【技术实现步骤摘要】
本申请涉及鲢判定或确证，具体涉及判别野生与养殖鲢的代谢标志物及用途。
技术介绍
1、鲢(hypophthalmichthys molitrix)是我国重要的养殖品种，主要分布于长江流域。作为“四大家鱼”之一，有着病害少、肉质好等特点，其种质资源主要分布于长江干支流及湖泊。由于人类活动的影响，长江鱼类资源面临严重衰退。
技术实现思路
1、本申请针对野生与养殖鲢生物学性状接近、甄别技术缺乏的问题，首次采用超高通量液相色谱－质谱联用技术，收集了不同的野生与养殖鲢群体的肌肉样本，进行了代谢组学分析，探讨了野生与养殖鲢代谢物的共性差异及变化，筛选出了的代谢标志物：二甲基亚砜(cas号：67-68-5)、桉脂素(cas号：526-06-7)、苯乙烯(cas号：100-42-5)、异烟肼(cas号：54-85-3)、对甲基苯酚(cas号：106-44-5)、二甲基乙醇胺(cas号：108-01-0)。利用液相色谱-质谱联用检测的结果，进行统计和逻辑回归分析，得到逻辑回归分析模型，根据逻辑回归模型判断受试样本的来源，能够准确判别野生与养殖性，具有较好的敏感度和特异度。并且，本申请提供的代谢标志物及用途能够为相关执法部门提供科学依据和技术支撑，为加强长江流域非法捕捞行为的监管和打击力度，减少对野生资源的过度捕捞，进而更好地为管理和保护鲢资源提供技术基础。
2、为此，本申请实施例至少公开了以下技术方案：
3、第一方面，实施例公开了代谢标志物，其含有二甲基亚砜、桉脂素、苯乙烯、异
4、在第一方面的实施例中，所述代谢标志物包含为二甲基亚砜、桉脂素、苯乙烯、异烟肼、对甲基苯酚和二甲基乙醇胺中。
5、在第一方面的实施例中，所述代谢标志物包含二甲基亚砜、桉脂素中的至少一种。
6、在第一方面的实施例中，所述代谢标志物包含二甲基亚砜和桉脂素。
7、第二方面，实施例公开了试剂组合物，其包含用于检测第一至五方面任一所述代谢标志物的试剂。
8、在第二方面的实施例中，所述试剂包含用于提取受试样本的代谢物的试剂。在一些实施例中，所述试剂包含钢珠和甲醇-水溶液(4:1，v/v)。
9、第三方面，实施例公开了第一方面所述的代谢标志物和/或用于检测第二方面所述的代谢标志物在判别野生与养殖鲢中的用途。
10、第四方面，实施例公开了判别野生鲢与养殖鲢的方法。
11、在一些实施例中，所述方法包括测试受试样本中第一方面所述的代谢标志物中各个代谢标志物含量的方法。在一些实施例中，所述受试样本为鲢的上背部肌肉样本。
12、在一些实施例中，所述各个代谢标志物包括二甲基亚砜、桉脂素、苯乙烯、异烟肼、对甲基苯酚、二甲基乙醇胺。
13、在一些实施例中，所述方法还包括：获得逻辑回归模型和阈值；获得受试样本中多个代谢标志物含量的多个标准化值；将多个所述标准化值输入所述逻辑回归模型得到野生概率；根据所述野生概率与所述阈值的大小确定所述受试样本为所述野生鲢或所述养殖鲢。
14、在一些实施例中，所述逻辑回归模型为：x＝-31.258×a+3.953×b-0.236×c+0.789×d+0.725×e+3.914×f+204.608；野生概率＝1/(1+e－x)；其中a、b、c、d、e、f分别为二甲基亚砜、桉脂素、苯乙烯、异烟肼、对甲基苯酚、二甲基乙醇胺的标准化值，所述野生概率表征受试样本为野生鲢的概率。在一些实施例中，若所述野生概率大于所述阈值，则受试样本为野生鲢。在一些实施例中，若所述野生概率小于所述阈值，则受试样本为养殖鲢。
15、在一些实施例中，阈值的确定步骤包括：根据收集的肌肉样本的为二甲基亚砜、桉脂素、苯乙烯、异烟肼、对甲基苯酚、二甲基乙醇胺的标准化值作为训练集；以该训练集训练二元逻辑回归模型，分别得到多个所述野生概率值；分别计算每一所述野生概率值的敏感性(真正例率)和1-特异性(假正例率)，将1-特异性作为横坐标和敏感性作为纵坐标来绘制roc曲线；计算每个野生概率对应的约登指数(约登指数＝敏感度+特异度-1)，并获得最大约登指数，所述最大约登指数对应的野生概率即为阈值。在一些实施例中，阈值为0.50。
16、在一些实施例中，所述各个代谢标志物包括二甲基亚砜、桉脂素。
17、在一些实施例中，所述逻辑回归模型为：x＝-32.698×a+0.997×b+281.034；野生概率＝1/(1+e－x)；其中a、b、c分别为二甲基亚砜、桉脂素的标准化值，所述野生概率表征受试样本为野生鲢的概率。在一些实施例中，若所述野生概率大于所述阈值，则受试样本为野生鲢。在一些实施例中，若所述野生概率小于所述阈值，则受试样本为养殖鲢。
18、在一些实施例中，阈值的确定步骤包括：根据收集的肌肉样本的二甲基亚砜、桉脂素的标准化值作为训练集；以该训练集训练二元逻辑回归模型，分别得到多个所述野生概率值；分别计算每一所述野生概率值的敏感性(真正例率)和1-特异性(假正例率)，将1-特异性作为横坐标和敏感性作为纵坐标来绘制roc曲线；计算每个野生概率对应的约登指数(约登指数＝敏感度+特异度-1)，并获得最大约登指数，所述最大约登指数对应的野生概率即为阈值。在一些实施例中，阈值为0.50。
19、在一些实施例中，所述标准化值为将各标志物检测的色谱峰面积进行归一化处理和底数为10的对数转换得到的值。
20、在一些实施例中，所述方法还包括液相色谱质谱联用的方法。
21、在一些实施例中，该液相色谱的检测步骤中，采用shimadzu－lc30超高效液相色谱系统(uhplc)进行检测，使用acquityhss t3(2.1×100mm，1.8μm)(waters,milford,ma,usa)色谱柱，柱温40℃，色谱流动相a为0.1％甲酸水溶液，色谱流动相b为100％乙腈溶液，洗脱模式为梯度洗脱，洗脱时间为15分钟，流速为0.3ml/min，具体进样量为4μl。色谱梯度洗脱具体程序如下：0→2min，0％b；2－6min，b从0％线性变化至48％；6→10min，b从48％线性变化至100％；10→12min，b维持在100％；12→12.1min，b从100％线性变化至0％，12.1→15min，b维持在0％。
22、在一些实施例中，该质谱的检测步骤中，采用电喷雾电离(esi)进行正离子(+)和负离子(－)模式检测。经uplc分离后用qe plus质谱仪(thermo scientific)进行质谱分析，使用hesi源进行离子化，其离子化条件如下：喷雾电压为3.8kv(+)和3.2kv(－)；毛细管温度为320℃；探头加热器温度为350℃；鞘流气为30arbitrary units；辅助气流为5arbitrary units；s－lens射频电平为50arbitrary units。
23、在一些实施例中，该质谱的检测步骤本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.代谢标志物，包括二甲基亚砜、桉脂素、苯乙烯、异烟肼、对甲基苯酚、二甲基乙醇胺中的至少一种。
2.判别野生鲢与养殖鲢的代谢标志物，包括为二甲基亚砜、桉脂素、苯乙烯、异烟肼、对甲基苯酚、二甲基乙醇胺中的至少一种。
3.判别野生鲢与养殖鲢的代谢标志物，包括二甲基亚砜、桉脂素中的至少一种。
4.判别野生鲢与养殖鲢的方法，包括：
5.根据权利要求4所述的方法，其中，
6.根据权利要求4所述的方法，其中，
7.根据权利要求4所述的方法，可选地，若所述野生概率大于所述阈值，则受试样本为野生鲢；
8.权利要求1～3任一所述的代谢标志物和/或用于检测权利要求1～3任一所述代谢标志物的试剂在判别野生与养殖鲢中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，所述判别包括测试受试样本中如权利要求2所述的代谢标志物中各个代谢标志物含量的步骤；
10.根据权利要求8所述的用途，所述判别包括测试受试样本中如权利要求3所述的代谢标志物中各个代谢标志物含量的步骤；
【技术特征摘要】
1.代谢标志物，包括二甲基亚砜、桉脂素、苯乙烯、异烟肼、对甲基苯酚、二甲基乙醇胺中的至少一种。
2.判别野生鲢与养殖鲢的代谢标志物，包括为二甲基亚砜、桉脂素、苯乙烯、异烟肼、对甲基苯酚、二甲基乙醇胺中的至少一种。
3.判别野生鲢与养殖鲢的代谢标志物，包括二甲基亚砜、桉脂素中的至少一种。
4.判别野生鲢与养殖鲢的方法，包括：
5.根据权利要求4所述的方法，其中，
6.根据权利要求4所述的方法，其中，
...
【专利技术属性】
技术研发人员：张浪，张辉，梁宏伟，李晓晖，沙航，李罗新，姬雯雅，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院长江水产研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。