多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用制造技术

本发明专利技术涉及多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用，所述多酚氧化酶是茶多酚氧化酶、苹果多酚氧化酶、血浆铜蓝蛋白中的一种，茶多酚氧化酶、苹果多酚氧化酶和血浆铜蓝蛋白均具有优异的抗肿瘤活性，能够显著抑制宫颈癌、肝癌、肺癌、结肠癌、胃癌等肿瘤细胞增殖及治疗实验性肿瘤的效果，且没有明显的毒副作用；所述抗肿瘤药物含有最少一种所述多酚氧化酶，所述抗肿瘤药物用于治疗包括宫颈癌、肝癌、肺癌、结肠癌、胃癌。

Application of polyphenol oxidase in preparing antitumor drugs

The present invention relates to the application of polyphenol oxidase in preparation of anti-tumor drugs, the polyphenol oxidase is a kind of tea polyphenol oxidase, apple polyphenol oxidase and ceruloplasmin in the tea polyphenol oxidase, apple polyphenol oxidase and ceruloplasmin showed excellent antitumor activity, can inhibit cervical cancer, liver cancer, lung cancer, colon cancer and gastric cancer cell proliferation and the treatment of experimental tumor effect, and no obvious side effects; the antitumor drugs containing at least one of the polyphenol oxidase, the anticancer drugs for the treatment of cervical cancer, including liver cancer, lung cancer, colon cancer, gastric cancer.

【技术实现步骤摘要】
多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用
本专利技术涉及生物医药及应用领域，尤其涉及多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用。
技术介绍
肿瘤尤其是恶性肿瘤是病患者死亡率极高的恶性疾病，其治疗难度极大。20世纪后期近30年以来肿瘤的发病率一直呈趋势，目前世界癌症发病率和死亡率比1990年上升了22%，今后20年还将大约上升50%。到2020年，全球每年新增癌症患者人数将达到1500万，并有1000万人死于癌症，且其中大部分将发生在发展中国家。我国肿瘤引起的死亡率在所有病因中占17.9%，居第二位，且发病率呈上升趋势。目前我国每年癌症的发病人数约为200万，死于癌症的人数超过140万。长期以来，国际社会花费巨资用于研究治疗癌症的新药和方法。世界制药公司研究开发抗肿瘤新药也不遗余力，抗肿瘤的新技术和新方法随之不断涌现。目前治疗肿瘤的方法可分为：外科治疗、放射治疗、化学治疗、药物治疗和综合治疗等。长期大量的临床表明，外科手术适用于某些局部肿瘤的早期和中期治疗，但多数人靠手术治疗不能防止肿瘤的复发和转移。放疗和化疗虽然有较高的治愈率，但是常引起如骨髓抑制、免疫低下等毒副作用，是的患者难以坚持治疗。而且，化疗药物在治疗过程中出现的耐药性，也成为目前临床治疗的难题之一。而且各种治疗方法所带来的和患者生存质量的下降问题使如何保护机体以及各个器官的功能，提高人的生活质量也日益成为广泛重视的课题。由于上述的各种原因，使世界上许多国家把研究重心移向药物治疗和新药研发方面。申请人发现多酚氧化酶在抑制肿瘤细胞增殖及治疗实验性肿瘤方面具有令人满意的效果，更令人满意的是该多酚氧化酶在抗肿瘤的同时，没有明显的毒副作用。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术存在的不足，提供了多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用，具体技术方案如下：多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用，所述多酚氧化酶是茶多酚氧化酶、苹果多酚氧化酶、血浆铜蓝蛋白中的一种，所述抗肿瘤药物含有最少一种所述多酚氧化酶。也就是说，所述茶多酚氧化酶、苹果多酚氧化酶、血浆铜蓝蛋白中的任一种或任两种以上的组合为所述抗肿瘤药物的主要活性成分。作为上述技术方案的改进，所述抗肿瘤药物含有茶多酚氧化酶，所述茶多酚氧化酶的制备方法如下：称取-4℃茶鲜叶25重量份，放入组织捣碎机内，加聚乙烯吡咯烷酮50重量份，再加入4℃的pH为5.6的柠檬酸-磷酸盐缓冲液200体积份，启动组织捣碎机进行捣碎作业3min，关闭组织捣碎机并休息5min，再开启组织捣碎机进行捣碎作业2min，将组织捣碎机中的混合物利用四层纱布抽滤得到第一滤液和滤渣，将滤渣放入研钵中，加入25重量份的石英砂以及pH为5.6的柠檬酸-磷酸盐缓冲液25体积份于冰浴中研磨5min，利用尼龙布过滤得到第二滤液，把第一滤液和第二滤液合并放入离心机中进行离心10min，离心机的转速为4000rpm，离心机中的上清液即为茶多酚氧化酶粗酶液；茶多酚氧化酶粗酶液利用硫酸铵进行盐析、DEAE-Sepbarose阴离子交换层析，最终得到电泳纯的茶多酚氧化酶。作为上述技术方案的改进，所述抗肿瘤药物含有苹果多酚氧化酶，所述苹果多酚氧化酶的制备方法为：将苹果洗净后在4℃保温，再将4℃的苹果去皮后取果肉200重量份加到组织捣碎机中，往组织捣碎机中加入500体积份-20℃的丙酮，组织捣碎机匀浆作业2min；将组织捣碎机中的混合物用布氏漏斗抽滤得到滤饼，滤饼用200体积份-20℃的丙酮再次提取抽滤得到白色粉末，白色粉末冷冻真空干燥即得PPO丙酮粉；将0.5重量份PPO丙酮粉溶于250体积份浓度为0.05mol/L且pH为6.8的磷酸盐缓冲溶液中，磷酸盐缓冲溶液的温度为4℃，用磁力搅拌器搅拌磷酸盐缓冲溶液20min得到混合液，将混合液倒入离心机中进行离心作业，离心机转速为5000r/min，离心作业10min后，离心机中的上清液即为苹果多酚氧化酶粗酶液；所述苹果多酚氧化酶粗酶液经过硫酸铵盐析、DEAEFastFlow柱层析分离后，得到电泳纯的苹果多酚氧化酶。作为上述技术方案的改进，所述抗肿瘤药物含有血浆铜蓝蛋白，所述血浆铜蓝蛋白的制备方法为：将500体积份的0℃的人血清倒入离心机中，在4℃且转速为6000rpm下离心15min后取上清液X，将取出的上清液X倒入容器中，在往容器中倒入与上清液X同等体积的浓度为0.05mol/L且pH为6.5的磷酸盐缓冲液，在容器中使用磁力搅拌器搅拌，在搅拌过程中还加入250体积份0℃的正丁醇；正丁醇加完后，关闭磁力搅拌器，容器中的物料在4℃下静止30min，再将容器中的物料倒入离心机中，在4℃且转速为8000rpm下离心30min后取上清液Y，上清液Y经过灭菌纱布过滤得脱脂血清；脱脂血清经过硫酸铵盐析、DEAEFastFlow柱层析分离后，获得电泳纯的血浆铜蓝蛋白。作为上述技术方案的改进，所述抗肿瘤药物用于治疗包括宫颈癌、肝癌、肺癌、结肠癌、胃癌。作为上述技术方案的改进，所述抗肿瘤药物还含有紫杉醇和华蟾素。作为上述技术方案的改进，用所述多酚氧化酶制备抗肿瘤药物时，先使用甲氧基聚乙二醇对所述多酚氧化酶进行表面修饰。所述多酚氧化酶是一种含铜的单电子氧化酶，属于氧化还原酶类，以直连或芳香族化合物等还原性分子及氧气为底物，能发生催化氧化、脱氢、交联聚合等化学反应的一类酶；多酚氧化酶具有酶的催化活性，可以对酚类化合物进行降解。茶多酚氧化酶、苹果多酚氧化酶、血浆铜蓝蛋白均具有抗肿瘤活性。所述多酚氧化酶加入药物学上可接受的辅料可制备成多种给药途径的抗肿瘤药物，例如通过口服（包括颊内或舌下）、经鼻、局部（包括颊内、舌下或经皮）、不经肠道（包括皮下、皮内肌肉内、关节内、骨膜内、胸骨内、鞘内、病灶内、静脉内或皮内注射或输注）途径给药。抗肿瘤药物可通过药剂学技术中已知的任何方法，例如通过使活性成分与载体或赋形剂结合来制备。例如片剂、胶囊剂、颗粒剂、微丸、微球、滴丸、控释制剂缓释制剂或注射剂。适于口服给药的药物制剂可呈现为独立单位，诸如胶囊、片剂、粉末或颗粒；水性或非水性液体中的溶液、悬浮液、水包油型液体乳液或油包水型乳液。可以以单位计量形式制备口服液体，如溶液、糖浆和酏剂。糖浆可通过使化合物溶解于经适当调味的水溶液中来制备，而酏剂是经由使用无毒载体（vehicle）来制备。还可添加增溶剂和乳化剂（如乙氧基化异十八醇和聚氧化乙烯山梨糖醇醚）、防腐剂。适当时，用于口服给药的剂量单位制剂可以是微胶囊化的也可通过涂布或包埋颗粒物质于聚合物、蜡或类似物中来制备制剂以延长或持续释放还可以以脂质体给药系统（诸如小单层脂质体、大单层脂质体和多层脂质体）的形式给药，脂质体可由各种各样的磷脂，如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱形成。适于经皮给药的药物制剂可以以意欲保持与接触者表皮紧密接触较长时段的独立贴片形式呈现。适于局部给药的药物制剂可配制为软膏剂、乳膏、悬浮液、洗剂、粉末、溶剂、糊剂、凝胶、喷雾剂、气雾剂、搽剂或油剂。本专利技术的有益效果：本专利技术茶多酚氧化酶、苹果多酚氧化酶、血浆铜蓝蛋白均具有优异的抗肿瘤活性，能够显著抑制宫颈癌、肝癌、肺癌、结肠癌、胃癌等肿瘤细胞增殖及治疗实验性肿瘤的效果，且没有明显的毒副作用；尤其是血浆铜蓝蛋白分别与紫杉醇、华蟾素合用，显著提高紫杉醇合华蟾素的抑瘤率，给多酚氧化酶本文档来自技高网...

【技术保护点】
多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用，其特征在于，所述多酚氧化酶是茶多酚氧化酶、苹果多酚氧化酶、血浆铜蓝蛋白中的一种，所述抗肿瘤药物含有最少一种所述多酚氧化酶。

【技术特征摘要】
1.多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用，其特征在于，所述多酚氧化酶是茶多酚氧化酶、苹果多酚氧化酶、血浆铜蓝蛋白中的一种，所述抗肿瘤药物含有最少一种所述多酚氧化酶。2.根据权利要求1所述多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物含有茶多酚氧化酶，所述茶多酚氧化酶的制备方法如下：称取-4℃茶鲜叶25重量份，放入组织捣碎机内，加聚乙烯吡咯烷酮50重量份，再加入4℃的pH为5.6的柠檬酸-磷酸盐缓冲液200体积份，启动组织捣碎机进行捣碎作业3min，关闭组织捣碎机并休息5min，再开启组织捣碎机进行捣碎作业2min，将组织捣碎机中的混合物利用四层纱布抽滤得到第一滤液和滤渣，将滤渣放入研钵中，加入25重量份的石英砂以及pH为5.6的柠檬酸-磷酸盐缓冲液25体积份于冰浴中研磨5min，利用尼龙布过滤得到第二滤液，把第一滤液和第二滤液合并放入离心机中进行离心10min，离心机的转速为4000rpm，离心机中的上清液即为茶多酚氧化酶粗酶液；茶多酚氧化酶粗酶液利用硫酸铵进行盐析、DEAE-Sepbarose阴离子交换层析，最终得到电泳纯的茶多酚氧化酶。3.根据权利要求1所述多酚氧化酶作为制备抗肿瘤药物的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物含有苹果多酚氧化酶，所述苹果多酚氧化酶的制备方法为：将苹果洗净后在4℃保温，再将4℃的苹果去皮后取果肉200重量份加到组织捣碎机中，往组织捣碎机中加入500体积份-20℃的丙酮，组织捣碎机匀浆作业2min；将组织捣碎机中的混合物用布氏漏斗抽滤得到滤饼，滤饼用200体积份-20℃的丙酮再次提取抽滤得到白色粉末，白色粉末冷冻真空干燥即得PPO丙酮粉；将0.5重量份PPO丙酮粉溶于250体积份浓度为0....

【专利技术属性】
技术研发人员：王林，娄世迪，尹若春，陈东东，苏利萍，
申请(专利权)人：安徽大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34