The present invention is a fusion protein for rapid detection of type I diabetes mellitus. The fusion protein for islet cell autoantigen (ICA69) gene and glutamate decarboxylase (GAD2) gene expression obtained by fusion ICA GAD fusion protein. The invention comprises the following steps: through DNA Star Software on the islet cell antibody (ICA69) gene and glutamate decarboxylase (GAD2) gene of B cell epitope analysis and determine its gene sequence by synthetic gene (ICA GAD), the target gene was inserted into expression vector pET28a, then transformed into BL21 (DE3) host, joined the IPTG on the target protein expression was induced by Ni column and dialysis bag; separation and purification of expressed protein; to detect ICA fusion protein GAD activity. The invention can detect any or two antibodies at once, and can significantly improve the diagnostic efficiency of I type diabetes, shorten the detection time and lower the medical expenses.
【技术实现步骤摘要】
一种用于快速检测I型糖尿病的融合蛋白
本专利技术涉及一种用于快速检测I型糖尿病的融合蛋白,特别是ICA69和GAD2融合表达的ICA-GAD融合蛋白
技术介绍
目前,随着人们生活水平的提高,使人们糖摄入量高,加上运动量少,导致部分人因过度肥胖诱发糖尿病。糖尿病是一种常见的以高血糖为特征的内分泌代谢疾病,是由于胰岛素分泌缺陷或其生物性能受损而导致的血糖过高,出现糖尿,进而引起脂肪和蛋白质代谢紊乱,导致各组织,特别是眼、肾、心脏、血管、神经性的慢性损害、功能障碍。糖尿病分为四种类型,即I型糖尿病、II型糖尿病、妊娠糖尿病和其他特殊类型糖尿病。在I型糖尿病的免疫破坏期间,患者体内会自动产生针对于胰岛细胞自身抗原的抗体。目前已经发现多种胰岛素自身抗体,如:胰岛细胞抗体(ICA)、胰岛细胞表面抗体(ICSA)、胰岛素抗体(IAA)、热休克蛋白抗体(HSP)、谷氨酸脱羧酶65抗体(GAD65,哺乳动物中GAD的存在形式之一)、蛋白质酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)等。临床上在诊断I型糖尿病常用的指标包括ICA、IAA、GAD、IA-2A等。目前只能对于I型糖尿病病人中ICA、IAA、GAD、IA-2A等多个自身抗体进行单一测定,步骤繁多且花费较高,效率低,特异性不足,时间长等缺点。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是针对现有现状,提供一种用于快速检测I型糖尿病的ICA-GAD融合蛋白,这种方法可以一次性检测出抗ICA69和GAD2任意一种或两种抗体。这种方法方便、简捷、高效,降低医疗成本和检测时长。本专利技术是通过以下技术方案实现的,具体包括以下步骤:(1 ...
【技术保护点】
一种用于快速检测I型糖尿病的融合蛋白。所述ICA‑GAD融合蛋白质为胰岛细胞自身抗原(ICA69)基因和谷氨酸脱羧酶(GAD2)基因通过融合表达获得的ICA‑GAD融合蛋白质。本专利技术包括以下步骤:合成目的基因(ICA‑GAD),将目的基因插入蛋白表达载体pet28a中,然后转化到BL21(DE3)宿主菌中,加入IPTG进行目标蛋白的诱导表达;用Ni柱和透析袋纯化分离出表达蛋白;对ICA‑GAD融合蛋白的活性进行检测。
【技术特征摘要】
1.一种用于快速检测I型糖尿病的融合蛋白。所述ICA-GAD融合蛋白质为胰岛细胞自身抗原(ICA69)基因和谷氨酸脱羧酶(GAD2)基因通过融合表达获得的ICA-GAD融合蛋白质。本发明包括以下步骤:合成目的基因(ICA-GAD),将目的基因插入蛋白表达载体pet28a中,然后转化到BL21(DE3)宿主菌中,加入IPTG进行目标蛋白的诱导表达;用Ni柱和透析袋纯化分离出表达蛋白;对ICA-GAD融合蛋白的活性进行检测。2.根据权利要求1所述的一种用于快速检测I型糖尿病的ICA-GAD融合蛋白,所述融合蛋白质为ICA69基因和GAD...
【专利技术属性】
技术研发人员:罗朝领,冯奇,马贵芳,杜庆辉,茅柳娟,
申请(专利权)人:上海领潮生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:上海,31
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