The present invention discloses a nucleic acid expression vector comprising a nucleic acid sequence encoding a dominant negative T3SS protein. The nucleic acid expression vector also includes a cis acting regulatory element capable of driving transcription of the nucleic acid sequence in plant cells. In addition, the dominant negative T3SS protein mediates the assembly of dysfunctional needle complexes.
【技术实现步骤摘要】
具有功能失调的T3SS蛋白的抗菌性转基因植物本申请是申请号为201280021463.5、申请日为2012年3月1日、专利技术名称为“具有功能失调的T3SS蛋白的抗菌性转基因植物”的中国专利技术专利申请的分案申请,原申请为国际申请号为PCT/IL2012/050069的国家阶段申请,该国际申请要求申请日为2011年3月2日,申请号为61/448,223的美国申请的优先权。
本专利技术,在其些实施方式中,涉及抗菌性植物及制备所述植物的方法。专利技术背景青枯雷尔氏菌(Rs),是一种分布广泛的革兰氏阴性的土壤传播性病原体,它属于β-亚门的蛋白菌,能导致超过200种植物的致死性萎蔫疾病,这些植物包括重要的经济作物,例如番茄,马铃薯和香蕉。细菌通过伤口进入植物根部,侵入木质部并通过脉管系统迅速蔓延至植物的气生部位。茎上很快可以发现超过1010每厘米的细胞群。Rs的主要毒力因子是表多糖(EPS),一种长的(超过106Da)糖聚合物。表多糖能堵塞木质部并导致萎蔫症状,并最终导致植物死亡。RS具有突出的蛋白分泌能力,其能分泌超过100种蛋白质。例如,II型分泌系统(T2SS)分泌因子,包括植物细胞壁降解果胶酶,内切葡聚糖酶,以及最近发现的,毒力EPS(图1A-C)。III型分泌系统(T3SS)分泌促感染效应蛋白(T3E)进入宿主细胞,以优化宿主环境,并抑制入侵后的植物防御反应(图1A-C)。III型分泌系统(T3SS)是革兰氏阴性菌的一个复杂的分子机器,其能将细菌蛋白(效应器)“注入”(转移入)真核细胞。为此,T3SS必须组装成一个多蛋白复合物,它由不同的部分组成:跨 ...
【技术保护点】
一种核酸表达载体,所述核酸表达载体包含核酸序列和异源顺式作用调控元件,所述核酸序列编码显性负性III型分泌系统(T3SS)蛋白,所述异源顺式作用调控元件能够驱动所述核酸序列在植物细胞中转录,所述显性负性T3SS蛋白包含至少一个氨基酸插入,其使菌毛发生结构变形并且介导功能失调的针状复合物的组装。
【技术特征摘要】
2011.03.02 US 61/448,2231.一种核酸表达载体,所述核酸表达载体包含核酸序列和异源顺式作用调控元件,所述核酸序列编码显性负性III型分泌系统(T3SS)蛋白,所述异源顺式作用调控元件能够驱动所述核酸序列在植物细胞中转录,所述显性负性T3SS蛋白包含至少一个氨基酸插入,其使菌毛发生结构变形并且介导功能失调的针状复合物的组装。2.根据权利要求1所述的核酸表达载体,还包含附加核酸序列,所述附加核酸序列编码分泌信号肽,所述分泌信号肽在编码所述显性负性T3SS的核酸序列的上游并在所述显性负性T3SS的核酸序列的框内。3.根据权利要求1所述的核酸表达载体,其中所述异源顺式作用调控元件包含启动子序列。4.根据权利要求3所述的核酸表达载体,其中所述启动子序列是组成型启动子。5.根据权利要求4所述的核酸表达载体,其中所述组成型启动子是CaMV35S启动子。6.根据权利要求1所述的核酸表达载体,其中所述T3SS蛋白是T3SS结构蛋白。7.根据权利要求6所述的核酸表达载体,其中所述T3SS结构蛋白是过敏性反应和致病性(HRP)蛋白。8.根据权利要求1所述的核酸表达载体,其中所述T3SS蛋白选自青枯雷尔氏菌HrpY蛋白,丁香假单胞菌HrpA蛋白,解淀粉欧文氏菌HrpA蛋白,野油菜黄单胞菌HrpE蛋白,亚洲梨火欧文氏菌HrpA蛋白和白叶枯黄单胞菌HrpE蛋白。9.根据权利要求1所述的核酸表达载体,其中所述T3SS蛋白是青枯雷尔氏菌易位子蛋白。10.根据权利要求9所述的核酸表达载体,其中所述青枯雷尔氏菌易位子蛋白选自PopF1和PopF2。11.根据权利要求1所述的核酸表达载体,其中所述至少一个氨基酸嵌入包含插入闭锁元件(IBE)。12.根据权利要求11所述的核酸表达载体,其中所述IBE包含3-10个氨基酸,其使菌毛发生结构变形。13.根据权利要求1所述的核酸表达载体,其中所述至少一个氨基酸插入包含β阻断氨基酸。14.根据权利要求13所述的核酸表达载体,其中所述β阻断氨基酸包含脯氨酸的插入。15.根据权利要求1所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员:哈南·施泰因,德罗尔·阿维萨尔,
申请(专利权)人:富途锐基尼以色列有限公司,
类型:发明
国别省市:以色列,IL
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