花生高油酸材料的快速鉴定方法技术

本发明专利技术涉及一种花生高油酸材料的鉴定方法。本发明专利技术涉及一种花生高油酸材料的快速简易鉴定方法，利用油酸质量含量差异较大的一批花生材料，提取花生油，分别测定油酸质量含量（气相色谱法）和花生油的折光指数，建立油酸质量含量与折光指数的线性关系和标准曲线方程。以油酸质量含量≥７０％作为花生高油酸材料的标准，也就是标准温度（２５℃）下的折光指数≤１．４６６７，能作为花生高油酸材料的判断标准；测定未知花生材料的折光指数，未知花生材料标准温度（２５℃）下的折光指数≥１．４６６７，则未知花生材料属于花生高油酸材料；并利用方程换算出油酸质量含量。操作简单、成本低，本发明专利技术提供的方法鉴定结果可靠性高达９５％以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种花生高油酸材料的鉴定方法。
技术介绍
花生高油酸育种是花生遗传改良研究的重要方向。高油酸花生具有提升花生及其 制品的营养价值和延长货架寿命的双重作用，油酸被认为是平衡油脂营养及化学稳定性矛 盾的首选脂肪酸。目前，测定花生中油酸含量的标准方法是气相色谱法，但操作复杂、样品 测试费用昂贵、对设备要求较高，一般的花生育种单位尚未配备气相色谱仪，不具备开展大 规模脂肪酸测定的设备和技术条件，限制了花生高油酸育种的研究进展。
技术实现思路
本专利技术旨在于提供一种操作简单、成本低的。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案是，其特 征在于它包括如下步骤1)花生油的提取选择油酸质量含量不同花生待测样品24份，对不同花生待测样 品分别进行编号，将24份花生待测样品分别取0. 5克装入各自对应的2mL离心管中，用玻 棒分别捣碎24份花生待测样品，并且每一离心管中加入1. OmL的石油醚，振荡，室温下静置 3 4小时后，lOOOOg离心5分钟，将24份上清液各自转移到新的1. 5mL离心管中，将新的 离心管敞口置于通风橱以挥干石油醚，得到24份花生油；2)24份花生待测样品的折光指数的测定①使用折光仪(数字式折光仪或手持 式折光仪)分别测定24份花生油各自的环境温度下的折光指数用移液器吸取第一份花 生油20 yL，滴加到棱镜表面，盖上棱镜盖，读取第一份花生油的折光指数和环境温度；依 此类推，分别读24份花生油的折光指数和环境温度；②将环境温度下测定的折光指数校 正为标准温度下的折光指数，标准温度为25°C，标准温度下折光指数的换算公式nD25 = nDx+0. 00038X (X_25)，其中nD25为25°C下的折光指数，nDx是环境温度为X时的折光指 数；得到24份花生待测样品各自的标准温度下的折光指数；3) 24份花生待测样品的油酸质量含量的测定将步骤1)所得24份花生油各提取 5P L，利用气相色谱仪按照国家标准GB/T 17377-1998的方法测定各自的油酸质量含量， 得到24份花生待测样品各自的油酸质量含量；4)油酸含量与折光指数标准曲线的建立根据24份花生待测样品各自的油酸 质量含量和标准温度下的折光指数，建立油酸质量含量与折光指数的标准曲线方程Y = -9104.6XX+13424，X表示25°C条件下测定的样品折光指数，Y表示样品的油酸质量含量 (%)；5)花生高油酸材料的准确以油酸质量含量> 70%作为花生高油酸材料的标准， 根据步骤4)可知，标准温度下的折光指数< 1.4667，能作为花生高油酸材料的判断标准；6)未知花生材料是否属于花生高油酸材料的判定①未知花生材料取0. 5克装入2mL离心管中，用玻棒捣碎，离心管中加入1. OmL的石油醚，振荡，室温下静置3 4小时后，IOOOOg离心5分钟，将离心管中的上清液转移到新的1.5mL离心管中，将新的离心管敞口置 于通风橱以挥干石油醚，得到未知花生材料的花生油；②未知花生材料的折光指数的测定使用折光仪(数字式折光仪或手持式折光 仪)测定未知花生材料的花生油的折光指数用移液器吸取未知花生材料的花生油20 30 μ L，滴加到棱镜表面，盖上棱镜盖，读取未知花生材料的花生油的折光指数和环境温度； 将环境温度下测定的折光指数校正为标准温度下的折光指数，标准温度下折光指数的换算 公式nD25 = nDx+0. 00038X (X_25)，其中nD25为25°C下的折光指数，nDx是环境温度为X 时的折光指数；得到未知花生材料标准温度下的折光指数；③若未知花生材料标准温度下的折光指数< 1. 4667，则未知花生材料属于花生高 油酸材料；如果未知花生材料标准温度下的折光指数> 1.4667，则未知花生材料不属于花 生高油酸材料。将未知花生材料标准温度下的折光指数代入=Y1 = -9104. 6XXJ13424中，可得到 未知花生材料的油酸质量含量(％)；其中，X1表示未知花生材料标准温度下的折光指数,Y1 表示未知花生材料的油酸质量含量(％)。本专利技术利用的基本原理是植物油中碳链长度和饱和度不同的脂肪酸其折光指数 存在差异；花生油的油酸含量越高，其折光指数愈低，二者在一定范围内呈线性关系。专利技术 的技术路线是利用油酸质量含量差异较大的一批花生材料，提取花生油(油脂)，分别测 定油酸质量含量(气相色谱法)和花生油的折光指数，建立油酸质量含量与折光指数的线 性关系和标准曲线方程。以油酸质量含量> 70%作为花生高油酸材料的标准，也就是标准 温度(25°C )下的折光指数< 1. 4667，能作为花生高油酸材料的判断标准；测定未知花生材 料的折光指数，未知花生材料标准温度(25°C )下的折光指数< 1. 4667，则未知花生材料属 于花生高油酸材料(如图2所示)；并利用方程换算出油酸质量含量，达到以折光指数法间 接测定油酸含量的目的，在花生高油酸育种实践中具有重要利用价值。本专利技术的有益效果是1、操作简单、成本低。只需测定未知花生材料的折光指数，换算成标准温度下折光 指数，若未知花生材料标准温度(25°C )下的折光指数< 1. 4667，则未知花生材料属于花生 高油酸材料；并且本专利技术可以在较为简单的实验条件下有效鉴定花生高油酸材料，尤其适 合对育种材料作批量筛选，操作简单，分析测试费用降低90%以上，鉴定成本低廉。2、本专利技术可在较为简单的实验条件下高通量地筛选花生高油酸材料，尤其适合在 高油酸育种中的早期世代进行单株筛选，能够利用半粒种子进行鉴定，剩下的半粒种子可 以继续种植。通过与标准方法的比较，本专利技术提供的方法鉴定结果可靠性高达95%以上。附图说明图1是本专利技术以花生材料的油酸含量(气相色谱测定)和折光指数建立的标准曲 线方程图，相关系数为R2 = 0. 9911。图2为本专利技术的基本原理示意图。具体实施例方式为了更好地理解本专利技术，下面结合实例进一步阐明本专利技术的内容，但本专利技术不仅 仅局限于下面的实施例。本专利技术测定的对象包括花生单粒、单株混合或株系混合种子。由于折光指数的测 定仅需花生油20 y L即可，因此花生油的提取可在1. 5mL离心管内批量操作，以下仅以单粒花 生种子为材料说明专利技术的具体步骤，单株花生和株系样品的鉴定方法仅需缩小样本即可。实施例1 ，它包括如下步骤1)花生待测样品的制备取健康饱满的花生种子作为供试材料，取单粒花生种子 从中部横切，不含胚的部分用于鉴定，含胚部分保留到下年种植；如果鉴定单株花生，可将 整株的花生种子在远胚轴端切去1/5，混合后待测，含胚部分留待下年种植；花生油的提取选择油酸质量含量在35. 91% 82. 37%之间不同花生待测样品 24份(具体见表1)，对不同花生待测样品分别进行编号，将24份花生待测样品分别取0. 5 克装入各自对应的2mL离心管中(即离心管为相应的24个，每一个离心管装一份花生待测 样品)，用玻棒分别捣碎24份花生待测样品，并且每一离心管中加入1. OmL的石油醚(沸程 60-90°C )，剧烈振荡，室温下静置3 4小时后，10000g离心5分钟，将24份上清液各自转 移到新的1. 5mL离心管中(即24个新的离心管)，将新的离心管敞口置于通本文档来自技高网...

【技术保护点】
花生高油酸材料的快速鉴定方法，其特征在于它包括如下步骤：１）花生油的提取：选择油酸质量含量不同花生待测样品２４份，对不同花生待测样品分别进行编号，将２４份花生待测样品分别取０．５克装入各自对应的２ｍＬ离心管中，用玻棒分别捣碎２４份花生待测样品，并且每一离心管中加入１．０ｍＬ的石油醚，振荡，室温下静置３～４小时后，１００００ｇ离心５分钟，将２４份上清液各自转移到新的１．５ｍＬ离心管中，将新的离心管敞口置于通风橱以挥干石油醚，得到２４份花生油；２）２４份花生待测样品的折光指数的测油酸材料。定：①使用折光仪分别测定２４份花生油各自的环境温度下的折光指数：用移液器吸取第一份花生油２０μＬ，滴加到棱镜表面，盖上棱镜盖，读取第一份花生油的折光指数和环境温度；依此类推，分别读２４份花生油的折光指数和环境温度；②将环境温度下测定的折光指数校正为标准温度下的折光指数，标准温度为２５℃，标准温度下折光指数的换算公式：ｎＤ２５＝ｎＤｘ＋０．０００３８×（Ｘ－２５），其中ｎＤ２５为２５℃下的折光指数，ｎＤｘ是环境温度为Ｘ时的折光指数；得到２４份花生待测样品各自的标准温度下的折光指数；３）２４份花生待测样品的油酸质量含量的测定：将步骤１）所得２４份花生油各提取５μＬ，利用气相色谱仪按照国家标准ＧＢ／Ｔ１７３７７－１９９８的方法测定各自的油酸质量含量，得到２４份花生待测样品各自的油酸质量含量；４）油酸含量与折光指数标准曲线的建立：根据２４份花生待测样品各自的油酸质量含量和标准温度下的折光指数，建立油酸质量含量与折光指数的标准曲线方程：Ｙ＝－９１０４．６×Ｘ＋１３４２４，Ｘ表示２５℃条件下测定的样品折光指数，Ｙ表示样品的油酸质量含量（％）；５）花生高油酸材料的准确：以油酸质量含量≥７０％作为花生高油酸材料的标准，根据步骤４）可知，标准温度下的折光指数≤１．４６６７，能作为花生高油酸材料的判断标准；６）未知花生材料是否属于花生高油酸材料的判定：①未知花生材料取０．５克装入２ｍＬ离心管中，用玻棒捣碎，离心管中加入１．０ｍＬ的石油醚，振荡，室温下静置３～４小时后，１００００ｇ离心５分钟，将离心管中的上清液转移到新的１．５ｍＬ离心管中，将新的离心管敞口置于通风橱以挥干石油醚，得到未知花生材料的花生油；②未知花生材料的折光指数的测定：使用折光仪测定未知花生材料的花生油的折光指数：用移液器吸取未知花生材料的花生油２０～３０μＬ，滴加到棱镜表面，盖上棱镜...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：雷永，廖伯寿，姜慧芳，王圣玉，黄家权，晏立英，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]