The present invention relates to a method for improving glutathione yield, including the following steps: Pichiapastoris JQ is cultivated in the seed culture medium to 1 OD600 40, and the activated seed liquid is obtained, in which the pH of the seed medium is 3, 7, and the viable seed liquid is inoculated at 1 15% inoculates. The fermentation medium was fermented and cultured, in which the initial pH value of the fermentation medium was 4 and 7, the fermentation temperature was 25 and 35. When the fermentation culture reached 40 80, the glucose was added, and the amino acid and / or amino acid salt were supplemented when OD600 reached 100 300, of which amino acids were in the hair. The final concentration in the fermentation medium is 1 50mmol/L. The invention also provides the application of the above method in preparing products containing glutathione. The yield of glutathione was 3369mg/L, and the yield of glutathione was increased by 15 times compared with the control strain, indicating that the production of glutathione could be greatly improved by using this method, which provided a basis for the production of the glutathione.
【技术实现步骤摘要】
提高谷胱甘肽产量的方法
本专利技术涉及微生物发酵领域,尤其涉及一种提高谷胱甘肽产量的方法。
技术介绍
谷胱甘肽(GSH),即γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酰甘氨酸,是由L-谷氨酸、L-半胱氨酸和甘氨酸经肽键缩合而成的一种同时具有γ-谷氨酰基和巯基的生物活性三肽化合物。谷胱甘肽在生物体内有着多种重要的生理功能,被称为长寿因子和抗衰老因子,特别是对于维持生物体内适宜的氧化还原环境起着至关重要的作用。GSH作为一种多功能的生物活性添加剂在食品加工业中的应用将会愈来愈广,其需求量正日益增大。发酵法是利用廉价的糖类原料,通过微生物体内物质的代谢途径来进行GSH生物合成的方法。该法具有菌种易于培养、原料来源方便廉价、反应步骤简单、成本低、转化效率高、生产速率快等优点,该法已成为当前生产GSH的主要方法。目前,利用发酵法生产GSH,最常用的菌种是酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)和产朊假丝酵母(Candidautilis)。但由于反馈抑制效应以及γ-谷氨酰转肽酶的存在对细胞内合成的GSH的降解作用,因而不利于胞内GSH的积累,使得胞内GSH不能获得大量有效积累,因此很多菌株还无法达到工业化生产的要求。GSH的产量不仅与菌株的遗传特性有关,还与其所处的环境有着密切的关系。微生物的生长代谢是非常复杂的生化过程,需要大量的营养物质作为底物或诱导物,同时也有一些物质会对微生物的生长代谢产生抑制,即使是同一种物质也有可能随着浓度的变化而对GSH发酵产生不同影响的现象。随着发酵制品的商业化生产和应用的迅速增加,工业发酵的目标转为以最低的生产成本获得最大的产值和利 ...
【技术保护点】
一种提高谷胱甘肽产量的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将保藏编号为CCTCC No:M 2016664的巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)JQ在种子培养基中培养至OD600达到1.0‑40.0,得到活化后的种子液,其中培养过程中所述种子培养基的pH为3.0‑7.0;(2)将步骤(1)得到的所述活化后的种子液按1‑15%接种量接种至发酵培养基中进行发酵培养,其中所述发酵培养基的初始pH值为4.0‑7.0,发酵培养温度为25‑35℃;(3)当发酵培养至OD600达到40‑80时,开始补加葡萄糖;(4)继续发酵培养,当OD600达到100‑300时,补加氨基酸或其盐,其中氨基酸在发酵培养基中的终浓度为1‑50mmol/L。
【技术特征摘要】
1.一种提高谷胱甘肽产量的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将保藏编号为CCTCCNo:M2016664的巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)JQ在种子培养基中培养至OD600达到1.0-40.0,得到活化后的种子液,其中培养过程中所述种子培养基的pH为3.0-7.0;(2)将步骤(1)得到的所述活化后的种子液按1-15%接种量接种至发酵培养基中进行发酵培养,其中所述发酵培养基的初始pH值为4.0-7.0,发酵培养温度为25-35℃;(3)当发酵培养至OD600达到40-80时,开始补加葡萄糖;(4)继续发酵培养,当OD600达到100-300时,补加氨基酸或其盐,其中氨基酸在发酵培养基中的终浓度为1-50mmol/L。2.根据权利要求1所述的提高谷胱甘肽产量的方法,其特征在于,在步骤(1)之前,还包括以下步骤:将巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)JQ菌液接种至斜面培养基,在25-35℃下培养12-36h,得到高活性菌种。3.根据权利要求1所述的提高谷胱甘肽产量的方法,其特征在于:在步骤(1)中,所述种子培养基包括以下含量的各组分:葡萄糖5-50g/L,酵母提取物1-25g/L,蛋白胨5-50g/L。4.根据权利要求1所述的提高谷胱甘肽产量的方法,其特征在于:在步骤(2)中,所述发酵培养基包括以下含量的各组分:葡萄糖10-150g/L,酵母提取物1-15g/L,硫酸铵1-30g/L,K2HPO4·3H2O1-10g/L,镁盐0.1-100mmol/L,钙盐0.1-1...
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