一种植物全基因组DNA甲基化检测探针、试剂盒、探针制备及探针检测方法技术

本发明专利技术提供了一种植物全基因组DNA甲基化检测探针、试剂盒、探针制备及探针检测方法，分析获取MBD基因家族成员的序列；设计相应的引物对基因进行扩增，获取MBD基因家族成员；利用同源重组的方法将不同MBD基因分别连接至带绿色荧光蛋白的植物表达载体；分别将载体转入农杆菌中，瞬时侵染烟草叶片后揭取烟草下表皮细胞放置于激光共聚焦显微镜中，激光激发荧光；挑选与DNA甲基化最好的MBD基因。找到目标基因中能与DNA甲基化区域结合的最小单位结构域；将两个MBD基因甲基化结合域进行基因融合处理；通过同源重组的方法将融合基因连接至带绿色荧光蛋白(GFP)的植物表达载体，检测整个基因组的甲基化情况；观察甲基化水平的改变，样品制备方便快捷，价格便宜。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于本专利技术涉及基因检测，具体地，涉及一种植物全基因组dna甲基化检测探针、试剂盒、探针制备及探针检测方法。

技术介绍

1、植物全基因组甲基化检测一直是植物表观遗传学研究的一个难点。目前常规的植物甲基化检测方法是针对某一个特定基因进行的甲基化特异pcr(msp)，该方法只能针对某个基因的甲基化进行检测，且前期样品处理时间长，实验过程繁琐。到目前为止一直缺乏一种快速、有效及准确的检测手段。

2、现有的甲基化检测技术大体可以分为两类

3、(一)基于mip引物的检测方法

4、01、直接测序法：这种方法一度被认为是dna甲基化分析的金标准。过程：经过亚硫酸氢盐处理后，用pcr扩增目的片段，并对pcr产物进行测序，将序列与未经处理的序列进行比较，判断cpg位点是否发生甲基化。这种方法可靠，且精确度高，能明确目的片段中每一个cpg位点的甲基化状态，缺点是：需要大量的克隆测序，过程较为繁琐、昂贵。

5、02、焦磷酸测序：焦磷酸测序技术pyrosequencing作为一种新的序列分析技术，能够快速地检测甲基化的频本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种植物全基因组DNA甲基化检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包含探针，所述探针的核苷酸序列如SEQ:NO1所示。

2.一种试剂盒，所述试剂盒包含如权利要求1中所述的检测试剂。

3.根据权利要求2所述的一种试剂盒，其特征在于，所述检测试剂中的探针质粒含量为4ng。

4.一种如权利要求1中所述检测探针的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.一种如权利要求3所述的方法构建的检测探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

6.一种如权利要求5制备的检测探针的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

【技术特征摘要】

1.一种植物全基因组dna甲基化检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包含探针，所述探针的核苷酸序列如seq:no1所示。

2.一种试剂盒，所述试剂盒包含如权利要求1中所述的检测试剂。

3.根据权利要求2所述的一种试剂盒，其特征在于，所述检测试剂中的探针质粒含...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪魏，王玲，汪磊，谭美莲，严兴初，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，
类型：发明
国别省市：