The invention belongs to the field of aquatic biotechnology, and discloses a molecular marker and method for genetic sex identification of soft-shelled turtle. RAD technology is used to sequence male and female individuals and screen male and female specific fragments; according to male and female specific fragments, female genome Walking is carried out to obtain 6532 BP specific fragment SEQ ID NO:1; and primers are designed based on specific fragments. Specific primers were obtained by primer screening and validation; the skirt tissue of soft-shelled turtle was collected to extract the genomic DNA of soft-shelled turtle, and the primers were used to amplify the genomic DNA of soft-shelled turtle; the amplified results were detected by electrophoresis; and the genetic sex was identified. The invention solves the problem that the sex-specific marker of soft-shelled turtle has not yet been seen for genetic sex identification, and has originality. The accurate identification success rate of the invention reaches 100%.
【技术实现步骤摘要】
一种用于中华鳖遗传性别鉴定的分子标记及方法
本专利技术属于水产生物
,尤其涉及一种用于中华鳖遗传性别鉴定的分子标记及方法。
技术介绍
目前,业内常用的现有技术是这样的:中华鳖(Pelodiscussinensis)属爬行纲、龟鳖目、鳖科、鳖属,俗称甲鱼、水鱼、团鱼。在世界范围内,鳖主要分布于亚洲、非洲及北美,在亚洲主要分布于中国、俄罗斯东部、朝鲜、日本和越南。在我国分布范围广泛,除西藏、青海及新疆外各省市、自治区均有分布。由于其具有较高的营养价值和药用价值,一直以来深受广大消费者的喜爱。近些年来,中华鳖养殖业也得到较快发展,养殖产量在2016年已经达到34.5万吨。中华鳖呈现明显的雌雄异速生长,雄性生长速度快于雌性,且雄性的裙边宽厚,雄性苗种的价格较雌性高,雄性苗种深受广大养殖企业和养殖户的欢迎。因此,全雄或高雄性中华鳖苗种的培育将极大地提高养殖产量,增加养殖效益,中华鳖的性别控制育种也业已成为重要的研究课题。目前中华鳖单性苗种生产常用的方法是人工挑选。孵化后的苗种经人工养殖一段时间,在出现明显异形特征时通过外部形态进行判别,目前通常以尾的长短作为第一辨别特征,雌性个体尾短,尾端不或很少自然伸出裙边外;雄性个体尾长,能够自然伸出裙边。虽然人工挑选的方法简单易行,但是对于尾部特征不明显的个体或者幼鳖鉴定效果较差,同时还必须在养殖到出现明显的外形判别特征时才能进行,需要将雌雄性苗种同时养殖一段时间,一般在温室养殖情况下需要3-4个月,在外塘养殖时间更长,而规格苗种出售时,通常养殖企业和养殖户只购买雄性苗种,绝大部分雌性个体只能作为商品鳖销售,而价格相对较 ...
【技术保护点】
1.一种用于中华鳖遗传性别鉴定方法,其特征在于,所述用于中华鳖遗传性别鉴定方法包括:采用RAD技术对中华鳖雌雄个体进行测序,筛选雌雄特异性片段;根据雌雄特异性片段进行雌性基因组Walking,获得6532bp的特异性片段SEQ ID NO:1;基于特异性片段设计引物,进行引物筛选和验证获得特异性引物组Female1F/Female1R和Female2F/Female2R;采集中华鳖裙边组织,保存在无水乙醇中;提取中华鳖基因组DNA,保存在超纯水中;利用引物组Female1F/Female1R和Female2F/Female2R在中华鳖个体中进行扩增;扩增结果进行电泳检测;进行遗传性别的鉴定。
【技术特征摘要】
1.一种用于中华鳖遗传性别鉴定方法,其特征在于,所述用于中华鳖遗传性别鉴定方法包括:采用RAD技术对中华鳖雌雄个体进行测序,筛选雌雄特异性片段;根据雌雄特异性片段进行雌性基因组Walking,获得6532bp的特异性片段SEQIDNO:1;基于特异性片段设计引物,进行引物筛选和验证获得特异性引物组Female1F/Female1R和Female2F/Female2R;采集中华鳖裙边组织,保存在无水乙醇中;提取中华鳖基因组DNA,保存在超纯水中;利用引物组Female1F/Female1R和Female2F/Female2R在中华鳖个体中进行扩增;扩增结果进行电泳检测;进行遗传性别的鉴定。2.如权利要求1所述的用于中华鳖遗传性别鉴定方法,其特征在于,基于特异性片段设计引物中,引物包括:引物组1:Female1F:TGACTGGCACTGGAGAAGGA;Female1R:GCATCAACCACAGCCCTACA;引物组2:Female2F:TCCAGGGCAGAAAGACACTC;Female2R:ATGTCCCGGTGGATGGC。3.如权利要求1所述的用于中华鳖遗传性别鉴定方法,其特征在于,采用RAD技术对中华鳖雌雄个体进行测序前需进行鉴定样本的收集;采用打孔器在中华鳖的裙边进行打孔,采集雌雄性个体的组织样本,并保存在无水乙醇中,雌性记为Female,雄性记为Male。4.如权利要求1所述的用于中华鳖遗传性别鉴定方法,其特征在于,提取中华鳖基因组DNA包括:(1)取0.5g左右裙边组织,用超纯水反复冲洗组织表面的无水乙醇,经充分剪碎后放入1.5mL的离心管中;(2)向离心管中加入10~15μL的蛋白酶K和500μL的HOMbuffer,55℃消化4~6h;(3)加入500μL4.5MNaCL溶液和300μL的氯仿,充分混匀20min以后,在13000rpm下离心10min;(4)将上清液转移到另一个灭菌的新管中,加入600μL无水异丙醇,充分摇匀2...
【专利技术属性】
技术研发人员:梁宏伟,邹桂伟,王利华,沙航,孟彦,
申请(专利权)人:中国水产科学研究院长江水产研究所,
类型:发明
国别省市:湖北,42
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