The invention relates to a MDBK cell culture solution, a preparation method and a use method thereof, belonging to the technical field of veterinary biological products. The cell culture medium per 1000ml deionized water containing the following components: DMEM powder, transferrin liquid storage, liquid storage, bFGF EGF, IL 3, liquid propolis flavone, astragalus saponin, penicillin and streptomycin. The invention has the following advantages: the invention of the MDBK cell culture medium, greatly reduced the amount of serum, reduce the cost of cell culture; increase the growth rate of MDBK cells; enhance the sensitivity of BVDV to MDBK cells, improve the content of virus; immunogenicity used by the invention of the MDBK cell culture medium it can greatly improve the BVD MD inactivated vaccine.
【技术实现步骤摘要】
一种MDBK细胞培养液及其制备方法、使用方法
本专利技术属于兽用生物制品
,具体涉及一种MDBK细胞培养液及其制备方法、使用方法。
技术介绍
MDBK细胞为胎牛肾细胞,可连续传代培养,此细胞主要用于病毒的培养,特别是牛病毒性腹泻/粘膜病毒(BVDV)对此细胞尤为敏感。牛病毒性腹泻/粘膜病毒病(BVD-MD)是由牛病毒性腹泻/粘膜病毒(BVDV)引起的一种牛的急性、热性传染病,其临诊特征为粘膜发炎、糜烂、坏死、腹泻以及怀孕母牛流产,目前我国已将该病列为三类疫病。目前控制BVD-MD的主要方法是使用疫苗进行免疫防控,疫苗的质量和安全性在很大程度上取决于疫苗的生产方式和过程,BVD-MD疫苗通常是大规模培养细胞收获病毒液,但目前多采用含血清的培养液培养细胞,血清组分的复杂性和不确定性,以及其中存在病毒等病原微生物污染的潜在风险,影响着病毒疫苗的生产工艺和疫苗质量。从病毒疫苗生产工艺角度考虑,血清组分的复杂性和批次间的质量差异增加了病毒疫苗生产的不稳定性和产品质量控制的难度;从病毒疫苗的安全性角度考虑,血清中潜在的病原微生物,给疫苗的使用带来了不容忽视的安全隐患。由使用血清所造成的细胞培养过程和细胞表达产物安全性的不确定因素增加的现实问题,成为动物细胞无血清培养技术研究和应用的发展动因。无血清培养液具有诸多优势:简化下游目的产物的分离纯化、节约成本;避免血清批次间的差异性,提高细胞培养的稳定性及结果的可靠性;避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染;无血清培养液由于添加成分相对确定,可用于研究细胞生长、增殖、分化、代谢及基因调控等研究。
技术实现思路
针对现有技术 ...
【技术保护点】
一种MDBK细胞培养液,其特征在于每1000ml 去离子水中含有以下组分:DMEM粉末9‑12 g、转铁蛋白储液1‑3 ml、bFGF储液0.8‑4 ml、EGF储液0.8‑4 ml、IL‑3 1‑10 ug、蜂胶黄酮2‑30 mg、黄芪皂苷20‑60 mg、青霉素5‑10万单位、链霉素5‑10mg。
【技术特征摘要】
1.一种MDBK细胞培养液,其特征在于每1000ml去离子水中含有以下组分:DMEM粉末9-12g、转铁蛋白储液1-3ml、bFGF储液0.8-4ml、EGF储液0.8-4ml、IL-31-10ug、蜂胶黄酮2-30mg、黄芪皂苷20-60mg、青霉素5-10万单位、链霉素5-10mg。2.如权利要求1所述的一种MDBK细胞培养液,其特征在于每1000ml去离子水中含有以下组分:DMEM粉末10-12g、转铁蛋白储液1.2-2.6ml、bFGF储液1.2-2ml、EGF储液1.2-2ml、IL-32-8ug、蜂胶黄酮6-25mg、黄芪皂苷30-50mg、青霉素6-8万单位、链霉素6-8mg。3.如权利要求1或2所述的一种MDBK细胞培养液,其特征在于所述的转铁蛋白储液通过以下步骤制得:以体积比为1:1的生理盐水和90%甘油溶解转铁蛋白,配制浓度为15mg/ml的储液,置于-20℃备用。4.如权利要求1或2所述的一种MDBK细胞培养液,其特征在于所述的bFGF、EGF储液通过以下步骤制得:以体积比为1:1的生理盐水和90%甘油分别溶解bFGF、EGF,分别配成浓度为50ug/ml、30ug/ml的储液,置于-20℃备用。5.如权利要求1或2所述的一种MDBK细胞培养液的制备方法,其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员:沈建军,张秀文,李阳,冷春青,
申请(专利权)人:浙江美保龙生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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