OGP-rhLeptin融合蛋白转基因工程菌株，它涉及一种融合蛋白转基因工程菌株。解决目前尚无同时有效治疗骨质疏松和肥胖药品的缺陷。OGP-rhLeptin融合蛋白转基因工程菌株大肠杆菌BL21（DE3-OGP/Obese’）按以下步骤制备：一、获得融合蛋白DAN片段；二、双酶切质粒；三、酶连接；四、转化大肠杆菌BL21。本发明专利技术可用于医药制备领域。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种融合蛋白转基因工程菌株。
技术介绍
老年人骨质疏松发病率较高，全球有2亿骨质疏松患者，并且女性多于男性。根据世界卫生组织(WHO)的标准，美国国家健康和营养调查(NHANES III，1988 1994年)结果表明，骨质疏松严重影响老年人生活质量，50岁以上人群中，1/2的女性、1/5的男性在他们的一生中都会出现骨质疏松性骨折，一旦患者经历了第一次骨质疏松性骨折，继发性骨折的危险明显加大。中国老年人居于世界首位，现有骨质疏松症患者9000万，占总人口的7. 1%。随着社会老龄化的进程，骨质疏松症的发病率呈上升趋势，预计到2050年将增加到2.21亿，那时全世界一半以上的骨质疏松性骨折将发生在亚洲，绝大部分在中国。有学者对1995 1996年美国骨质疏松、心肌梗死、卒中和乳腺癌的年发生数进行调查显示，每年发生骨质疏松性骨折150万次，其中椎体骨折70万次，腕部骨折20万次，髋部骨折30万次，其它骨折30万次。肥胖与骨量关系临床观察表明，肥胖与骨密度(BMD)提高有关。肥胖是骨量的保护因素，超重和肥胖的妇女绝经后较同龄非超重妇女骨量高且骨丢失较慢。体重下降是绝经早期骨丢失的危险因素，提高体重指数可减缓绝经后骨丢失。但肥胖也常常引发高血糖、高血压、高血脂、高血粘、高尿酸、高胰岛素血症、冠心病、脑卒中、下肢静脉曲张、脂肪肝、胆石症、睡眠呼吸暂停症、糖尿病、痛风症及关节炎，是很多疾病的诱因之一。
技术实现思路
本专利技术要解决目前尚无同时有效治疗骨质疏松和肥胖药品的缺陷，而提供的一种OGP-rhLept in融合蛋白转基因工程菌株。OGP-rhL印tin融合蛋白转基因工程菌株名为大肠杆菌BL21 (DE3_0GP/0bese’)，大肠杆菌BL21 (DE3-0GP/0bese，)按以下步骤制备一、将含有OGP-rhL印tin融合蛋白基因的质粒载体pUC (0GP/0bese’ )用BamH I和EcoR I双酶切，获得OGP-rhL印tin融合蛋白的DAN片段；二、用 BamHI 和 EcoR I 双酶切质粒 pGEX_6P_1 ；三、OGP-rhL印tin融合蛋白的DAN片段与经过双酶切的载体pGEX_6P_1进行酶连接，然后16°C放置连接过夜，得到载体pGEX-OGP/Obese’ ；四、用载体pGEX-0GP/0bese’转化大肠杆菌BL21 (DE3)，选择阳性重组子，即获得OGP-rhLept in融合蛋白转基因工程菌大肠杆菌BL21 (DE3_0GP/0bese’)。本专利技术中OGP-rhL印tin融合蛋白的基因序列如SEQ ID NO 1所示。本专利技术中OGP-rhL印tin融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示。本专利技术OGP-rhLeptin融合蛋白采用人为改造的Leptin和成骨生长肽基因编码翻译而成。具有降低使用者体重，并防治骨质疏松的效果。本专利技术用于治骨质疏松和肥胖的OGP-rhLeptin融合蛋白微生物制剂，不产生拮抗反应，使用安全。本专利技术OGP-rhLeptin融合蛋白转基因工程菌大肠杆菌BL21(DE3-0GP/0bese’)发酵产生的OGP-rhLeptin融合蛋白共52个氨基酸。本专利技术采用生物基因工程手段获得大肠杆菌BL21 (DE3-0GP/0bese，)。采用本专利技术基因工程菌大肠杆菌BL21 (DE3_0GP/0bese’)可大规模发酵生产OGP-rhLeptin融合蛋白，具有广泛应用前景。本专利技术为治疗骨质疏松和肥胖奠定了物质基础。具体实施例方式本专利技术技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。具体实施方式一本实施方式OGP-rhLeptin融合蛋白转基因工程菌株名为大肠杆菌 BL21 (DE3-0GP/0bese，)，大肠杆菌 BL21 (DE3_0GP/0bese’)按以下步骤制备一、将含有OGP-rhLeptin融合蛋白基因的质粒载体pUC (0GP/0bese’ )用BamH I和EcoR I双酶切，获得OGP-rhL印tin融合蛋白的DAN片段(0GP/0bese’)；二、用 BamHI 和 EcoR I 双酶切质粒 pGEX_6P_l ；三、OGP-rhLeptin融合蛋白 的DAN片段与经过双酶切的载体pGEX_6P_l进行酶连接，然后16°C放置连接过夜，得到载体pGEX-OGP/Obese’ ；四、用载体pGEX-0GP/0bese’转化大肠杆菌BL21 (DE3)，选择阳性重组子，即获得OGP-rhLeptin融合蛋白转基因工程菌大肠杆菌BL21 (DE3_0GP/0bese’)。 本实施方式步骤四采用电击转化法转化大肠杆菌BL21 (DE3 )。具体实施方式二 本实施方式与具体实施方式一的不同点在于步骤一中质粒载体pUC (0GP/0bese’ )酶切反应体系为 pUC (OGP/Obese，)20 μ IOXMbuffer6μ1 Bamhll3μ1 EcoR I3μ1 不含 DNA 酶的 ddH2028μ1。其他步骤及参数与具体实施方式一相同。本实施方式步骤一酶切反应在37°C条件下反应10h，然后1. 5%琼脂糖凝胶电泳，目的片段用DNA GEL EXTRACTION KIT纯化回收。具体实施方式三本实施方式与具体实施方式一或二的不同点在于步骤二中质粒pGEX-6P-l酶切反应体系为载体 pGEX-6P-l20 μΙ IOXM buffer 6μ1 BamHX3μ1 EcoR I 3μ1 不含 DNA 酶的 ddH20 28μΙ。其他步骤及参数与具体实施方式一或二相同。本实施方式步骤二酶切反应在37°C条件下反应10h，然后O. 6%琼脂糖凝胶电泳，目的片段用DNA GEL EXTRACTION KIT纯化回收。具体实施方式四本实施方式与具体实施方式一、二或三的不同点在于步骤三中酶连接反应体系为 双酶切的载体PGEX-6P-13 μ 融合蛋白的DNA片段1#1IO X Τ4 DNA 迕接酚 buffer2μ1Τ4 DNA连接酶2μ1。其他步骤及参数与具体实施方式一、二或三相同。本实施方式步骤三酶连接反应在16 °C条件下进行。具体实施方式五本实施方式与具体实施方式一至四之一的不同点在于步骤一中OGP-rhLeptin融合蛋白的基因序列如SEQ ID N0:1所示。其他步骤及参数与具体实施方式一至四之一相同。本实施方式OGP-rhLeptin融合蛋白的核酸序列由生物工程公司合成，并由生物工程公司制成含有融合蛋白的核酸的质粒载体pUC (OGP/Obese’)。具体实施方式六本实施方式与具体实施方式一至五之一的不同点在于步骤一中OGP-rhLeptin融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO :2所示。其他步骤及参数与具体实施方式一至五之一相同。具体实施方式七本实施方式OGP-rhL印tin融合蛋白转基因工程菌株名为大肠杆菌 BL21 (DE3-0GP/0bese，)，大肠杆菌 BL21 (DE3_0GP/0bese’)按以下步骤制备一、将含有OGP-rhLeptin融合蛋白基因的质粒载体pUC (0GP/0bese’ )用BamH I和EcoR I双酶切，获得OGP-rh本文档来自技高网...
【技术保护点】
OGP?rhLeptin融合蛋白转基因工程菌株，其特征在于OGP?rhLeptin融合蛋白转基因工程菌株名为大肠杆菌BL21（DE3?OGP/Obese’），大肠杆菌BL21（DE3?OGP/Obese’）按以下步骤制备：一、将含有OGP?rhLeptin融合蛋白基因的质粒载体pUC（OGP/Obese’）用BamH?I和EcoRⅠ双酶切，获得OGP?rhLeptin融合蛋白的DAN片段；二、用BamHI和EcoRⅠ双酶切质粒pGEX?6P?1；三、OGP?rhLeptin融合蛋白的DAN片段与经过双酶切的载体pGEX?6P?1进行酶连接，然后16℃放置连接过夜，得到载体pGEX?OGP/Obese’；四、用载体pGEX?OGP/Obese’转化大肠杆菌BL21（DE3），选择阳性重组子，即获得OGP?rhLeptin融合蛋白转基因工程菌大肠杆菌BL21（DE3?OGP/Obese’）。
【技术特征摘要】
1.OGP-rhLeptin融合蛋白转基因工程菌株,其特征在于OGP-rhLeptin融合蛋白转基因工程菌株名为大肠杆菌BL21 (DE3-0GP/0bese，)，大肠杆菌BL21 (DE3_0GP/0bese’)按以下步骤制备 一、将含有OGP-rhLeptin融合蛋白基因的质粒载体pUC(OGP/Obese，)用BamH I和EcoR I双酶切，获得OGP-rhLeptin融合蛋白的DAN片段； 二、用BamHI 和 EcoR I 双酶切质粒 pGEX_6P_l ； 三、OGP-rhLeptin融合蛋白的DAN片段与经过双酶切的载体pGEX_6P_l进行酶连接，然后16°C放置连接过夜，得到载体pGEX-OGP/Obese’ ； 四、用载体pGEX-OGP/Obese’转化大肠杆菌BL21(DE3)，选择阳性重组子，即获得OGP-rhLeptin融合蛋白转基因工程菌大肠杆菌BL21 (DE3_0GP/0bese’)。2.根据权利要求1所述的OGP-rhLeptin融合蛋白转基因工程菌株，其特征在于步骤一中质粒载体pUC (OGP/Obese’ )酶切反应体系为 pUC (O...
【专利技术属性】
技术研发人员：余琼，
申请(专利权)人：黑龙江大学，
类型：发明
国别省市：
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