本发明专利技术公开了miR-197在作为肝癌检测标志物中的应用。本发明专利技术以实时荧光定量PCR技术为基础，以肝癌患者的血清miR-197为检测对象，通过比对正常人、肝癌患者及其他几种国内常见癌症(肝癌、食道癌、胃癌、结肠癌、肺癌)病例患者血清中miR-197的水平，发现miR-197在肝癌患者血清中的特异性高表达，因此，将血清中稳定存在的miR-197作为肝癌的血清标志物和分子靶标应用于肝癌临床诊断，用于制备以血清检测为基础的肝癌诊断产品，该产品将对肿瘤的治疗具有重要意义，有广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，具体涉及。
技术介绍
肝细胞性肝癌（HepatocellularCarcinoma,HCC，以下简称肝癌）是世界范围内 最常见的恶性肿瘤之一，其恶性程度高、侵袭力强、预后差，死亡率位居世界肿瘤死亡第二 位。中国是肝癌高发区，据统计每年发患者数占全球约55%。肝癌发病比较隐匿，早期缺乏 特异的临床表现，发现时往往已经属于中晚期。提高肝癌患者长期生存率的原则是早发现、 早诊断、早治疗，其中的关键是早期诊断。目前，最常用的肝癌常规诊断方法有影像学检查、肝组织活检或细胞学检查以及 肿瘤血清标志物检查。但是，影像学检查分辨率较差且存在难以检测的盲区，而肝穿刺活 检取样过程复杂，易造成较大创伤且易产生假阴性结果，因此，目前最理想的肝癌诊断方法 是非创性的肿瘤血清标志物检查。熟知的肝癌血清标志物比较多，如甲胎蛋白（AFP)、磷 脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)、α-L岩藻糖苷酶（AFU)等。但这些标志物在应用过程之中 普遍存在敏感度或特异度不高、在高危人群筛查和复发监测中缺乏有效的预警作用等局限 性。就当前临床现状来看，AFP仍是应用非常广泛的肝癌检测标志物，其阳性率最高也仅为 66. 7%〇 近年研究发现，血液中存在丰富而稳定的miRNA，其表达谱具有明显的组织特 异性，并且在不同疾病、不同肿瘤患者血清中也具有特异的表达谱，因此外周血miRNA作 为潜在标志物在肿瘤诊断中具有明显优势（PNAS，2008, 105(30): 10513-18)，目前已经 报道血清中的循环miRNA在多种肿瘤的诊断中具有较高的特异性和灵敏度（Molecular Cancer, 2010, 9 (306) : 1-9)。早在2009年就出现了有关肝癌的miRNA血清标志物研 究，至今已报道的具备肝癌诊断潜在价值的miRNA就有miR-21、miR-122、miR-210等 多种（Biomarkers，2009，14(7):529-38;M〇1Carcinog，2011，50 (2) :136-42;EurJ Cancer，2013, 49 (16) : 3442-9)。但是，上述研究普遍采用样本血清中原本就存在的核 酸作为内源性参照，例如RNU6B、RNU44、RNU48、miR-16等。由于miR-16本身在肿瘤 发生过程发挥功能，其表达水平并不稳定；而RNU6B等短序列RNA在血清中含量极低 不易检测，必然无法避免病患间的个体差异以及实验过程造成的误差（BMCClinical Pathology, 2014, 14:27)。因此，如何选取血清miRNA实验的内源性参照物至今还存在很大 争议（J.Cancer, 2012, 3:432-448) 〇 Cel-miR-39 是最早被发现的一批线虫miRNA之一（Science, 2001，294:858-62)。 由于线虫与哺乳动物在遗传上差距太大，cel-miR-39序列在哺乳动物等高等动物基因组内 不存在，其对哺乳动物生命过程也不产生影响。因而在哺乳动物miRNA检测过程中，外加人 工合成的cel-miR-39作为外源参照是目前控制样本间实验误差的一种可靠做法。 实时荧光定量PCR检测是一种通用的基因定量检测方法，它在PCR指数扩增期间 通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初 始量，而不需要取出PCR产物进行分离。实时定量PCR灵敏度高，通用性好，可重复性强，特 别适用于大通量检测，已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供检测miR-197表达量的物质的新用途。 本专利技术提供了检测miR-197表达量的物质在制备诊断或辅助诊断待测患者是否 为肝癌患者的产品中的应用。 本专利技术还提供了检测miR-197表达量的物质在制备检测或辅助检测肝癌的产品 中的应用。 上述应用中，所述miR-197的核苷酸序列如序列表中序列1所示。 上述应用中，所述检测miR-197表达量的物质为如下a)或b)或c): a)扩增所述miR-197的引物； b)含有所述a)的PCR试剂组； c)含有所述a)或所述b)的试剂盒。 上述应用中，所述引物由序列表中序列2所示的单链DNA分子和序列表中序列3 所示的单链DNA分子组成。 本专利技术的另一个目的是提供一种检测miR-197表达量的物质。 本专利技术提供的检测miR-197表达量的物质为如下1)或2): 1)诊断或辅助诊断待测患者是否为肝癌患者的产品； 2)检测或辅助检测肝癌的产品； 所述miR-197的核苷酸序列如序列表中序列1所示。 上述物质中，所述检测miR-197表达量的物质为如下a)或b)或c): a)扩增所述miR-197的引物； b)含有所述a)的PCR试剂组； c)含有所述a)或所述b)的试剂盒； 所述引物由序列表中序列2所示的单链DNA分子和序列表中序列3所示的单链 DNA分子组成。 本专利技术还有一个目的是提供一种检测待测患者是否为肝癌患者的试剂盒。 本专利技术提供的检测或辅助检测待测患者是否为肝癌患者的试剂盒包括上述检测 miR-197表达量的物质。 上述试剂盒中，所述试剂盒还包括记载有如下内容的诊断卡： 1)若待测患者的miR-197的表达量高于健康人，且二者有显著差异，则待测患者 为或候选为肝癌患者；2)若待测患者不满足上述步骤1)的条件，则待测患者不为或候选不 为肝癌患者。 上述试剂盒中，所述待测患者的miR-197的表达量高于健康人，且二者有显著差 异为待测患者血清中miR-197的表达量比健康人血清中miR-197的表达量高18. 8倍。 本专利技术的最后一个目的是提供上述试剂盒的新用途。 本专利技术提供了上述试剂盒在制备诊断或辅助诊断待测患者是否为肝癌患者的产 品中的应用。 本专利技术还提供了上述试剂盒在制备检测或辅助检测肝癌的产品中的应用。 上述miR-197表达量为血清中miR-197的表达量。 本专利技术以实时荧光定量PCR技术为基础，以肝癌患者的血清miR-197为检测对象， 采用线虫小RNAcel-miR-39为外源参照，通过比对正常人、肝癌患者及其他几种国内常见 癌症（肝癌、食道癌、胃癌、结肠癌、肺癌）病例患者血清中miR-197的水平，发现miR-197 在肝癌患者血清中的特异性高表达，因此，将血清中稳定存在的miR-197作为肝癌的血清 标志物和分子靶标应用于肝癌临床诊断，用于制备以血清检测为基础的肝癌诊断产品，该 产品将对肿瘤的治疗具有重要意义，有广阔的应用前景。【附图说明】 图1为实时荧光定量PCR检测血清miRNA。图1A为PCR扩增曲线；图1B为扩增 产物溶解曲线；图1C为扩增产物溶解峰。 图2为各样本miR-197表达水平比较。 图3为肝癌患者与正常人之间miR-197表达差异的AUC分析。【具体实施方式】 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。 实施例1、miR-197在作为检测肝癌标志物中的应用 -、待测血清样本的获得及信息 本专利技术所检测的血清样本均由甘肃省医学科学研究中心甘肃肿瘤血清资源库提 供，每例病患血清均有对本文档来自技高网...
【技术保护点】
检测miR‑197表达量的物质在制备诊断或辅助诊断待测患者是否为肝癌患者的产品中的应用；所述miR‑197的核苷酸序列如序列表中序列1所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：丁楠，董峰，华君瑞，周光明，
申请(专利权)人：中国科学院近代物理研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。