豆芋花水提取物的制备方法及其抗氧化用途技术

本发明专利技术公开了一种豆芋花水提取物的制备方法，包括以下步骤：1)、将豆芋花和水混合后打浆、超声浸提、离心，得上清液；2)、将上清液旋转蒸发浓缩直至为原体积的10～20％；3)、将浓缩液采用大孔树脂进行分离纯化；以体积浓度1％甲酸水溶液作为淋洗剂，以含有0.1％甲酸的甲醇水溶液作为洗脱剂，收集洗脱液；4)、将洗脱液旋转蒸发浓缩成至为原体积的10～20％，得浆状浓缩液；5)、将浆状浓缩液先预冻，然后用真空冷冻干燥机将其干燥成粉末状，得到豆芋花水提取物。本发明专利技术还同时公开了上述豆芋花水提取物在制备神经细胞氧化损伤抑制剂中的应用。

Method for preparing bean taro and its antioxidant use water extract

The invention discloses a preparation method of water extract of taro bean, which comprises the following steps: 1), the beans mixed with dasheen and water beating, ultrasonic extraction, centrifugation, supernatant; 2), and the supernatant was concentrated with a rotary evaporator until the original volume of 10 ~ 20%; 3), the concentrated liquid using macroporous resin for separation and purification; the volume concentration of 1% formic acid aqueous solution as the eluent, using methanol water solution containing 0.1% formic acid as eluent, the elution liquid; 4), the eluent is condensed into rotary evaporation of the original volume from 10 to 20%, to concentrate slurry, slurry; 5) condensed liquid first pre freezing, and then use the vacuum freeze dryer drying into powder, bean taro water extract. The invention also discloses the application of the water extract of taro bean by nerve cells in the preparation of inhibitors of oxidative damage.

【技术实现步骤摘要】
豆芋花水提取物的制备方法及其抗氧化用途
本专利技术涉及医药领域，具体涉及一种豆芋花水提取物的制备方法及其抗氧化应用。
技术介绍
豆芋(ApiosamericanaMedikus)原产于北美洲东部的加拿大至美国佛罗里达州的南部地区，属多年生豆科植物(蝶形花科亚科)。其可食用部分为地下块茎，且其蛋白质含量高于其他植物块茎，是一种既营养又有经济价值的作物，因而常被印第安人作为主食。豆芋自2009年国内引种成功，并被逐渐在富阳、金华、龙游、温州等地推广种植。研究表明豆芋不同部位(花、藤、叶、块茎)均含有丰富的游离氨基酸、可溶性蛋白、多糖、皂苷、黄酮、异黄酮、维生素C、维生素E和矿物质等成分。其中，豆芋花的维生素C含量最高，同时还含有较高含量的维生素E、总皂苷和异黄酮，具有极大的开发潜力。美国豆芋对高血压、糖尿病和高血脂症等现代生活习惯病具有明显的改善效果。自由基是由物质在受到外界条件刺激后所产生的原子或基团，并带有非常活跃的未成对电子，容易和其他原子或基团结合，形成稳定的结构。人体在新陈代谢的过程中可以产生自由基，主要包括超氧阴离子自由基、羟自由基、过氧自由基、过氧化氮和一氧化氮等，造成一系列的生物反应。当人体处于正常的生理条件下，体内的自由基清除体系(也称抗氧化体系)能够清除过多的自由基，使细胞和组织免受自由基的伤害性攻击；但在病理条件下，人体内源性自由基的产生系统和清除系统失去平衡，致使自由基过剩。过剩的自由基会诱导氧化应激现象，氧化应激能引起生物大分子(如脂类、蛋白质和DNA)的氧化损伤，引起一系列的生物学反应，导致炎症、癌症、心血管病、老年痴呆症(Alzheimer)和衰老等慢性退行性疾病的发生。抗氧化剂具有清除活性氧和氧自由基的能力，是一类能够阻止或延缓自动氧化的物质，在维持机体的正常生命活动方面起着非常重要的作用。抗氧化剂能够清除体内过剩的自由基，使体内自由基的产生系统和清除系统保持动态平衡。流行病学表明，抗氧化剂在预防慢性疾病方面发挥着至关重要的作用。自由基能够诱导氧化应激反应，补充足够的抗氧化剂能有效阻止或延缓这一反应，可有效地保护人体细胞免受氧化应激所引起的损伤，从而降低糖尿病、心血管疾病和癌症等慢性疾病的患病率。越来越多的研究表明，谷物、水果和蔬菜中的抗氧化剂能够预防或减少这种潜在的氧化损伤。摄食谷物、水果和蔬菜与降低患癌症等疾病的风险具有高度的相关性。因此，目前很多营养与保健食品的研究人员都非常关注有关抗氧化和慢性疾病发生及预防的研究与话题，但对于豆芋花提取物的抗氧化活性鲜有报道。《美国豆芋不同部位生化特征成分分析》一文告知了：测量游离氨基酸、可溶性蛋白和总糖时：粉碎后过0.42mm筛，采用3:500(m/v)加入100℃的蒸馏水，于100℃进行恒温水浴提取。测量总皂苷、总黄酮和异黄酮含量时：采用1:100(m/v)加入无水乙醇，于60℃恒温水浴3h。测量VC时：取样品1g，用40ml0.01mol/L的HCL浸泡于60℃超声40min。测量VE时，取样品3g，用加入20ml无水乙醇，50℃恒温震荡50min。CN201210574017.9的专利技术《大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法及其用途》告知了以下内容：制备方法按以下步骤：1)采摘大越豆芋花，清洗，干燥，粉碎，过40目筛，得到大越豆芋花粉末；2)大越豆芋花粉末，按照料液比1:10～1:20，加入浓度为70％～90％乙醇，在50～80℃回流提取1～3次，每次时间1～3小时，过滤，得上清液和滤渣；3)上清液，挥干后用水溶解，石油醚脱脂，正丁醇萃取，取正丁醇部分经大孔吸附树脂吸附洗脱后，浓缩，干燥得到豆芋花皂苷粉；4)滤渣，挥干溶媒，用其重量10～20倍的蒸馏水，于70～90℃回流提取1～3次，每次时间2～3小时，过滤，收集合并滤过液；5)滤过液脱色、脱蛋白，浓缩，加入乙醇，静置过夜进行醇沉，收集沉淀，透析后，用DEAE～纤维素柱层析，分别用蒸馏水、0.1M，0.3M，0.5M～NaCl溶液洗脱液，收集0.3M～0.5M～NaCl洗脱液，透析，浓缩，干燥，得豆芋花多糖。本专利技术从大越豆芋花中同时制备得到的总皂苷和多糖，纯度高，活性强，可以在制备具有抗氧化、血糖调节作用的药物或功能食品中得到广泛应用。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种豆芋花水提取物的制备方法及其抗氧化用途，为医学、食品科学等领域开发天然抗氧化剂提供新资源。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种豆芋花水提取物的制备方法，包括以下步骤：1)、按照1g:8～12ml(较佳为1g:10ml)的料液比将豆芋花和水混合后打浆，所得浆液于45±5℃超声浸提90±10min后，提取液离心(3000g离心30min)，得上清液；2)、将上清液在旋转蒸发仪进行旋转蒸发浓缩直至为原体积的10～20％；3)、将步骤2)所得的浓缩液采用大孔树脂进行分离纯化；以体积浓度1％甲酸水溶液作为淋洗剂，以含有0.1％甲酸的甲醇水溶液作为洗脱剂，收集洗脱液；所述含有0.1％甲酸的甲醇水溶液的制备方法为：在100ml体积浓度80％甲醇水溶液中加入0.1ml的甲酸；4)、将步骤3)所得的洗脱液旋转蒸发浓缩成至为原体积的10～20％，得浆状浓缩液；5)、将步骤4)所得的浆状浓缩液先于-70～-90℃预冻5～7h，然后用真空冷冻干燥机将其干燥成粉末状，得到豆芋花水提取物。作为本专利技术的豆芋花水提取物的制备方法的改进：所述步骤3)为：首先用两倍柱体积的甲醇活化大孔树脂，三倍柱体积的双蒸水进行平衡；然后以0.4～0.6mL/min(较佳为0.5mL/min)的流速上样(上样量为100～200ml，即约为柱体积的10～20％)，待提取液被充分吸附后，用体积浓度1％甲酸水溶液作为淋洗剂进行淋洗(淋洗的目的是为了除去蛋白质、糖、酸等物质)，所述淋洗剂的用量为两倍柱体积，流速为0.4～0.6mL/min(较佳为0.5mL/min)；最后用含有0.1％甲酸的甲醇水溶液作为洗脱剂进行充分洗脱，所述洗脱剂的用量三倍柱体积，流速为0.4～0.6mL/min(较佳为0.5mL/min)；收集洗脱液。作为本专利技术的豆芋花水提取物的制备方法的进一步改进：所述步骤3)中的大孔树脂为大孔树脂AB-8(天津兴南允能高分子技术有限公司)。作为本专利技术的豆芋花水提取物的制备方法的进一步改进：将步骤1)离心所得的滤渣替代步骤1)中的豆芋花重复进行步骤1)的打浆、超声浸提和离心；重复次数为2～3；将所有离心所得的上清液合并后进行步骤2)。本专利技术还同时提供了利用上述方法制备所得的豆芋花水提取物在制备神经细胞氧化损伤抑制剂中的应用。在本专利技术中：步骤2)和步骤4)的旋转蒸发均在38±2℃，-0.09MPa的真空度下进行。步骤5)的真空冷冻干燥为在-40±2℃，1.2Pa的真空度下进行，直至所得的豆芋花水提取物含水率≤0.1％。本专利技术采用PC12细胞(大鼠神经细胞)进行实验，通过噻唑蓝(MTT)法测定豆芋花水提取物处理对PC12细胞增殖活性的影响，并采用豆芋花水提取物提前保护24h后，加入过氧化氢(H2O2)诱导2h构建细胞氧化应激模型，探讨豆芋花水提取物对细胞氧化损伤的保护作用。即，本专利技术提供了豆芋花水提取物在制备由过氧化氢(H2O2)诱导的神经细胞氧本文档来自技高网...

【技术保护点】
豆芋花水提取物的制备方法，其特征是包括以下步骤：1)、按照1g:8～12ml的料液比将豆芋花和水混合后打浆，所得浆液于45±5℃超声浸提90±10min后，提取液离心，得上清液；2)、将上清液在旋转蒸发仪进行旋转蒸发浓缩直至为原体积的10～20％；3)、将步骤2)所得的浓缩液采用大孔树脂进行分离纯化；以体积浓度1％甲酸水溶液作为淋洗剂，以含有0.1％甲酸的甲醇水溶液作为洗脱剂，收集洗脱液；所述含有0.1％甲酸的甲醇水溶液的制备方法为：在100ml体积浓度80％甲醇水溶液中加入0.1ml的甲酸；4)、将步骤3)所得的洗脱液旋转蒸发浓缩成至为原体积的10～20％，得浆状浓缩液；5)、将步骤4)所得的浆状浓缩液先于‑70～‑90℃预冻5～7h，然后用真空冷冻干燥机将其干燥成粉末状，得到豆芋花水提取物。

【技术特征摘要】
1.豆芋花水提取物的制备方法，其特征是包括以下步骤：1)、按照1g:8～12ml的料液比将豆芋花和水混合后打浆，所得浆液于45±5℃超声浸提90±10min后，提取液离心，得上清液；2)、将上清液在旋转蒸发仪进行旋转蒸发浓缩直至为原体积的10～20％；3)、将步骤2)所得的浓缩液采用大孔树脂进行分离纯化；以体积浓度1％甲酸水溶液作为淋洗剂，以含有0.1％甲酸的甲醇水溶液作为洗脱剂，收集洗脱液；所述含有0.1％甲酸的甲醇水溶液的制备方法为：在100ml体积浓度80％甲醇水溶液中加入0.1ml的甲酸；4)、将步骤3)所得的洗脱液旋转蒸发浓缩成至为原体积的10～20％，得浆状浓缩液；5)、将步骤4)所得的浆状浓缩液先于-70～-90℃预冻5～7h，然后用真空冷冻干燥机将其干燥成粉末状，得到豆芋花水提取物。2.根据权利要求1所述的豆芋花水提取物的制备方法，其特征是：所述步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑晓冬，楚强，杨芸芸，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33