The invention discloses a methanol fed batch fermentation process for Pichia pastoris expressing recombinant human collagen. The process of inoculating Pichia pastoris inoculation into the sterilized fermentation medium and cultivating the methanol flow and induction stage. The methanol flow acceleration is 0 ~ 32H, the methanol flow acceleration is 5.25 + 0.25L/h, and the middle stage of 33H ~ 96h, the methanol flow acceleration is 6.75 + 0.25L/h, 97h to the late stage of fermentation. The acceleration of the alcohol flow is 5.25 + 0.25L/h. The present invention can increase the demand of carbon source in Pichia pastoris at different metabolic stages when methanol is inducible. The invention has strong maneuverability, easy to form standardized documents, reduce the decline of production caused by technical errors, and is suitable for large-scale industrial production of recombinant human collagen.
【技术实现步骤摘要】
毕赤酵母表达重组人源胶原蛋白的甲醇流加发酵工艺
本专利技术属于发酵工程
，具体涉及一种毕赤酵母表达重组人源胶原蛋白的甲醇流加发酵工艺。
技术介绍
巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)表达系统是一种外源蛋白表达系统，既具有原核表达系统操作简易、易于培养、生长速度快、表达量高、成本低等优点，还具有原核生物表达系统不具有的对外源蛋白的修饰如糖基化、蛋白磷酸化等特点。美国Invitrogen公司构建开发了巴斯德毕赤酵母表达系统，并己成功地表达了几百种外源蛋白，成为目前常用的表达体系。其开发的发酵工艺，工业化分为一级、二级种子培养、甘油培养阶段、甘油流加阶段及甲醇诱导阶段。该工艺是目前巴斯德毕赤酵母表达生产外源蛋白，较为通用的发酵工艺(中国专利201010602114.5，201110327865.5)。毕赤酵母诱导表达阶段，甲醇不仅是诱导剂，且是细胞生长或维持代谢的唯一碳源和能源，故无论重组毕赤酵母的甲醇利用表型如何，甲醇浓度在毕赤酵母表达外源蛋白过程中的控制均十分关键。甲醇浓度太低，无法有效诱导醇氧化酶(AOX)的转录，进而影响外源蛋白表达效率，甲醇浓度...
【技术保护点】
毕赤酵母表达重组人源胶原蛋白的甲醇流加发酵工艺，其特征在于，包括以下步骤：将毕赤酵母菌种液接种到灭菌的发酵培养基中，培养至甲醇流加诱导阶段，甲醇流加诱导的0～32h的前期阶段，甲醇流加速度为5.25±0.25L/h，33h～96h的中期阶段，甲醇流加速度为6.75±0.25L/h，97h～发酵结束的后期阶段，甲醇流加速度为5.25±0.25L/h。
【技术特征摘要】
1.毕赤酵母表达重组人源胶原蛋白的甲醇流加发酵工艺，其特征在于，包括以下步骤：将毕赤酵母菌种液接种到灭菌的发酵培养基中，培养至甲醇流加诱导阶段，甲醇流加诱导的0～32h的前期阶段，甲醇流加速度为5.25±0.25L/h，33h～96h的中期阶段，甲醇流加速度为6.75±0.25L/h，97h～发酵结束的后期阶段，甲醇流加速度为5.25±0.25L/h。2.根据权利要求1所述的甲醇流加发酵工艺，其特征在于，包括以下步骤：将毕赤酵母菌种液接种到灭菌的发酵培发酵工艺，其特征在于，所述的毕赤酵母为巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris，保藏编号为CGMCCNo.5021。3.根据权利要求1所述的甲醇流加发酵工艺，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵健烽，黄建民，陶海，杜尔凤，冯丽萍，季乐，
申请(专利权)人：江苏江山聚源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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