低极性稀有人参皂苷ΔPPD和ΔPPT的制备方法技术

本发明专利技术提供了包含有稀有人参皂苷准单体化合物ΔPPD(包含Δ(20‑21)PPD以及同分异构体Δ(20‑22)PPD)和稀有人参皂苷准单体化合物ΔPPT(包含Δ(20‑21)PPT以及同分异构体Δ(20‑22)PPT)的制备方法，相比现有的制备稀有人参皂苷的方法，此制备方法简单、成本较低，同时在此基础上，本发明专利技术还提供了制备稀有人参皂苷单体化合物Δ(20‑21)PPD、Δ(20‑22)PPD和稀有人参皂苷单体化合物Δ(20‑21)PPT、Δ(20‑22)PPT的方法；此方法通过简单的柱层析分离技术，可以低成本、高效率和大规模地分离制备稀有人参皂苷准单体化合物ΔPPD及其单体成分和稀有人参皂苷准单体化合物ΔPPT及其单体成分。

Preparation of low polarity rare ginsenoside PPD and PPT

The present invention provides a method for preparing rare ginsenoside quasi-monomer compound_PPD (containing_(20_21) PPD, isomer_(20_22) PPD, and rare ginsenoside quasi-monomer compound PPT (containing_(20_21) PPT, and isomer(20_22) PPT, as compared with existing methods for preparing rare ginsenoside. On the basis of simple preparation method and low cost, the invention also provides a method for preparing rare ginsenoside monomer compounds_(20_21) PPD, _(20_22) PPD and rare ginsenoside monomer compounds_(20_21) PPT and_(20_22) PPT, which can be low cost and high by simple column chromatography separation technology. Rare ginsenoside quasi-monomer compound PPD and its monomer components, and rare ginsenoside quasi-monomer compound PPT and its monomer components were separated and prepared efficiently and on a large scale.

【技术实现步骤摘要】
低极性稀有人参皂苷ΔPPD和ΔPPT的制备方法
本专利技术涉及医药领域，具体涉及一类低极性稀有人参皂苷的制备方法。
技术介绍
癌症是残害人类生命的世界第二大疾病，死亡率仅次于心脑血管疾病，是人类死亡的最主要因素之一。由世卫组织组织下属的的官方癌症机构国际癌症研究中心(IARC)负责的最新版《世界癌症报告》预测，全球癌症病例将呈现迅猛增殖态势，由2012年的1400万人，逐年迅增至2025年的1900万人，到2035年将达到2400万人。报告还显示，2012年全球新增癌症病例有近一半出现在亚洲，其中大部分在中国，中国新增癌症病例高居首位。2012年中国新增307万癌症患者并造成约220万人死亡，分別占全球总量的21.9％和26.8％。世卫的数据略低于中国自己的统计。全国肿瘤登记中心发布的2012年数据显示，中国每年新增癌症病例约350万，约有250万人因此死亡。现今癌症的常用治疗方法主要有三种模式：手术、放疗和药物治疗，而选定哪个治疗方法则取决于肿瘤的位置、恶性程度、发展程度以及病人身体状态。三种模式中，手术的治疗方法，常因为癌细胞入侵蔓延到邻近组织或远端转移而效果有限；放疗的治疗方法，则受限于对体内其他正常组织造成的伤害；药物的治疗方法，对于晚期弥散性和转移性恶性肿瘤是最基本的治疗方法。过去的几十年里，着眼于直接杀伤肿瘤细胞的化疗虽有明显的发展和进步，成为肿瘤药物治疗的中坚，但这一治疗模式对增殖缓慢的实体瘤效果差、药物选择性小、毒副反应多且严重的缺陷成为临床治疗中的重要限制因素。继手术、放疗和化疗之后的第四种模式是肿瘤的生物治疗，其主要是通过肿瘤宿主防御机制或生物制剂的作用来调节机体自身的生物学反应，从而抑制或消除肿瘤；生物治疗虽然没有太大毒副作用，但由于技术要求严、工艺复杂，因此价格高，众多癌症患者及家属难以承受，影响其在癌症治疗领域的普及。由于存在上述各种限制，天然抗肿瘤药物的研发取得了越来越多的关注。天然抗癌药物无论是在抑制或杀伤肿瘤细胞、调整机体免疫功能、改善症状与特征和减轻放化疗毒副作用上，还是在肿瘤的病后调理上，均具有重要作用。由此，天然植物新疗法将成为继手术、放疗、化疗和生物疗法之后的第五种模式。五加科(araliaceae)人参属(Pana×)植物，如人参(P.ginseng)、西洋参(P.quenquefolinus)、三七(P.notoginseng)、竹节参(P.uaponicus)，葫芦科绞股蓝属植物绞股蓝(GynostemmaoentaphyllumThrunbMak)等均为中国名贵的传统药用植物，其主要有效成分为达玛烷型四环三萜人参皂苷系列化合物。目前已发现五加科植物中的原型人参皂苷有60多种，可分为两大类：1)二醇组人参皂苷(Ra、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd等)；2)三醇组人参皂苷(Re、Rf、Rg1、Rg2、Rh1等)，皆由甙元和糖组成，通常易溶于水，其疗效主要包括：免疫调节功能、改善微循环作用、调节消化机能、增强记忆和学习能力、抗衰老、安神等，但并没有表现出明显的抗肿瘤活性。低极性稀有人参皂苷在原人参属植物中含量甚微，只存在于野山参，或者红参、黑参和熟三七等炮制的人参和三七产品中，也仅为万分之几，且难溶于水，通常只溶解在乙醇或乙酸乙酯等低极性有机溶剂中，被称为低极性稀有人参皂苷，主要包括原型人参皂苷通过糖苷键降解而产生的次级代谢衍生物(C-k、Rg3、Rh2、Rh1、aPPD、aPPT等)和侧链同时脱糖脱水形成的具有多双键结构的转化衍生物(Rg5、Rk1、Rh3、Rk2、Δ(20-21)PPD、Δ(20-22)PPD、Rh4、Rk3、F4、Rg6、Δ(20-21)PPT、Δ(20-22)PPT等)。低极性稀有人参皂苷除了具有普通原型人参皂苷原有的生物活性之外，还表现出原型皂苷不具有的抗肿瘤、抗病毒等全新的药物活性，具有极高的药用价值和应用前景。长谷川秀夫(日本公开特许8-291194)报道的制备方法为:酸水解天然或3位羟基游离的人参皂苷，水解产物经常规和色谱分离后可获得Δ(20-22)PPT和Δ(20-22)PPD单品。酸水解人参皂苷的主要产物为侧链环化的人参三醇和人参二醇，Δ(20-22)PPT和Δ(20-22)PPD仅是微量副产物，因而，该专利所提供的制备Δ(20-22)PPT和Δ(20-22)PPD方法定向转化率低，产物收率低、分离纯化难度高，不适应工业生产。·中国专利CN1249076C、CN1249077C和CN1269835C都报道了新的化合物：1、3β，6α，12β-三羟-20(21)，24(25)-二烯-达玛烷[dammar-3β，6α，12β-trihydro×yl-20(21)，24(25)-diene，简称Δ(20-21)PPT。Δ(20-21)PPT是Δ(20-22)PPT构型异构体，具有Δ(20-22)PPT类似的生物活性；及2、:3β，12β-二羟-20(21)，24(25)-二烯-达玛烧[dammar-3β,12β-dihydroxyl-20(21),24(25)-diene,简称Δ(20-21)PPD]。Δ(20-21)PPD是Δ(20-22)PPD构型异构体，具有Δ(20-22)PPD类似的生物活性，上述这几种化合物需要利用价格昂贵的原人参三醇组原料或单体原料人参皂苷F1生产制备，或是需要利用价格昂贵的原人参二醇组原料或单体原料人参皂苷C-K生产制备，均是工业化批量制备成本高，不能有效解决Δ(20-22)PPT和Δ(20-22)PPD的供给短缺的矛盾。截止目前为止，国内外市场上仍然没有一家企业可以同时大规模地制造高含量(>30-90％)的稀有代谢人参皂苷和稀有转化人参皂苷，其中包括抗癌活性较高的Δ(20-21)PPT、Δ(20-22)PPT、Δ(20-21)PPD和Δ(20-22)PPD。因此，研究上述两种低极性稀有人参皂苷的制备方法，对发现活性更强的成分和研制抗肿瘤新药将具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供了包含有稀有人参皂苷准单体化合物ΔPPD和准单体化合物ΔPPT的制备方法，在此基础上，本专利技术还分别提供了稀有人参皂苷单体准单体化合物ΔPPD和准单体化合物ΔPPT的纯化制备方法。本专利技术第一方面提供了上述稀有人参皂苷的制备方法，其包括：在含有低极性稀有人参皂苷的热解五加科植物茎叶提取物中依次加入正丙醇，金属钠，过氧化苯甲酰，并通氧气，并把反应液加热反应制得，其中，所述含有低极性稀有人参皂苷的热解五加科植物优选自野山参、红参、黑参、西洋参和三七；在一优选例中，所述加热反应在四口瓶中进行，所述四口瓶装有温度计、氧气通入管、顶上连有密封橡胶管，冷凝管，所述橡胶管另一端连接漏斗，所述漏斗浸入装有液体石蜡的烧杯，在一优选例中，加入正丙醇之后搅拌10分钟，在一优选例中，加入金属钠，反应至无氢气放出，在一优选例中，所述加热反应为86℃反应24小时，在一优选例中，所述加热反应结束后，将反应液冷却到室温，然后水洗反应液，将反应液的正丙醇层减压抽干后用水溶解，然后用正己烷萃取低极性物质，再然后用乙酸乙酯萃取，蒸干乙酸乙酯部分得到稀有人参皂苷。在一优选例中，将制得的所述稀有人参皂苷加入乙酸乙酯溶液超声，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种稀有人参皂苷的制备方法，其包括：在含有低极性稀有人参皂苷的热解五加科植物茎叶提取物中依次加入正丙醇，金属钠，过氧化苯甲酰，并通氧气，并把反应液加热反应制得，其中，所述含有低极性稀有人参皂苷的热解五加科植物优选自野山参、红参、黑参、西洋参和三七；任选的，所述加热反应在四口瓶中进行，所述四口瓶装有温度计、氧气通入管、顶上连有密封橡胶管，冷凝管，所述橡胶管另一端连接漏斗，所述漏斗浸入装有液体石蜡的烧杯，任选的，加入正丙醇之后搅拌10分钟，任选的，加入金属钠，反应至无氢气放出，任选的，所述加热反应为86℃反应24小时，任选的，所述加热反应结束后，将反应液冷却到室温，然后水洗反应液，将反应液的正丙醇层减压抽干后用水溶解，然后用正己烷萃取低极性物质，再然后用乙酸乙酯萃取，蒸干乙酸乙酯部分得到稀有人参皂苷。

【技术特征摘要】
1.一种稀有人参皂苷的制备方法，其包括：在含有低极性稀有人参皂苷的热解五加科植物茎叶提取物中依次加入正丙醇，金属钠，过氧化苯甲酰，并通氧气，并把反应液加热反应制得，其中，所述含有低极性稀有人参皂苷的热解五加科植物优选自野山参、红参、黑参、西洋参和三七；任选的，所述加热反应在四口瓶中进行，所述四口瓶装有温度计、氧气通入管、顶上连有密封橡胶管，冷凝管，所述橡胶管另一端连接漏斗，所述漏斗浸入装有液体石蜡的烧杯，任选的，加入正丙醇之后搅拌10分钟，任选的，加入金属钠，反应至无氢气放出，任选的，所述加热反应为86℃反应24小时，任选的，所述加热反应结束后，将反应液冷却到室温，然后水洗反应液，将反应液的正丙醇层减压抽干后用水溶解，然后用正己烷萃取低极性物质，再然后用乙酸乙酯萃取，蒸干乙酸乙酯部分得到稀有人参皂苷。2.根据权利要求1的制备方法，其特征在于，将制得的所述稀有人参皂苷加入乙酸乙酯溶液超声，再加入的正己烷摇匀静置后过滤，过滤得到滤渣再加入的乙酸乙酯超声后，加入的正己烷摇匀静置后过滤，合并滤液并浓缩；任选的，所述加入乙酸乙酯溶液超声30min。3.根据权利要求1的制备方法，其特征在于，取硅胶加入第一乙酸乙酯和正己烷溶剂搅匀装柱，所述第一乙酸乙酯和正己烷溶剂中乙酸乙酯正己烷的体积比为1:2，将所述合并滤液得到的浓缩液和硅胶拌样，并将拌样后的...

【专利技术属性】
技术研发人员：余佩华，
申请(专利权)人：深圳以诺生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44