【技术实现步骤摘要】
基于CRISPR的基因组修饰和调控本申请是申请日为2013年12月5日,申请号为201380072477.4,专利技术名称为“基于CRISPR的基因组修饰和调控”的专利技术专利的分案申请。
本公开内容涉及靶基因组修饰。具体而言,本公开涉及RNA指导的核酸内切酶或包含CRISPR/Cas样蛋白的融合蛋白和使用所述蛋白修饰修饰或调控靶染色体序列的方法。专利技术背景靶基因组修饰是用于真核细胞、胚胎和动物的基因操作的有力的工具。例如,外源序列可以被整合在靶基因组位置和/或特定的内源染色体序列可以被缺失、失活或修饰。当前的方法依赖于工程化核酸酶的使用,工程化核酸酶例如,锌指核酸酶(ZFNs)或转录激活子样效应子核酸酶(TALENs)。这些嵌合核酸酶含有与非特异性DNA剪切结构域连接的可编程的、序列特异性的DNA结合组件。但是,各个新的基因组靶需要设计包含新的序列特异性的DNA-结合组件的新ZFN或TALEN。因此,这些用户定制设计的核酸酶往往制备昂贵且耗时。此外,ZFNs和TALENS的特异性使得它们能介导脱靶剪切。因此,需要不要求针对每个新的靶基因组位置设计新的核酸酶的靶基因组修饰技术。另外,需要特异性增加的具有很少或没有脱靶作用的技术。专利技术概述在本公开内容的不同方面之中提供分离的RNA指导的核酸内切酶,其中所述核酸内切酶包含至少一个核定位信号、至少一个核酸酶结构域和至少一个与指导RNA相互作用以将核酸内切酶靶向用于剪切的特定核苷酸序列的结构域。在一个实施方案中,所述核酸内切酶可衍生自Cas9蛋白。在另一实施方案中,所述核酸内切酶可经修饰而缺失至少一个功能 ...
【技术保护点】
1.一种工程化RNA指导的核酸内切酶复合物,其包含:指导RNA,其包含:(i)与真核生物染色体序列中的靶位点互补的第一区域,所述第一区域可与靶位点碱基配对,所述第一区域包含约10个核苷酸至超过约25个核苷酸,(ii)形成茎和环结构的第二区域,和(iii)基本单链的第三区域,其中(i)、(ii)和(iii)以5'至3'方向排列,并且指导RNA包含两个分开的分子,其中在指导RNA和II型CRISPR/Cas9蛋白之间形成蛋白‑RNA复合物,其进一步包含核定位信号,并且通过指导RNA、II型CRISPR/Cas9蛋白和靶位点之间的相互作用将蛋白‑RNA复合物指导至靶位点。
【技术特征摘要】
2012.12.06 US 61/734256;2013.01.30 US 61/758624;201.一种工程化RNA指导的核酸内切酶复合物,其包含:指导RNA,其包含:(i)与真核生物染色体序列中的靶位点互补的第一区域,所述第一区域可与靶位点碱基配对,所述第一区域包含约10个核苷酸至超过约25个核苷酸,(ii)形成茎和环结构的第二区域,和(iii)基本单链的第三区域,其中(i)、(ii)和(iii)以5'至3'方向排列,并且指导RNA包含两个分开的分子,其中在指导RNA和II型CRISPR/Cas9蛋白之间形成蛋白-RNA复合物,其进一步包含核定位信号,并且通过指导RNA、II型CRISPR/Cas9蛋白和靶位点之间的相互作用将蛋白-RNA复合物指导至靶位点。2.权利要求1的工程化RNA指导的核酸内切酶复合物,其中指导RNA的第二区域的长度为约16个至约60个核苷酸。3.权利要求1或2的工程化RNA指导的核酸内切酶复合物,其中指导RNA的第三区域的长度为约5个至约60个核苷酸。4.权利要求1至3中任一项的工程化RNA指导的核酸内切酶复合物,其中指导RNA的第一分子包含指导RNA的第一区域和指导RNA的第二区域的茎的一半。5.权利要求1至4中任一项的工程化RNA指导的核酸内切酶复合物,其中指导RNA的第二分子包含指导RNA的第二区域的茎的另一半和指导RNA的第三区域。6.权利要求1至5中任一项的工程化RNA指导的核酸内切酶复合物,其中II型CRISPR/Cas9蛋白仅包含一个功能性核酸酶结构域。7.权利要求6的工程化RNA指导的核酸内切酶复合物,其中II型CRISPR/Cas9蛋白包含非功能性RuvC样结构域。8.权利要求6的工程化RNA指导的核酸内切酶复合物,其中II型CRISPR/Cas9蛋白包含非功能性HNH样结构域。9.权利要求1至8中任一项的工程化RNA指导的核酸内切酶复合物,其中II型CRISPR/Cas9蛋白来自链球菌物种。10.权利要求9的工程化RNA指导的核酸内切酶复合物,其中II型CRISPR/Cas9蛋白来自酿脓链球菌。11.权利要求1至10中任一项的工程化RNA指导的核酸内切酶复合物,其中I...
【专利技术属性】
技术研发人员:F陈,GD戴维斯,
申请(专利权)人:西格马奥尔德里奇有限责任公司,
类型:发明
国别省市:美国,US
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。