一种鉴别高油酸与普通油酸花生品种间F1种子真伪的无破损检测方法技术

本发明专利技术涉及一种鉴别高油酸与普通油酸花生品种间F1种子真伪的无破损检测方法，收获高油酸与普通油酸品种间杂交组合的所有F1种子和相同种植条件下母本自交的种子；利用近红外光谱技术分别测定单粒的母本和F1的油酸含量；当母本是普通油酸花生时，计算单粒F1种子的油酸含量比母本高的比例，若高的比例大于10%，则该F1为真杂种，否则是伪杂种；当母本是高油酸花生时，计算单粒F1的油酸含量比母本低的比例；若低的比例大于20%，则该F1种子为真杂种，否则是伪杂种；本发明专利技术对种子无任何损毁，无前处理、无污染、方便快捷，测定速度快；检测时除了近红外光谱分析仪外，无需其他实验设备，简便快捷，易于实施。

【技术实现步骤摘要】
一种鉴别高油酸与普通油酸花生品种间F1种子真伪的无破损检测方法
本专利技术属于农业生物工程领域，具体涉及一种鉴别高油酸与普通油酸花生品种间F1种子真伪的无破损检测方法。
技术介绍
油料作物种子中的脂肪酸组成及其含量是衡量其品质优劣的重要指标。在花生种子的脂肪酸组份中，油酸和亚油酸含量约为80%。油酸具有较好的氧化稳定性，能够减少脂质氧化，如果提高花生脂肪酸中的油酸含量，则能改善由于脂质氧化而产生的不良气味、口味及货架期缩短等缺点。高油酸花生对人体健康有益，食用高油酸花生有利于降低心脑血管疾病的风险，还能反向抑制人体炎症细胞因子TNF-α。因此，高油酸花生倍受青睐，根据市场需要选育优质、高产、抗病（逆）的高油酸品种也成为花生育种的重要目标。杂交育种仍是花生育种的主要手段，通过杂交可以使杂种后代增加变异性和异质性，由于基因重组而产生双亲所没有的某些新性状，经过对优良性状的综合选择，使后代获得较大的遗传改良。杂交育种技术在培育高油酸花生品种中得到了广泛应用，通常情况下是以综合性状优良的普通油酸含量的品种(油酸含量低于60%)和高油酸品种（油酸含量高于70%）做为亲本，通过有性杂交和选择，使高油酸性状与其他优良性状成功聚合。而杂交育种时，伪杂种的产生是不可避免的，剔除F1中的伪杂种，可大大减少高油酸选育的工作量，提高育种效率。自发突变体F435是在Florida育种项目中最早发现的高油酸花生（含80%油酸和2%亚油酸）。将高油酸和普通油酸花生杂交，其杂种F2的分离比为3:1或15:1，表明高油酸性状是受两对基因（FAD2A和FAD2B）控制的隐性性状。研究表明，高油酸花生与普通油酸花生的基因相比，存在2个突变位点。一个是FAD2A基因起始密码子后448bp处G:C→A:T的突变，另一个是FAD2B基因起始密码子后442bp处A插入的突变或665bp(或997bp)处微型反向重复转座元件（MITE）插入。因此，通过在杂交F1检测这些突变，则可以剔除伪杂种。但是目前检测这些突变的方法如CAPS、实时定量PCR、测序和AS-PCR都需要提取种子的DNA，会造成种子不同程度的破损，这些破损会影响种子的保存和萌发；而且并不是所有的育种机构都具有利用分子生物学手段检测这些突变的实验条件。所以，一种简便的检测技术对于大多致力于培育高油酸花生品种的单位是非常必要的。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题：克服现有技术的缺陷，提供一种通过近红外光谱测定高油酸与普通油酸花生品种间F1种子的油酸含量鉴别F1种子真伪的无破损检测方法，该方法具有对种子无任何损毁，无前处理、无污染、方便快捷、测定速度快等优点。本专利技术的技术方案：一种鉴别高油酸与普通油酸花生品种间F1种子真伪的无破损检测方法，包括以下步骤：（1）收获高油酸与普通油酸品种间杂交组合的所有F1种子和相同种植条件下母本自交的种子；（2）利用近红外光谱技术分别测定单粒的母本和F1种子的油酸含量，母本测定多粒种子的油酸含量，取平均值待用；（3）当母本是普通油酸花生时，计算单粒F1种子的油酸含量比母本油酸含量的平均值高的比例；若高的比例大于10%，则该F1种子为真杂种，否则是伪杂种；计算时母本油酸含量取测定的平均值；当母本是高油酸花生时，计算单粒F1种子的油酸含量比母本油酸含量低的比例；若低的比例大于20%，则该F1种子为真杂种，否则是伪杂种；计算时母本油酸含量取测定的平均值。当母本的基因型为AABB或aabb时，所述真杂种的基因型为AaBb，伪杂种的基因型为AABB或aabb。其中普通油酸花生品种的油酸含量低于60%，高油酸品种的油酸含量高于70%，所述的多粒种子为10-20粒。所述高油酸与普通油酸品种间杂交组合时，母本为高油酸花生或普通油酸花生。用近红外光谱技术测定油酸含量的步骤为:打开近红外光谱分析仪电源，预热半小时；将花生种子放入样品测定台的中心位置，选取预存的用于油酸分析的光谱曲线，点击测定，保存读数，重复三次即可。通过近红外光谱技术测定高油酸与普通油酸花生杂交组合的F1种子及母本的油酸含量，当母本是普通油酸花生（包括AABB和aaBB两种基因型）时，计算单粒的F1种子的油酸含量比母本油酸含量（取母本油酸测定的平均值）高的比例，若高的比例大于10%，则该F1种子为真杂种，否则是伪杂种。当母本是高油酸花生时，计算单粒的F1种子的油酸含量比母本油酸含量（取供体母本油酸测定的平均值）低的比例，若低的比例大于20%，则该F1种子为真杂种，否则是伪杂种。本专利技术的积极有益效果（优点）：（1）本专利技术是以近红外光谱检测技术为基础，通过检测普通油酸与高油酸花生的杂种组合的F1种子的油酸含量，准确区分真伪杂种。该方法对种子无任何损毁，无前处理、无污染、方便快捷，测定速度快；检测时除了近红外光谱分析仪外，无需其他实验设备，简便快捷，易于实施。（2）本专利技术方法操作简单，结果稳定，成本低。与定量PCR方法、酶切方法比较，该方法操作简单；不用荧光染料及限制性内切酶，除近红外光谱分析仪以外无需其他仪器，检测成本低，对于实验基础薄弱的育种单位非常有利。（3）由于杂交育种时，伪杂种的产生是不可避免的，利用该方法剔除杂交组合F1中的伪杂种，可大大减少育种后期选育的工作量和无效劳动。本专利技术为高油酸花生品种选育提供了新的技术手段，可显著提高高油酸性状选择的准确性，具有简单、高效、不对种子造成损伤等特点，可显著提高育种效率，降低育种成本。附图说明图1FAD2A的突变基因型测序结果图；图2FAD2B的突变基因型测序结果图。具体实施方式以下实施例可以更好的理解本专利技术，但以下并不表示对本专利技术的任何限制。实施例1、一种鉴别高油酸与普通油酸花生品种间F1种子真伪的无破损检测方法，包括以下步骤：（1）收获高油酸与普通油酸品种间杂交组合的所有F1种子和相同种植条件下母本自交的种子；（2）利用近红外光谱技术分别测定单粒的母本和F1种子的油酸含量。母本测定10-20粒种子的油酸含量，取平均值待用；用近红外光谱技术测定油酸含量的步骤:打开近红外光谱分析仪（DA7200DiodeArrayAnalyzer）的电源，预热半小时；将花生种子放入样品测定台的中心位置，选取预存的用于油酸分析的光谱曲线，点击测定，保存读数，重复三次。（3）当母本是普通油酸花生时，计算单粒F1种子的油酸含量比母本油酸含量高的比例；若高的比例大于10%，则该F1种子为真杂种，否则是伪杂种；计算时以母本油酸测定的平均值为基准；当母本是高油酸花生时，计算单粒F1种子的油酸含量比母本油酸含量低的比例；若低的比例大于20%，则该F1种子为真杂种，否则是伪杂种；计算时以母本油酸测定的平均值为基准。其中普通油酸花生品种的油酸含量低于60%，高油酸品种的油酸含量高于70%。当母本的基因型为AABB或aabb时，得到真杂种的基因型为AaBb，得到伪杂种的基因型为AABB或aabb。实施例2：用分子标记方法鉴定杂交种子中的真伪杂种。分别收获杂交组合wt09-0023×远杂9102和远杂9102×wt09-0023的杂交F1种子，对每粒F1种子编号，在种子远胚端切取少量组织提取DNA。远杂9102的FAD2基因(ahFAD2A和ahFAD2B)的基因型为AABB，wt09-002本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鉴别高油酸与普通油酸花生品种间F1种子真伪的无破损检测方法，其特征是：该方法包括以下步骤：（1）收获高油酸与普通油酸品种间杂交组合的所有F1种子和相同种植条件下母本自交的种子；（2）利用近红外光谱技术分别测定单粒的母本和F1种子的油酸含量，母本测定多粒种子的油酸含量，取平均值待用；（3）当母本是普通油酸花生时，计算单粒F1种子的油酸含量比母本油酸含量的平均值高的比例；若高的比例大于10%，则该F1种子为真杂种，否则是伪杂种；计算时母本油酸含量取测定的平均值；当母本是高油酸花生时，计算单粒F1种子的油酸含量比母本油酸含量低的比例；若低的比例大于20%，则该F1种子为真杂种，否则是伪杂种；计算时母本油酸含量取测定的平均值。

【技术特征摘要】
1.一种鉴别高油酸与普通油酸花生品种间F1种子真伪的无破损检测方法，其特征是：该方法包括以下步骤：（1）收获高油酸与普通油酸品种间杂交组合的所有F1种子和相同种植条件下母本自交的种子；（2）利用近红外光谱技术分别测定单粒的母本和F1种子的油酸含量，母本测定多粒种子的油酸含量，取平均值待用，所述的多粒种子为10-20粒；（3）当母本是普通油酸花生时，计算单粒F1种子的油酸含量比母本油酸含量的平均值高的比例；若高的比例大于10%，则该F1种子为真杂种，否则是伪杂种；计算时母本油酸含量取测定的平均值；当母本是高油酸花生时，计算单粒F1种子的油酸含量比母本油酸含量低的比例；若低的比例大于20%，则该F1种子为真杂种，否则是伪杂种；计算时母本油酸含量...

【专利技术属性】
技术研发人员：张新友，齐飞艳，黄冰艳，刘华，张忠信，臧秀旺，刘娟，石磊，董文召，汤丰收，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，
类型：发明
国别省市：河南;41