一种艾替班特的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种艾替班特的制备方法，包括以下步骤：采用固相合成法，在偶联试剂2‑氰基‑2‑(2‑硝基苯磺酰氧亚胺)乙酸乙酯存在下，以X‑Arg(pbf)‑Wang树脂为起始树脂，按照艾替班特氨基酸序列，逐一延伸偶联具有N端保护的氨基酸，每次延伸偶联后均得到对应的树脂肽，最终合成得到艾替班特‑Wang树脂肽，再经裂解、纯化得到艾替班特。本发明专利技术的方法减小了杂质D‑Thi

A method for the preparation of icatibant

The invention relates to a icatibant preparation method comprises the following steps: using solid phase synthesis method, the coupling reagent 2 cyano 2 (2 nitrobenzene sulfonyl imide oxygen) ethyl acetate presence in X Arg (PBF) Wang resin as the starting resin, in accordance with icatibant amino acid one by one with the amino acid sequence, extending N coupling end protection, each extension of coupling were corresponding to the final synthesis of peptide resin, Wang resin obtained AI for bant peptide, then purified by cracking, icatibant. The method of the invention reduces the impurity D Thi

【技术实现步骤摘要】
一种艾替班特的制备方法
本专利技术涉及一种多肽类药物的制备方法，具体涉及一种艾替班特的制备方法。
技术介绍
遗传性血管水肿(hereditaryangioedema,HAE)是一种罕见的常染色体显性遗传病。多数患者的病因是位于染色体11q上的C1酯酶抑制基因发生变异，导致C1酯酶抑制因子减少或功能缺陷。这些抑制因子的作用是调节部分免疫系统和凝血途径的功能，其功能减弱可引起快速而严重的面部或身体其他部位肿胀，从而导致永久性面部损毁、残障或死亡。此外，消化道水肿可以引起剧烈腹痛、恶心和呕吐，而呼吸道水肿则有窒息危险。HAE在人群中的发病率为1/150000至1/10000。醋酸艾替班特，英文名：IcatibantAcetate，商品名：Firazyr，是一种对缓激肽B2受体选择性的竞争性拮抗剂，亲和力与缓激肽相似，主要用于治疗遗传性血管水肿(HAE)的急性发作。该药物最初由Sanofi开发，2001年11月Jerini公司(Shire)获得艾替班特的开发权。2008年9月首次在德国和英国上市，2009年3月在欧盟上市，2011年10月在美国上市，其结构式如下：氨基酸序列：H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH结构式说明：1)艾替班特氨基酸序列中Hyp代表L-羟脯氨酸，Thi代表3-(2-噻吩基)-L-丙氨酸，Tic代表1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸，Oic代表L-八氢吲哚-2-羧酸；2)序列中第1位和第8位氨基酸为D-构型，其余氨基酸为L-构型。现有的艾替班特的制备方法仍旧主要沿用1990年左右，由德国赫切斯特股份公司专利技术的固相合成方法，该方法制得的艾替班特产品纯度低、杂质含量高、收率低，不适合产业化生产，应用价值低。申请号为201210028377.9专利报道了直接固相合成艾替班特的方法，采用2-氯三苯基氯树脂为起始载体，但由于该树脂在接肽过程中容易发生肽链脱落，直接影响艾替班特的总收率。申请号为201410209368.9专利报道了一种通过液相合成片段Boc-D-Arg-Arg-OH.2HCl，然后采用固相合成法，以王树脂为起始树脂，按照艾替班特主链肽序依次偶联具有N段Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，最后两个氨基酸采用偶联上述Boc保护的片段。该方法虽然使得粗品肽纯度有一定程度的提高，但合成方法相对复杂，且采用的偶联试剂均为常规偶联试剂，在氨基酸偶联过程中，不能更好地抑制氨基酸的消旋，导致消旋肽杂质D-Thi6-艾替班特和D-Ser7-艾替班特偏大。有关杂质D-Thi6-艾替班特和D-Ser7-艾替班特的氨基酸序列分别如下：D-Thi6-艾替班特：H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-D-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OHD-Ser7-艾替班特：H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-D-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH这两个杂质在液相中的保留时间与主峰艾替班特相近，与主峰分离十分困难，该杂质的存在严重影响艾替班特含量以及使用安全。因此迫切需要开发一种可有效抑制氨基酸消旋的艾替班特制备方法，使其消旋肽杂质D-Thi6-艾替班特和D-Ser7-艾替班特达到优质标准级别0.2％以下。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种合成艾替班特的方法，该方法即可显著提高艾替班特的收率，又可降低消旋肽杂质D-Thi6-艾替班特和D-Ser7-艾替班特的生成。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种合成艾替班特的方法，包括以下步骤：步骤1、采用固相合成法，在偶联试剂和有机溶剂存在下，以X-Arg(pbf)-Wang树脂为起始树脂，按照艾替班特氨基酸序列，逐一延伸偶联具有N端保护的氨基酸，每次延伸偶联后均得到对应的树脂肽，最终合成得到艾替班特-Wang树脂肽。步骤2、将艾替班特-Wang树脂肽裂解得到艾替班特。其中，步骤1中所述X是氨基酸N端保护基，优选Fmoc。步骤1中每次延伸偶联时，所述N端保护的氨基酸和对应树脂肽的摩尔比为3-5:1，优选3:1。步骤1中所述N端保护的氨基酸是指具有N端Fmoc保护的氨基酸，优选具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，更优选Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thi-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Hyp(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH。步骤1中所述偶联试剂为2-氰基-2-(2-硝基苯磺酰氧亚胺)乙酸乙酯或2-氰基-2-(2-硝基苯磺酰氧亚胺)乙酸乙酯与N,N’-二异丙基乙胺(DIPEA)的混合物。步骤1中所述偶联试剂和对应树脂肽的摩尔比为3～5:1，优选3:1。步骤1中所述有机溶剂为二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMAC)或其混合溶剂，优选DMF。步骤1中所述树脂肽在参与偶联反应前，需先进行脱保护，优选在六氢吡啶/DMF混合溶液中进行脱保护，更优选在20％六氢吡啶/DMF混合溶液进行脱保护。脱保护反应的温度一般为20℃～40℃，优选27℃～33℃。步骤1中所述偶联反应均以茚三酮检测阴性为反应终点。步骤2中所述裂解是采用由三氟乙酸(TFA)、三异丙基硅烷(TIS)、余量为水组成的混合酸解液；优选由体积百分比为90-97％的三氟乙酸(TFA)、体积百分比为1-5％的三异丙基硅烷(TIS)、余量为水组成的混合酸解液酸解；更优选采用由体积百分比为95％的三氟乙酸(TFA)、体积百分比为2.5％的三异丙基硅烷(TIS)、余量为水组成的混合酸解液。所述混合酸解液用量为每克艾替班特树脂需要10ml～20ml，优选15ml～20ml。所述裂解的时间优选为室温条件下1～6小时，更优选为3～4小时。进一步地，本专利技术所述合成艾替班特的方法，还包括将艾替班特进行纯化、换盐、冻干的步骤。其中，所述纯化采用高效液相色谱纯化，具体为高效液相色谱的色谱填料为10μm的反相C18，流动相为0.01mol/L磷酸二氢钠缓冲液(pH3.0)-乙腈溶液，流速为280ml/min，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化。所述换盐采用高效液相色谱换盐，具体为高效液相色谱法的色谱填料为10μm的反相C18，流动相为0.1％乙酸水溶液-乙腈-0.1mol/L乙酸铵水溶液，流速为300ml/min，采用梯度洗脱，循环上样方法。本专利技术的另一目的在于提供一种偶合试剂2-氰基-2-(2-硝基苯磺酰氧亚胺)乙酸乙酯的制备方法。2-氰基-2-(2-硝基苯磺酰氧亚胺)乙酸乙酯的结构式如下：本专利技术所述偶合试剂2-氰基-2-(2-硝基苯磺酰氧亚胺)乙酸乙酯的制备方法，包括，在卤代烃作反应溶剂，叔胺作碱条件下，将2-肟氰乙酸乙酯与2-硝基苯磺酰氯反应制得。其中，所述卤代烃选自二氯甲烷、三氯甲烷或1,2-二氯乙烷，优选二氯甲烷。所述叔胺选自三乙胺、吡啶、N,N’-二异丙基乙胺(DIPEA)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)，优选N,N’-二异丙基乙胺。所述2-肟氰乙酸乙酯与2-硝基苯磺酰氯的摩尔比为1:1.0～1.2，优选1:1.05～1.10。所述2-肟氰乙酸乙酯与叔本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种艾替班特的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：采用固相合成法，在偶联试剂和有机溶剂存在下，以X‑Arg(pbf)‑Wang树脂为起始树脂，按照艾替班特氨基酸序列C端到N端的顺序，逐一延伸偶联具有N端保护的氨基酸，每次延伸偶联后均得到对应的树脂肽，最终合成得到艾替班特‑Wang树脂肽；步骤2：将艾替班特‑Wang树脂肽裂解得到艾替班特。

【技术特征摘要】
1.一种艾替班特的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：采用固相合成法，在偶联试剂和有机溶剂存在下，以X-Arg(pbf)-Wang树脂为起始树脂，按照艾替班特氨基酸序列C端到N端的顺序，逐一延伸偶联具有N端保护的氨基酸，每次延伸偶联后均得到对应的树脂肽，最终合成得到艾替班特-Wang树脂肽；步骤2：将艾替班特-Wang树脂肽裂解得到艾替班特。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1中所述X是氨基酸N端保护基，优选Fmoc。3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1中每次延伸偶联时，所述N端保护的氨基酸和对应树脂肽的摩尔比为3～5:1，优选3:1。4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1中所述N端保护的氨基酸是指具有N端Fmoc保护的氨基酸，优选具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，更优选Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thi-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Hyp(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH。5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1中所述偶联试剂为2-氰基-2-(2-硝基苯磺酰氧亚胺)乙酸乙酯或2-氰基-2-(2-硝基苯磺酰氧亚胺)乙酸乙酯与N,N’-二异丙基乙胺的混合物。6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1中所述偶联试剂和对应树脂肽的摩尔比为3～5:1，优选3:1。7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1中所述有机溶剂为二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺或其混合溶剂，优选二...

【专利技术属性】
技术研发人员：李赛，李孝壁，孙平，闫雪峰，戚郜飞，
申请(专利权)人：江苏豪森药业集团有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32