本发明专利技术涉及一种人血清白蛋白‑阿霉素交联物及其应用，通过小分子交联技术合成的人血清白蛋白‑阿霉素交联物HSA‑DOX能够形成纳米颗粒，所述HSA‑DOX纳米颗粒能够选择性杀伤肿瘤细胞、抑制肿瘤的淋巴结转移，可用于肿瘤的靶向成像和靶向治疗。与未交联的阿霉素相比，本发明专利技术的HSA‑DOX能够显著增强肿瘤治疗效果、减小肿瘤体积。
A Human Serum Albumin-Adriamycin Cross-linked Nanoparticles and Its Application
The present invention relates to a human serum albumin adriamycin cross-linking compound and its application. HSA DOX, a human serum albumin adriamycin cross-linking compound synthesized by small molecular cross-linking technology, can form nanoparticles. The HSA DOX nanoparticles can selectively kill tumor cells and inhibit lymph node metastasis of tumors, and can be used for targeted imaging and targeted therapy of tumors. Compared with uncrosslinked doxorubicin, the HSA DOX of the present invention can significantly enhance the therapeutic effect of tumors and reduce the volume of tumors.
【技术实现步骤摘要】
一种人血清白蛋白-阿霉素交联物纳米颗粒及其应用
本专利技术属于医药领域和生物
，具体涉及一种纳米抗癌药物，特别涉及一种人血清白蛋白-阿霉素交联物及其治疗肿瘤的用途。
技术介绍
肿瘤现在依然是一种严重威胁人类将康的常见病和多发病，是引起死亡的主要原因之一。化疗是利用细胞毒性药物杀死肿瘤细胞，抑制肿瘤细胞的生长繁殖和促进肿瘤细胞分化的一种治疗方式，它是一种全身性治疗手段。但是，在临床治疗中，化疗治疗在杀伤肿瘤细胞的同事，也将正常细胞和免疫细胞一同杀死。其中，阿霉素是最常用、最重要的药物之一。临床使用的阿霉素也叫多柔比星，是治疗肿瘤的一种重要化疗药物，但由于其产生的生物毒性限制了其临床上的广泛应用。由于其没有肿瘤靶向性，在化疗过程中会同时杀伤肿瘤组织和正常组织，长期使用阿霉素药物会产生严重的副作用，导致心脏、肝脏、大脑和肾的损伤。
技术实现思路
基于现有技术中存在的上述问题，本专利技术以人血清白蛋白交联阿霉素，通过人血清白蛋白增强对肿瘤的靶向性，减少阿霉素的毒副作用。本专利技术意外发现了人血清白蛋白交联的阿霉素能够选择性的靶向乳腺癌细胞，能够用于乳腺癌治疗，并且经过标记后还可用于乳腺癌活体成像检测。另外，对于治疗效果而已，人血清白蛋白交联的阿霉素，与同等活性剂量的阿霉素(未交联)相比，肿瘤治疗效果更高，安全性也更好。具体而言，一方面，本专利技术提供人血清白蛋白-阿霉素交联物在制备肿瘤检测剂中的用途，所述人血清白蛋白-阿霉素交联物是基于小分子交联技术，将阿霉素分子交联在白蛋白上形成的纳米颗粒。本专利技术所述人血清白蛋白-阿霉素交联物在制备肿瘤检测剂中的用途，其中所述人血清白蛋白-阿霉素是经过标记的，所述肿瘤检测剂为活体成像剂。本专利技术所述的用途，其中所述的肿瘤为乳腺癌，所述的标记为Cy5.5标记。第二方面，本专利技术提供人血清白蛋白-阿霉素交联物在制备治疗肿瘤药物中的用途，所述人血清白蛋白-阿霉素交联物是基于小分子交联技术，将阿霉素分子交联在白蛋白上形成的纳米颗粒。本专利技术所述人血清白蛋白-阿霉素交联物在制备治疗肿瘤药物中的用途，其中所述肿瘤为乳腺癌。本专利技术所述人血清白蛋白-阿霉素交联物在制备治疗肿瘤药物中的用途，其中所述治疗肿瘤的药物是选择性杀伤乳腺癌细胞的药物。本专利技术所述人血清白蛋白-阿霉素交联物在制备治疗肿瘤药物中的用途，其中所述治疗肿瘤的药物是抑制乳腺癌细胞淋巴结转移的药物。第三方面，本专利技术提供一种乳腺癌治疗药物，包括人血清白蛋白-阿霉素交联物纳米颗粒，其是将阿霉素分子通过小分子交联技术交联在人血清白蛋白上形成纳米颗粒，所述纳米颗粒平均粒径约为25nm；HSA与DOX的比例为1:3。第四方面，本专利技术提供一种人血清白蛋白-阿霉素交联物的制备方法，包括：(1)白蛋白预活化，将白蛋白与SPDP反应制备带有吡啶二巯基的白蛋白；(2)预活化白蛋白的还原，将预活化的白蛋白还原制备巯基活化的白蛋白；(3)交联，将ALDOX缓慢加入步骤(2)制备的巯基活化白蛋白中获得人血清白蛋白-阿霉素交联物。本专利技术所述人血清白蛋白-阿霉素交联物的制备方法，其特征在于所述人血清白蛋白-阿霉素交联物为纳米颗粒，平均粒径为25nm；其中，HSA与DOX的比例为1:3。与现有技术相比，本专利技术的技术方案具有以下优点：(1)本专利技术发现了白蛋白的肿瘤靶向性，特别是乳腺癌细胞靶向性，从而通过交联技术将阿霉素特异性运送至肿瘤组织，由于白蛋白交联阿霉素药物在肿瘤部位靶向富集后，会在肿瘤组织局部酸性微环境下缓慢释放阿霉素分子、递送至肿瘤细胞核内，从而特异性地对肿瘤细胞产生杀伤作用而不影响其他正常组织。从而实现肿瘤的成像和/或治疗。(2)本专利技术的人血清白蛋白、阿霉素、标记物(如Cy5.5)三元复合物除了能够治疗肿瘤以外，还能够实现肿瘤细胞的靶向成像，具体验证了对乳腺癌细胞的靶向成像，所述三元复合物的成像检测结果与Luciferase成像结果一致，表明其可靠性和准确性。另外，对于乳腺癌的诊断，本专利技术三元复合物能够准确诊断乳腺癌细胞是否发生淋巴结转移。(3)本专利技术的人血清白蛋白-阿霉素交联物，与同等活性剂量的阿霉素(未交联)相比，肿瘤治疗效果更高，并且由于使用剂量更低、具有缓释效果因而安全性更好。(4)本专利技术制备方法获得的人血清白蛋白-阿霉素交联物为纳米颗粒，不仅因交联了HSA而改善了药物代谢特征，而且由于特定的交联剂和交联方法使得交联产物表现出pH响应特性。在正常体液的近中性pH条件下所述人血清白蛋白-阿霉素纳米颗粒保持稳定，而在肿瘤微环境的低pH值酸性条件下所述人血清白蛋白-阿霉素纳米颗粒能缓慢的释放活性DOX分子，从而进一步强化了HSA-DOX肿瘤特异性。附图说明通过阅读下文优选实施方式的详细描述，各种其他的优点和益处对于本领域普通技术人员将变得清楚明了。附图仅用于示出优选实施方式的目的，而并不认为是对本专利技术的限制。而且在整个附图中，用相同的参考符号表示相同的部件。在附图中：图1：人血清白蛋白-阿霉素交联纳米颗粒粒径分布图2：阿霉素吸光度和浓度标准曲线图3：HSA-DOX的肿瘤细胞定位图4：HSA-DOX选择性杀伤乳腺癌细胞图5：HSA-DOX体内肿瘤靶向性，7h、24h、48h的活体成像图，左边为对照组，右边为HSA-DOX实验组图6：HSA-DOX靶向肿瘤的淋巴结转移图7：小鼠动物实验Luciferase成像图图8：移植瘤小鼠肿瘤体积生长曲线图9：移植瘤小鼠体重变化曲线具体实施方式下面将参照附图更详细地描述本公开的示例性实施方式。虽然附图中显示了本公开的示例性实施方式，然而应当理解，可以以各种形式实现本公开而不应被这里阐述的实施方式所限制。相反，提供这些实施方式是为了能够更透彻地理解本公开，并且能够将本公开的范围完整的传达给本领域的技术人员。根据本专利技术的实施方式，提出以下实施例实施例1、利用蛋白小分子交联技术将白蛋白与阿霉素进行交联HSA-DOX的制备方法称取5mg白蛋白粉末，溶于10mL浓度为1mM的pH7.5的EDTA溶液，加入8μL的500mMSPDP溶液。室温震荡反应2h，使SPDP与白蛋白上的氨基进行反应，形成白蛋白与SPDP的偶联产物。反应后用Millipore10kD超滤管进行超滤，除去未反应的游离SPDP分子，并用EDTA溶液洗三次。将其溶于10mL浓度为1mMpH7.5的EDTA溶液中，加入6mgDTT，室温震荡反应1h。反应后用Millipore10kD超滤管进行超滤，除去未反应的游离DTT分子，并用EDTA溶液洗三次，将反应产物溶于7mL浓度为1mMpH7.5的EDTA溶液中。取15μL100mM的AlDOX(Aldox购买自MedChemExpress公司，CASNo.:1361644-26-9)溶液，加入3mL的DMSO中并混匀。将3mL溶液缓慢加入7mL蛋白溶液中，并在加入过程中摇匀，室温振荡反应过夜。反应后用Millipore10kD超滤管进行超滤，除去未反应的游离AlDOX分子，用去离子水洗三次后将产物置于-20℃保存。HSA-DOX的表征对制备的HSA-DOX进行表征，将HSA-DOX溶液置于比色皿中，放入动态光散射仪器进行测定，结果如图1所示，证明HSA-DOX是粒径为25nm左右的纳米颗粒(图1)。将阿霉素稀释为不同的浓度本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.人血清白蛋白‑阿霉素交联物在制备肿瘤检测剂中的用途，所述人血清白蛋白‑阿霉素交联物是基于小分子交联技术，将阿霉素分子交联在白蛋白上形成的纳米颗粒。
【技术特征摘要】
1.人血清白蛋白-阿霉素交联物在制备肿瘤检测剂中的用途，所述人血清白蛋白-阿霉素交联物是基于小分子交联技术，将阿霉素分子交联在白蛋白上形成的纳米颗粒。2.如权利要求1所述人血清白蛋白-阿霉素交联物在制备肿瘤检测剂中的用途，其特征在于所述人血清白蛋白-阿霉素是经过标记的，所述肿瘤检测剂为活体成像剂。3.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的肿瘤为乳腺癌，所述的标记为Cy5.5标记。4.人血清白蛋白-阿霉素交联物在制备治疗肿瘤药物中的用途，所述人血清白蛋白-阿霉素交联物是基于小分子交联技术，将阿霉素分子交联在白蛋白上形成的纳米颗粒。5.如权利要求4所述人血清白蛋白-阿霉素交联物在制备治疗肿瘤药物中的用途，其特征在于所述肿瘤为乳腺癌。6.如权利要求4或5所述的用途，其特征在于所述治疗肿瘤的药物是选择性杀伤乳腺癌细胞的药物。7.如...
【专利技术属性】
技术研发人员：林坚，许诺，陈龙，
申请(专利权)人：浙江海正药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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