Modified lysosomal proteins, methods for preparing modified lysosomal proteins, and therapeutic uses of such modified proteins are disclosed. A method of treating a mammal suffering from lysosomal storage disease is also disclosed. In particular, the present disclosure relates to a method for preparing modified lysosome proteins, which include: the reaction of glycosylated lysosome proteins with alkali metal periodate, and the reaction of the lysosomal protein with the alkali metal borohydride, lasting no more than the time period of 2h, so as to modify the polysaccharide of the lysosomal protein. It also reduced the activity of lysosomal protein to the recognition receptor of glycans.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】修饰的溶酶体蛋白及其产生
本公开内容涉及修饰的溶酶体蛋白、包含修饰的溶酶体蛋白的组合物以及用于产生修饰的溶酶体蛋白的方法。此外，公开了修饰的溶酶体蛋白在疗法诸如在治疗溶酶体贮积症中的用途。背景溶酶体贮积症溶酶体区室作为降解细胞中的废弃物质的分解代谢机器发挥作用。降解通过被特别地区室化至溶酶体的许多水解酶和转运蛋白来实现。现今，存在超过40种其中已在疾病和编码溶酶体蛋白的基因中的突变之间建立了联系的已鉴定的遗传性疾病。这些疾病被定义为溶酶体贮积症(LSD)，并以由降解能力不足造成的不能被降解的代谢物(或多种代谢物)的累积为特征。代谢物的过量溶酶体贮积的结果是，溶酶体尺寸增加。积累的贮积物质如何引起病理尚不完全清楚，但可能涉及机制诸如抑制自噬和诱导细胞凋亡(Cox&Cachón-González,JPathol226:241-254(2012))。酶/蛋白替代疗法由突变或缺失的蛋白引起的缺失功能可以通过施用来自异源来源的蛋白并且因此用来自异源来源的蛋白替代突变/缺失的蛋白来恢复。这已被证明用于多种疾病领域。在血友病领域内，已成功地采用了为凝血途径中活化复合物的一部分的酶(诸如IX因子和VII因子)和蛋白(诸如VIII因子)两者的施用。这些组分当然存在于血液中，并且因此很容易将蛋白施用至其作用部位。在溶酶体贮积症领域中，贮积可以通过施用来自异源来源的溶酶体酶来降低。被充分地确认的是，静脉施用溶酶体酶导致其经由被称为受体介导的胞吞的机制被细胞快速摄取。该胞吞由细胞表面上的受体介导，并且特别地两个甘露糖-6-磷酸受体(M6PR)已被证明对某些溶酶体酶的摄...
【技术保护点】
1.一种制备修饰的溶酶体蛋白的方法，所述方法包括：a)使糖基化的溶酶体蛋白与碱金属高碘酸盐反应不超过4h的时间段；以及b)使所述溶酶体蛋白与碱金属硼氢化物反应不超过2h的时间段；从而修饰所述溶酶体蛋白的聚糖部分，并且降低所述溶酶体蛋白对聚糖识别受体的活性，条件是所述蛋白不是磺酰胺酶。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.01 EP 15187877.41.一种制备修饰的溶酶体蛋白的方法，所述方法包括：a)使糖基化的溶酶体蛋白与碱金属高碘酸盐反应不超过4h的时间段；以及b)使所述溶酶体蛋白与碱金属硼氢化物反应不超过2h的时间段；从而修饰所述溶酶体蛋白的聚糖部分，并且降低所述溶酶体蛋白对聚糖识别受体的活性，条件是所述蛋白不是磺酰胺酶。2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤b)另外通过i)-iv)中的至少一个，诸如至少两个，诸如全部表征：i)所述碱金属硼氢化物为硼氢化钠；ii)所述硼氢化物以不超过所述高碘酸盐的浓度的4倍，诸如不超过所述高碘酸盐的浓度的3倍，诸如不超过所述高碘酸盐的浓度的2.5倍，诸如所述高碘酸盐的浓度的0.5倍至4倍的浓度来使用；iii)所述反应进行不超过2h，诸如不超过1.5h，诸如不超过1h，诸如不超过0.75h，诸如约0.5h的时间段；以及iv)所述反应在0℃和8℃之间的温度进行。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中步骤a)另外通过i)-v)中的至少一个，诸如至少两个，诸如至少三个，诸如至少四个，诸如至少全部表征：i)所述碱金属高碘酸盐为偏高碘酸钠；ii)所述高碘酸盐以不超过20mM，诸如不超过15mM、诸如约10mM的浓度来使用；iii)所述反应在0℃和22℃之间的温度，诸如0℃-8℃的温度，诸如在0℃-4℃的温度，诸如约8℃，诸如约0℃来进行；iv)所述反应进行不超过3h，诸如不超过2h，诸如不超过1h，诸如约0.5h的时间段，以及v)步骤a)的所述反应在3至7的pH进行。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中步骤a)进行不超过3h的时间段，并且步骤b)进行不超过1h，并且所述硼氢化物任选地以不超过所述高碘酸盐的浓度的4倍的浓度来使用。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中步骤a)和步骤b)顺序进行，而不进行任何透析、超滤、沉淀或缓冲液交换。6.一种制备修饰的溶酶体蛋白的方法，所述方法包括：a)使糖基化的溶酶体蛋白与碱金属高碘酸盐反应，以及b)使所述溶酶体蛋白与碱金属硼氢化物反应；从而修饰所述溶酶体蛋白的聚糖部分，并且降低所述溶酶体蛋白对聚糖识别受体的活性，其中所述溶酶体蛋白的活性位点或功能表位在步骤a)和b)中的至少一个步骤期间无法进行氧化和/或还原反应。7.根据权利要求6所述的方法，其中步骤b)另外通过i)-iv)中的至少一个，诸如至少两个，诸如全部表征：i)所述碱金属硼氢化物为硼氢化钠；ii)所述硼氢化物以不超过所述高碘酸盐的浓度的4倍，诸如不超过所述高碘酸盐的浓度的3倍，诸如不超过所述高碘酸盐的浓度的2.5倍，诸如所述高碘酸盐的浓度的0.5倍至4倍的浓度来使用；iii)所述反应进行不超过2h，诸如不超过1.5h，诸如不超过1h，诸如不超过0.75h，诸如约0.5h的时间段；以及iv)所述反应在0℃和8℃之间的温度进行。8.根据权利要求6或7所述的方法，其中步骤a)另外通过i)-v)中的至少一个，诸如至少两个，诸如至少三个，诸如至少四个，诸如至少全部表征：i)所述碱金属高碘酸盐为偏高碘酸钠；ii)所述高碘酸盐以不超过20mM，诸如不超过15mM、诸如约10mM的浓度来使用；iii)所述反应在0℃和22℃之间的温度，诸如0℃-8℃的温度，诸如在0℃-4℃的温度，诸如约8℃，诸如约0℃来进行；iv)所述反应进行不超过3h，诸如不超过2h，诸如不超过1h，诸如约0.5h的时间段，以及v)所述步骤a)的反应在3至7的pH进行。9.根据权利要求6至8中任一项所述的方法，其中步骤a)进行不超过3h的时间段，且步骤b)进行不超过1h，并且所述硼氢化物任选地以不超过所述高碘酸盐的浓度的4倍的浓度来使用。10.根据权利要求6至9中任一项所述的方法，其中步骤a)和步骤b)顺序进行，而不进行任何透析、超滤、沉淀或缓冲液交换。11.根据权利要求1至10中的任一项所述的方法，其中所述修饰的溶酶体蛋白为硫酸酯酶；糖苷水解酶或蛋白酶。12.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述溶酶体蛋白选自脱氧核糖核酸酶-2-α；β-甘露糖苷酶；核糖核酸酶T2；溶酶体α-甘露糖苷酶；αL-艾杜糖苷酸酶；三肽基肽酶1；透明质酸酶-3；组织蛋白酶L2；蜡样脂褐质沉积症神经元蛋白5；葡糖神经酰胺酶；组织α-L-岩藻糖苷酶；髓过氧化物酶；α-半乳糖苷酶A；β-氨基己糖苷酶亚基α；组织蛋白酶D；鞘脂激活蛋白原；β-氨基己糖苷酶亚基β；组织蛋白酶L1；组织蛋白酶B；β-葡糖醛酸糖苷酶；组织蛋白酶H酶原；非分泌型核糖核酸酶；溶酶体α-葡糖苷酶；溶酶体保护性蛋白；γ-干扰素诱导型溶酶体巯基还原酶；耐酒石酸酸性磷酸酶5型；芳基硫酸酯酶A；前列腺酸性磷酸酶；N-乙酰葡糖胺-6-硫酸酯酶；芳基硫酸酯酶B；β-半乳糖苷酶；α-N-乙酰氨基半乳糖苷酶；鞘磷脂磷酸二酯酶；神经节苷脂GM2活化物；N(4)-(β-N-乙酰葡糖氨基)-L-天冬酰胺酶；艾杜糖醛酸2-硫酸酯酶...
【专利技术属性】
技术研发人员：埃里克·努德林，帕特里克·斯托姆博格，斯特凡·斯文森盖柳斯，
申请(专利权)人：瑞典孤儿比奥维特鲁姆有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞典,SE
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