用于产生树突细胞的组合物和方法技术

本文描述了采用识别肿瘤抗原的经引发的树突细胞治疗疾病，特别是癌症的组合物和方法。所述方法可包括储存、运送和/或培养树突细胞，其中所述树突细胞在硬表面上储存。描述了裂解方案，其中所述裂解不会导致细胞的完全裂解，以提供维持在细胞表面嵌入状态的细胞表面分子。还提供了用于治疗目的的非致死性登革病毒株。

Composition and method for producing dendritic cells

This article describes the composition and methods of dendritic cells used to identify tumor antigens in the treatment of diseases, especially cancer. The method may include storing, transporting and / or culturing dendritic cells, in which dendritic cells are stored on a hard surface. A cleavage plan is described, which does not cause complete lysis of cells to provide cell surface molecules that maintain the state of cell surface embedment. A non lethal dengue virus strain is also provided for therapeutic purposes.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于产生树突细胞的组合物和方法交叉引用本申请要求2015年9月26日提交的美国临时申请号62/284,434的权益，该美国临时申请通过引用以其全文并入本文。序列表本申请包含已经以ASCII格式电子提交的序列表，并且通过引用将其全部内容并入本文。于2016年9月22日创建的所述ASCII副本被命名为48253-703_601_SL.txt，并且大小是1831字节。
技术介绍
树突细胞(DC)是免疫系统的抗原呈递细胞。树突细胞吞没并加工少量细菌、病毒和其他病原体，之后将有关的蛋白质链靶标(抗原肽)呈递给识别并杀死病毒感染的细胞或癌细胞的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)以及产生抗体的B淋巴细胞。DC还吞没受损或死亡的细胞，并且DC是诱导1型应答(激活)、2型应答(耐受性)或0型应答(中性)所必需的。由于相同的20种氨基酸构成身体部分(自身)以及病原体(非自身)，因此DC必须不仅评估抗原结构，而且还要评估细胞因子和当时存在的其他信号传导环境。这种多层系统适当地防止免疫系统将自身误认为非自身的自身免疫性；以及需要中性应答来维持平衡的变态反应。这种内部检查和平衡的复杂系统被来源于“自身”细胞的肿瘤细胞所利用。肿瘤细胞通常分泌因子，如将应答免疫细胞转换为TH2型耐受性应答的转化生长因子β(TGFβ)。这使得肿瘤细胞的生长不受检查，并且常常得到免疫细胞的帮助。DC具有对CD4+和CD8+CTL进行编程以识别呈递的MHC(自身-蛋白质ID复合物)和相关肽的能力。然而，CTL随后必须决定是否将该细胞视为自身而加以忽略，或者，例如通过Fas/FasL或穿孔蛋白/粒酶B细胞死亡系统来启动裂解。该决定通常将依赖于CTL的激活状态、细胞因子环境和细胞损伤因子的存在或不存在，例如，热激蛋白质、Toll样受体激活信号等。在活动性病原体感染期间，这些系统被激活并帮助控制CTL对1型攻击模式的应答。与细胞毒性药物、辐射和手术不同，免疫疗法刺激免疫系统识别并杀死肿瘤细胞。已经在刺激免疫系统识别并破坏肿瘤细胞方面进行了许多尝试。由于选择作为免疫疗法之靶标的肽的自身性(self-identity)、免疫活化的缺乏、不良事件和/或肿瘤免疫逃避机制，因此这些尝试已经取得的成功较为有限。目前的细胞疗法例如树突细胞疗法在晚期癌症患者中诱导持久的、完全应答的能力很低(在大多数免疫原性癌症类型中为5-10％，在其他癌症类型中更低)。通常，树突细胞疗法由于低激活(例如，没有足够的免疫细胞来完全杀死全部癌细胞)、低靶向(例如，健康细胞被杀死并且/或者肿瘤细胞未被杀死)或免疫抑制的肿瘤微环境限制了药效而产生不太理想的结果。
技术实现思路
本文提供了用于产生经引发的树突细胞的方法，该方法包括：在硬表面上培养树突细胞；用次氯酸盐溶液裂解至少一个细胞以产生裂解物；使所述树突细胞与所述裂解物接触以产生经引发的树突细胞；以及使所述经引发的树突细胞成熟化，其中成熟化包括使所述经引发的树突细胞与toll样受体7激动剂或toll样受体8激动剂接触。本文进一步提供了方法，其中所述经引发的树突细胞产生至少约6ng/mLIL-12p70。本文进一步提供了方法，其中所述经引发的树突细胞产生至少约6.5ng/mLIL-12p70。本文进一步提供了方法，其中所述经引发的树突细胞产生约19ng/mLIL-12p70。本文进一步提供了方法，其中所述硬表面为塑料表面。本文进一步提供了方法，其中所述硬表面包含聚苯乙烯。本文进一步提供了方法，其中所述硬表面基本上不含降低由经引发的树突细胞产生的1型应答的组分。本文进一步提供了方法，其中所述组分选自氟化聚乙烯、氟化聚丙烯和邻苯二甲酸酯。本文进一步提供了方法，其中所述裂解物包含多个完整细胞。本文进一步提供了方法，其中所述toll样受体7激动剂或toll样受体8激动剂为咪唑并喹啉化合物。本文进一步提供了方法，其中所述咪唑并喹啉化合物为R848。本文进一步提供了方法，其中成熟化包括使经引发的树突细胞与(i)toll样受体2激动剂或toll样受体4激动剂或(ii)干扰素γ接触。本文进一步提供了方法，其中所述toll样受体2激动剂或toll样受体4激动剂为脂多糖。本文进一步提供了方法，其中成熟化进一步包括使经引发的树突细胞与(i)toll样受体2激动剂或toll样受体4激动剂和(ii)干扰素γ接触。本文进一步提供了方法，其中成熟化包括使经引发的树突细胞与R848、脂多糖和干扰素γ接触。本文进一步提供了方法，其中所述至少一个细胞为肿瘤细胞。本文进一步提供了方法，其中所述树突细胞对受试者而言是自体的或同种异体的。本文进一步提供了方法，其中所述树突细胞是与受试者相HLA匹配的同种异体细胞。本文进一步提供了方法，该方法包括从受试者获得至少一个细胞，其中所述细胞与有害的疾病状态有关。本文进一步提供了方法，其中所述有害的疾病状态为增生性病症或自身免疫病症。本文进一步提供了方法，其中成熟化进一步包括使经引发的树突细胞与(i)toll样受体2激动剂、toll样受体4激动剂或(ii)干扰素γ接触。本文进一步提供了方法，其中所述toll样受体2激动剂或toll样受体4激动剂为脂多糖。本文进一步提供了方法，其中成熟化进一步包括使经引发的树突细胞与(i)toll样受体2激动剂或toll样受体4激动剂和(ii)干扰素γ接触。本文进一步提供了方法，其中成熟化包括使经引发的树突细胞与R848、脂多糖和干扰素γ接触。本文进一步提供了方法，其中经引发的树突细胞群体在冷冻和解冻之后具有超过70％的活力。本文进一步提供了方法，其中经引发的树突细胞群体在冷冻和解冻之后具有约71％至约79％的活力。本文提供了用于产生经引发的树突细胞的方法，该方法包括：在硬表面上培养树突细胞；从受试者获得至少一个癌细胞；用次氯酸盐溶液裂解所述至少一个癌细胞以产生裂解物；使所述树突细胞与所述裂解物接触以产生经引发的树突细胞；以及使所述经引发的树突细胞成熟化，其中成熟化包括使所述经引发的树突细胞与toll样受体7激动剂或toll样受体8激动剂接触。本文进一步提供了方法，其中所述经引发的树突细胞产生至少6ng/mLIL-12p70。本文进一步提供了方法，其中所述经引发的树突细胞产生至少约6.5ng/mLIL-12p70。本文进一步提供了方法，其中所述经引发的树突细胞产生约19ng/mLIL-12p70。本文进一步提供了方法，其中所述硬表面为塑料表面。本文进一步提供了方法，其中所述硬表面包含聚苯乙烯。本文进一步提供了方法，其中所述硬表面基本上不含降低由经引发的树突细胞产生的1型应答的组分。本文进一步提供了方法，其中所述组分选自氟化聚乙烯、氟化聚丙烯和邻苯二甲酸酯。本文进一步提供了方法，其中所述裂解物包含多个完整细胞。本文进一步提供了方法，其中所述多个完整细胞为多个增殖未激活的癌细胞。本文进一步提供了方法，其中所述toll样受体7激动剂或toll样受体8激动剂为咪唑并喹啉化合物。本文进一步提供了方法，其中所述咪唑并喹啉化合物为R848。本文进一步提供了方法，其中所述toll样受体2激动剂或toll样受体4激动剂为脂多糖。本文进一步提供了方法，其中所述树突细胞对受试者而言是自体的或同种异体的。本文进一步提供了方法，其中所述树突细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于产生经引发的树突细胞的方法，该方法包括：a)在硬表面上培养树突细胞；b)采用次氯酸盐溶液裂解至少一个细胞以产生裂解物；c)使所述树突细胞与所述裂解物接触以产生经引发的树突细胞；以及d)使所述经引发的树突细胞成熟化，其中成熟化包括使所述经引发的树突细胞与toll样受体7激动剂或toll样受体8激动剂接触。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.09.26 US 62/284,4341.一种用于产生经引发的树突细胞的方法，该方法包括：a)在硬表面上培养树突细胞；b)采用次氯酸盐溶液裂解至少一个细胞以产生裂解物；c)使所述树突细胞与所述裂解物接触以产生经引发的树突细胞；以及d)使所述经引发的树突细胞成熟化，其中成熟化包括使所述经引发的树突细胞与toll样受体7激动剂或toll样受体8激动剂接触。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述经引发的树突细胞产生至少6ng/mLIL-12p70。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述经引发的树突细胞产生至少约6.5ng/mLIL-12p70。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述经引发的树突细胞产生约19ng/mLIL-12p70。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述硬表面为塑料表面。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述硬表面包含聚苯乙烯。7.根据权利要求1所述的方法，其中所述硬表面基本上不含降低由所述经引发的树突细胞产生的1型应答的组分。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述组分选自氟化聚乙烯、氟化聚丙烯和邻苯二甲酸酯。9.根据权利要求1所述的方法，其中所述裂解物包含多个完整细胞。10.根据权利要求1所述的方法，其中所述toll样受体7激动剂或toll样受体8激动剂为咪唑并喹啉化合物。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述咪唑并喹啉化合物为R848。12.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一个细胞为肿瘤细胞。13.根据权利要求1所述的方法，其中所述树突细胞对受试者而言是自体的或同种异体的。14.根据权利要求1所述的方法，其中所述树突细胞是与所述受试者相HLA匹配的同种异体细胞。15.根据权利要求1所述的方法，该方法包括从受试者获得所述至少一个细胞，其中所述细胞与有害的疾病状态有关。16.根据权利要求15所述的方法，其中所述有害的疾病状态为增生性病症或自身免疫病症。17.根据权利要求1所述的方法，其中成熟化进一步包括使所述经引发的树突细胞与(i)toll样受体2激动剂、toll样受体4激动剂或(ii)干扰素γ接触。18.根据权利要求17所述的方法，其中所述toll样受体2激动剂或所述toll样受体4激动剂为脂多糖。19.根据权利要求1所述的方法，其中成熟化进一步包括使所述经引发的树突细胞与(i)toll样受体2激动剂或toll样受体4激动剂和(ii)干扰素γ接触。20.根据权利要求1所述的方法，其中成熟化包括使所述经引发的树突细胞与R848、脂多糖和干扰素γ接触。21.一种用于产生经引发的树突细胞的方法，该方法包括：a)在硬表面上培养树突细胞；b)从受试者获得至少一个癌细胞；c)采用次氯酸盐溶液裂解所述至少一个癌细胞以产生裂解物；d)使所述树突细胞与所述裂解物接触以产生经引发的树突细胞；以及e)使所述经引发的树突细胞成熟化，其中成熟化包括使所述经引发的树突细胞与toll样受体7激动剂或toll样受体8激动剂接触。22.根据权利要求21所述的方法，其中所述经引发的树突细胞产生至少6ng/mLIL-12p70。23.根据权利要求21所述的方法，其中所述经引发的树突细胞产生至少约6.5ng/mLIL-12p70。24.根据权利要求21所述的方法，其中所述经引发的树突细胞产生约19ng/mLIL-12p70。25.根据权利要求21所述的方法，其中所述硬表面为塑料表面。26.根据权利要求21所述的方法，其中所述硬表面包含聚苯乙烯。27.根据权利要求21所述的方法，其中所述硬表面基本上不含降低由所述经引发的树突细胞产生的1型应答的组分。28.根据权利要求27所述的方法，其中所述组分选自氟化聚乙烯、氟化聚丙烯和邻苯二甲酸酯。29.根据权利要求21所述的方法，其中所述裂解物包含多个完整细胞。30.根据权利要求29所述的方法，其中所述多个完整细胞为增殖未激活的癌细胞。31.根据权利要求21所述的方法，其中所述toll样受体7激动剂或toll样受体8激动剂为咪唑并喹啉化合物。32.根据权利要求31所述的方法，其中所述咪唑并喹啉化合物为R848。33.根据权利要求21所述的方法，其中成熟化包括使所述经引发的树突细胞与(i)toll样受体2激动剂或toll样受体4激动剂或(ii)干扰素γ接触。34.根据权利要求33所述的方法，其中所述toll样受体2激动剂或所述toll样受体4激动剂为脂多糖。35.根据权利要求21所述的方法，其中成熟化进一步包括使所述经引发的树突细胞与(i)toll样受体2激动剂或toll样受体4激动剂和(ii)干扰素γ接触。36.根据权利要求21所述的方法，其中成熟化包括使所述经引发的树突细胞与R848、脂多糖和干扰素γ接触。37.根据权利要求21所述的方法，其中所述toll样受体2激动剂或toll样受体...

【专利技术属性】
技术研发人员：布鲁斯·W·里戴，托尼·陈，
申请(专利权)人：普莱瓦克斯免疫肿瘤学公司，
类型：发明
国别省市：美国,US