性的基因表达的调节(Oji et al.,Jpn.J.Cancer Res.90:194,1999),在大多数高危白血病(Menssen et al.,Leukemia 9:1060,1995 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.T细胞受体(TCR),包括:(a)TCRα链可变(V
α
)结构域,以及具有SEQ ID NO:199、1
‑
11、181、187、193、205、211、217、223、229、235和241中任何一个所列CDR3氨基酸序列的TCRβ链可变(V
β
)结构域;(b)具有SEQ ID NO:196、12
‑
22、178、184、190、202、208、214、220、226、232和238中任何一个所列CDR3氨基酸序列的TCR V
α
结构域和TCR V
β
结构域;或(c)具有SEQ ID NO:199、1
‑
11、181、187、193、205、211、217、223、229、235和241中任何一个所列出的CDR3氨基酸序列的TCR V
α
结构域,以及包括SEQ ID NO:196、12
‑
22、178、184、190、202、208、214、220、226、232和238中任何一个所列出的CDR3氨基酸序列的TCR V
β
结构域;其中,TCR特异性地与VLDFAPPGA(SEQ ID NO:59):人类白细胞抗原(HLA)复合物结合,IFNγ产生pEC
50
为8.5或更高。2.根据权利要求1所述的TCR,其中所述TCR特异性地与VLDFAPPGA(SEQ ID NO:59):人类白细胞抗原(HLA)复合物结合,IFNγ产生pEC
50
为9.0或更高。3.根据权利要求1或2所述的TCR,其中所述TCR特异性地与VLDFAPPGA(SEQ ID NO:59):人类白细胞抗原(HLA)复合物结合,其IFNγ产生pEC
50
为9.5或更高。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的TCR,其中所述TCR进一步特异性地与细胞表面的VLDFAPPGA(SEQ ID NO:59):人类白细胞抗原(HLA)复合物结合,所述复合物独立于CD8或在没有CD8时。5.权利要求1
‑
4中任一项所述的TCR,其中所述HLA包括HLA
‑
A*201。6.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的TCR,其中V
α
结构域包括氨基酸序列,所述序列至少具有:(a)与SEQ ID NO:34
‑
35和38
‑
44中的任何一个列出的氨基酸序列有约90%的序列同一性;或(b)与SEQ ID NO:36或37的氨基酸序列有92%的序列同一性。7.根据权利要求1
‑
6中任一项所述的TCR,其中V
α
结构域包括CDR1和/或CDR2的氨基酸序列与分别存在于SEQ ID NO:34
‑
44中任一项的CDR1和/或CDR2相比没有变化。8.根据权利要求1
‑
7中任一项所述的TCR,进一步包括:(i)SEQ ID NO:194、176、182、188、200、206、212、218、224、230和236中的任何一个列出的CDR1α氨基酸序列,或其包含一个或两个氨基酸替换的变体,其中,可选的是,所述一个或两个氨基酸替换包含保守的氨基酸替换;和/或(ii)SEQ ID NO:195、177、183、189、201、207、213、219、225、231和237中的任何一个列出的CDR2α氨基酸序列,或其包含一个或两个氨基酸替换的变体,其中,可选的是,所述一个或两个氨基酸替换包含保守的氨基酸替换。9.根据权利要求1
‑
8中任一项所述的TCR,其中V
β
结构域包括氨基酸序列,所述氨基酸序列至少具有:(a)与SEQ ID NO:23
‑
25、27、28、30、32和33中的任何一个所列出的氨基酸序列有90%的序列同一性;(b)与SEQ ID NO:29的氨基酸序列有92%的序列同一性;(c)与SEQ ID NO:31的氨基酸序列有93%的序列同一性;或
(d)与SEQ ID NO:26的氨基酸序列有95%的序列同一性。10.根据权利要求1
‑
9中任一项所述的TCR,其中V
β
结构域包括CDR1和/或CDR2的氨基酸序列与分别存在于SEQ ID NO:23
‑
33中任一项的CDR1和/或CDR2相比没有变化。11.根据权利要求1
‑
10中任一项所述的TCR,进一步包括:(i)SEQ ID NO:197、179、185、191、197、203、209、215、221、227、233和239中的任何一个列出的CDR1β氨基酸序列,或其包含一个或两个氨基酸替换的变体,其中,可选的是,所述一个或两个氨基酸替换包含保守的氨基酸替换;和/或(ii)SEQ ID NO:198、180、186、192、204、210、216、222、228、234和240中的任何一个所列出的CDR2β氨基酸序列,或其包含一个或两个氨基酸替换的变体,其中,可选的是,所述一个或两个氨基酸替换包含保守的氨基酸替换。12.根据权利要求1
‑
11中任一项所述的TCR,包括以下列出的CDR1α、CDR2α、CDR3α、CDR1β、CDR2β和CDR3β氨基酸序列:(i)分别为SEQ ID NO:194、195、196或12、197、198、和199或1;(ii)分别为SEQ ID NO:176、177、178或18、179、180、和181或7;(iii)分别为SEQ ID NO:182、183、184或20、185、186、和187或9;(iv)分别为SEQ ID NO:188、189、190或21、191、192、和193或10;(v)分别为SEQ ID NO:200、201、202或13、203、204、和205或2;(vi)分别为SEQ ID NO:206、207、208或14、209、210、和211或3;(vii)分别为SEQ ID NO:212、213、214或15、215、216、和217或4;(viii)分别为SEQ ID NO:218、219、220或17、221、222、和223或6;(ix)分别为SEQ ID NO:224、225、226或19、227、228、和229或8;(x)分别为SEQ ID NO:230、231、232或22、233、234、和235或11;或(xi)分别为SEQ ID NO:236、237、238或16、238、240、和241或5。13.根据权利要求1
‑
12中任一项所述的TCR,其中V
α
结构域包括SEQ ID NO:253
‑
263和34
‑
44中任一项所述的氨基酸序列。14.根据权利要求1
‑
13中任一项所述的TCR,其中V
α
结构域由SEQ ID NO:253
‑
263和34
‑
44中任一项列出的氨基酸序列组成。15.根据权利要求1
‑
14中任一项所述的TCR,其中V
β
结构域包括SEQ ID NO:242
‑
252和23
‑
33中任一项所列出的氨基酸序列。16.根据权利要求1
‑
15中任一项所述的TCR,其中V
β
结构域由SEQ ID NO:242
‑
252和23
‑
33中任一项列出的氨基酸序列组成。17.根据权利要求1
‑
16中任一项所述的TCR,其中所述TCR包括与SEQ ID NO:47的氨基酸序列具有至少约90%序列同一性的TCRα链恒定结构域。18.根据权利要求1
‑
17中任一项所述的TCR,其中所述TCR包括与SEQ ID NO:45或46的氨基酸序列具有至少约90%序列同一性的TCRβ链恒定结构域。19.根据权利要求1
‑
18中任一项所述的TCR,其中所述TCR包括含有V
α
结构域和α链恒定结构域的TCRα链,其中:(a)V
α
结构域与SEQ ID NO:34
‑
35和38
‑
44中的任何一个列出的氨基酸序列具有至少约90%的序列同一性,并且α链恒定结构域与SEQ ID NO:47的氨基酸序列具有至少约98%的
序列同一性;或(b)V
α
结构域与SEQ ID NO:36或37的氨基酸序列具有92%的序列同一性,并且α链恒定结构域与SEQ ID NO:47的氨基酸序列具有至少约98%的序列同一性。20.根据权利要求1
‑
19中任一项所述的TCR,其中所述TCR包括含有V
α
结构域和α链恒定结构域的TCRα链,其中:(a)V
α
结构域包括SEQ ID NO:242
‑
252和34
‑
44中任何一个列出的氨基酸序列,而α链恒定结构域包括SEQ ID NO:47的氨基酸序列;或(b)V
α
结构域由SEQ ID NO:242
‑
252和34
‑
44中的任何一个列出的氨基酸序列组成,而α链恒定结构域由SEQ ID NO:47的氨基酸序列组成。21.根据权利要求1
‑
20中任一项所述的TCR,其中所述TCR包括含有V
β
结构域和β链恒定结构域的TCRβ链,其中:(a)V
β
结构域与SEQ ID NO:23
‑
25、27、28、30、32和33中的任何一个列出的氨基酸序列具有至少约90%的序列同一性,并且β链恒定结构域包括SEQ ID NO:45的氨基酸序列或与SEQ ID NO:46的氨基酸序列具有至少约95%的序列同一性;(b)V
β
结构域与SEQ ID NO:29的氨基酸序列有92%的序列同一性,并且β链恒定结构域包括SEQ ID NO:45的氨基酸序列或与SEQ ID NO:46的氨基酸序列有至少约95%的序列同一性;(c)V
β
结构域与SEQ ID NO:31的氨基酸序列有93%的序列同一性,并且β链恒定结构域包括SEQ ID NO:45的氨基酸序列或与SEQ ID NO:46的氨基酸序列有至少约95%的序列同一性;或(c)V
β
结构域与SEQ ID NO:26的氨基酸序列有95%的序列同一性,并且β链恒定结构域包括SEQ ID NO:45的氨基酸序列或与SEQ ID NO:46的氨基酸序列有至少约95%的序列同一性。22.根据权利要求1
‑
21中任一项所述的TCR,其中所述TCR包括含有V
β
结构域和β链恒定结构域的TCRβ链,其中:(a)V
β
结构域包括SEQ ID NO:253
‑
263和23
‑
33中任何一个列出的氨基酸序列,而β链恒定结构域包括SEQ ID NO:45或46的氨基酸序列;(b)V
β
结构域由SEQ ID NO:253
‑
263和23
‑
33中任何一个列出的氨基酸序列组成,β链恒定结构域由SEQ ID NO:45或46的氨基酸序列组成;(c)V
β
结构域包括SEQ ID NO:25、28、29、32和33中任何一个列出的氨基酸序列,而β链恒定结构域包括SEQ ID NO:45的氨基酸序列;(d)V
β
结构域由SEQ ID NO:25、28、29、32和33中任何一个列出的氨基酸序列组成,而β链恒定结构域由SEQ ID NO:45的氨基酸序列组成;(e)V
β
结构域包括SEQ ID NO:23、24、26、27、30和31中任何一个列出的氨基酸序列,而β链恒定结构域包括SEQ ID NO:46的氨基酸序列;或(f)V
β
结构域由SEQ ID NO:23、24、26、27、30和31中任何一个列出的氨基酸序列组成,β链恒定结构域由SEQ ID NO:46的氨基酸序列组成。23.根据权利要求1
‑
22中任一项所述的TCR,其中Vα结构域和Vβ结构域包括或由以下SEQ ID NO中列出的氨基酸序列组成:
(i)分别为253和242;(ii)分别为259和248;(iii)分别为261和250;(iv)分别为262和251;(v)分别为257和246;(vi)分别为254和243;(vii)分别为255和244;(viii)分别为256和245;(ix)分别为258和247;(x)分别为260和249;(xi)分别为263和252;(xii)分别为34和23;(xiii)分别为40和29;(xiv)分别为42和31;(xv)分别为43和32;(xvi)分别为35和24;(xvii)分别为36和25;(xviii)分别为37和26;(xix)分别为39和28;(xx)分别为41和30;(xxi)分别为44和33;或(xxii)分别为38和27。24.根据权利要求23所述的TCR,进一步包括α链恒定结构域和/或β链恒定结构域,其中α链恒定结构域包括与SEQ ID NO:47中所列氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列,并且其中β链恒定结构域包括与SEQ ID NO:45或46中所列氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列。25.根据权利要求24所述的TCR,其中存在α链恒定结构域,Vα结构域和α链恒定结构域共同构成TCRα链。26.根据权利要求24或25所述的TCR,其中存在β链恒定结构域,Vα结构域和β链恒定结构域共同构成TCRβ链。27.根据权利要求1
‑
26中任一项所述的TCR,其中所述TCR包括scTCR。28.根据权利要求1
‑
26中任一项所述的TCR,其中所述TCR包括CAR。29.编码根据权利要求1
‑
28中任一项所述的TCR的分离的多核苷酸。30.根据权利要求29所述的多核苷酸,其中编码TCR的多核苷酸对感兴趣的宿主细胞进行了密码子优化。31.根据权利要求29或30所述的多核苷酸,其中所述多核苷酸编码的氨基酸序列与包括或由其组成的SEQ ID NO:48
‑
58中任何一个所列出的氨基酸序列具有至少95%的同一性。32.根据权利要求29
‑
31中任一项所述的多核苷酸,包括SEQ ID NO.64
‑
165中任一项所
述的多核苷酸序列。33.根据权利要求29
‑
32中任一项所述的多核苷酸,进一步包括:(i)编码多肽的多核苷酸,所述多肽包括CD8共受体α链的细胞外部分,其中,可选地,编码的多肽是或包括CD8共受体α链;(ii)编码多肽的多核苷酸,所述多肽包括CD8共受体β链的细胞外部分,其中,可选的是,编码的多肽是或包括CD8共受体β链;或(iii)(i)的多核苷酸和(ii)的多核苷酸。34.根据权利要求33所述的多核苷酸,包括:(a)编码包括CD8共受体α链细胞外部分的多肽的多核苷酸;(b)编码多肽的多核苷酸,所述多肽包括CD8共受体β链的细胞外部分;以及(c)编码自裂解肽的多核苷酸,置于(a)的多核苷酸和(b)的多核苷酸之间。35.根据权利要求33或34所述的多核苷酸,进一步包括编码自裂解肽并被放置在以下的多核苷酸:(1)编码结合蛋白的多核苷酸和编码包含CD8共受体α链细胞外部分的多肽的多核苷酸之间;和/或(2)编码结合蛋白的多核苷酸和编码包括CD8共受体β链细胞外部分的多肽的多核苷酸之间。36.根据权利要求33
‑
35中任一项所述的多核苷酸,包括可操作地连接在框内的以下:(i)(pnCD8α)
‑
(pnSCP1)
‑
(pnCD8β)
‑
(pnSCP2)
‑
(pnTCR);(ii)(pnCD8β)
‑
(pnSCP1)
‑
(pnCD8α)
‑
(pnSCP2)
‑
(pnTCR);(iii)(pnTCR)
‑
(pnSCP1)
‑
(pnCD8α)
‑
(pnSCP2)
‑
(pnCD8β);(iv)(pnTCR)
‑
(pnSCP1)
‑
(pnCD8β)
‑
(pnSCP2)
‑
(pnCD8α);(v)(pnCD8α)
‑
(pnSCP1)
‑
(pnTCR)
‑
(pnSCP2)
‑
(pnCD8β);或(vi)(pnCD8β)
‑
(pnSCP1)
‑
(pnTCR)
‑
(pnSCP2)
‑
(pnCD8α),其中pnCD8α是编码以下多肽的多核苷酸:所述多肽包括CD8共受体α链的细胞外部分,其中pnCD8β是编码以下多肽的多核苷酸:所述多肽包括CD8共受体α链的细胞外部分,其中,pnTCR是编码TCR的多核苷酸,并且其中pnSCP1和pnSCP2各自独立地是编码自裂解肽的多核苷酸,其中多核苷酸和/或编码的自裂解肽可选择相同或不同。37.根据权利要求33
‑
36中任一项所述的多核苷酸,其中编码的TCR包括TCRα链和TCRβ链,其中所述多核苷酸包括编码自裂解肽的多核苷酸,所述多核苷酸放置在编码TCRα链的多核苷酸与编码TCRβ链的多核苷酸之间。38.根据权利要求37所述的多核苷酸,包括可操作地连接在框架内的以下:(i)(pnCD8α)
‑
(pnSCP1)
‑
(pnCD8β)
‑
(pnSCP2)
‑
(pnTCRβ)
‑
(pnSCP3)
‑
(pnTCRα);(ii)(pnCD8β)
‑
(pnSCP1)
‑
(pnCD8α)
‑
(pnSCP2)
‑
(pnTCRβ)
‑
(pnS...
【专利技术属性】
技术研发人员:T,
申请(专利权)人:弗雷德哈钦森癌症研究中心,
类型:发明
国别省市:
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