本发明专利技术公开了一种高纯度11S大豆球蛋白的制备方法及其应用。本发明专利技术公开的一种11S大豆球蛋白的制备方法，包括如下步骤：（1）将脱脂大豆粉用酸沉法得蛋白粗提液；（2）将（1）的粗提液进行强阴离子交换层析进行分离纯化，收集目的洗脱液1；（3）将目的洗脱液1进行陶瓷羟基磷灰石层析分离纯化，收集目的洗脱液2，即为目的蛋白；所述目的蛋白为沉降系数为11S的大豆球蛋白。本发明专利技术公开的方法工艺简单，易于流水线分离纯化，便于工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种高纯度11S大豆球蛋白的制备方法及其应用。本专利技术公开的一种11S大豆球蛋白的制备方法，包括如下步骤：（1）将脱脂大豆粉用酸沉法得蛋白粗提液；（2）将（1）的粗提液进行强阴离子交换层析进行分离纯化，收集目的洗脱液1；（3）将目的洗脱液1进行陶瓷羟基磷灰石层析分离纯化，收集目的洗脱液2，即为目的蛋白；所述目的蛋白为沉降系数为11S的大豆球蛋白。本专利技术公开的方法工艺简单，易于流水线分离纯化，便于工业化生产。【专利说明】一种高纯度11S大豆球蛋白的制备方法及其应用
本专利技术涉及一种高纯度IlS大豆球蛋白的制备方法及其应用。
技术介绍
大豆不仅是优良的油料作物，而且是理想的食用蛋白资源，随着现代科技的发展以及人们对大豆蛋白营养特性和功能特性认识的加深，高蛋白含量的脱脂大豆粉及其分离纯化的蛋白已经广泛应用于动物养殖、食品加工等领域。根据超速离心法的沉降系数不同将大豆蛋白分为2S、7S、11S和15S大豆球蛋白。7S与IlS球蛋白占大豆总蛋白含量的80%以上，它们的功能性质(水溶性、乳化性与表面活性等)与营养性质存在显著差异，IIS大豆球蛋白具有高凝胶性，7S大豆球蛋白具有高乳化性。目前分离IlS与7S大豆球蛋白的方法主要是根据等电点不同采取酸沉淀法使两种蛋白分步沉淀。但由于IlS与7S大豆球蛋白的等电点相差不大，由该方法往往需要采用多步分离，并借助低温设备与高速离心装置提高分离的精度，分离工艺繁杂冗长，大多只能用于实验室样品的制备；其次，大部分方法分离所得的蛋白纯度较低，限制了两种蛋白在实际生产中的应用，目前还没有一种工艺相对简单且能够面向工业化生产的有效方法。
技术实现思路
本专利技术的目的 是提供一种高纯度IlS大豆球蛋白的制备方法及其应用。本专利技术公开的一种IlS大豆球蛋白的制备方法，包括如下步骤:(I)将脱脂大豆粉用酸沉法得蛋白粗提液；(2)将(I)的粗提液进行强阴离子交换层析进行分离纯化，收集目的洗脱液I ;(3)将目的洗脱液I进行陶瓷羟基磷灰石层析分离纯化，收集目的洗脱液2，即为目的蛋白；所述目的蛋白为沉降系数为IlS的大豆球蛋白。上述方法中，所述步骤(1)的步骤为:I)将所述脱脂大豆粉与含有IOmM巯基乙醇的Tris-HCl缓冲液按照lg:20ml的比例混合，37°C提取I小时，离心后收集上清液；2)将I)的上清液pH调至6.4，离心收集沉淀；3)将2)的沉淀用Tris-HCl缓冲液溶解，经滤膜过滤收集滤液，即为所述蛋白粗提液；所述Tris-HCl 缓冲液为 50mM pH8.0 的 Tris-HCl 缓冲液；所述滤膜为0.45 μ m滤膜。上述任一所述的方法中，所述步骤(2)中，强阴离子交换层析的柱填料为CaptoQ;所述强阴离子交换层析的柱的内径为1.6cm，填料高度为5cm ；所用的洗脱缓冲液由如下A溶液和B溶液组成:A 溶液:50mM ρΗ8.0Tris-HCl 缓冲液；B溶液:在50mM pH8.0Tris-HCl缓冲液中加入NaCl至终浓度为IM ；洗脱方式为线性梯度洗脱，所述B溶液在所述洗脱缓冲液中的体积百分含量变化为从O到100% ；所用洗脱缓冲液的用量为3-4个柱体积；所述洗脱缓冲液的流速为10ml/min ；在280nm处监测洗脱液的吸光度，收集各洗脱峰；将各洗脱峰进行SDS-PAGE电泳，根据蛋白分子量确定哪种洗脱峰为目的洗脱液I。上述任一所述的方法中，所述步骤(3)中，所述陶瓷羟基磷灰石的柱的内径为1.6cm，填料高度为5cm ；所用的洗脱缓冲液由如下A溶液和B溶液组成:A 溶液:50mM pH6.5 的 PB 缓冲液；B溶液:在50mM pH6.5的PB缓冲液中加入NaCl至终浓度为IM ；洗脱方式为线性梯度洗脱，所述B溶液在所述洗脱缓冲液中的体积百分含量变化为从O到100% ；所述洗脱缓冲液的用量为3-5`个柱体积；所述洗脱缓冲液的流速为10ml/min ；在280nm处监测洗脱液的吸光度，收集各洗脱峰；将各洗脱峰进行SDS-PAGE电泳，根据蛋白分子量确定哪种洗脱峰为目的洗脱液2。上述任一所述的方法在制备IlS大豆球蛋白中的应用也属于本专利技术的保护范围；所述IlS大豆球蛋白为沉降系数为IlS的大豆球蛋白。本专利技术具有如下优点和有益效果:(I)将酸沉淀和柱层析有效结合，从而提高了 IlS大豆球蛋白的纯度，纯度在97%以上。(2) IlS大豆球蛋白分离纯化工艺简单，易于流水线分离纯化，便于工业化生产。【专利附图】【附图说明】图1为IIS大豆球蛋白的Capto Q纯化谱图。图2为IIS大豆球蛋白的SDS-PAGE电泳检测。 图3为IIS大豆球蛋白的CHT纯化谱图。【具体实施方式】下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。50mM pH8.0的Tris-HCl缓冲液按照如下方法制备:121gTris碱，加800ml纯水，溶解后，用浓盐酸调节pH值到8.0，然后用纯水再定容到1L，配制成IM的母液,然后用纯水按照1:20的体积比稀释成50mM pH8.0的Tris-HCl缓冲液。500mM pH6.5的PB缓冲液按照如下方法制备:A 液:取 NaH2PO4.H2027.6g 溶于蒸馏水，定容至 1000ml。B 液:取 Na2HPO4.7H2053.6g 溶于蒸馏水，定容至 1000ml。取A液68.5ml与B液3L 5ml混合，用水定容至400ml，调pH至6.5。50mM pH6.5的PB缓冲液按照如下方法制备:将500mM pH6.5的PB缓冲液用水稀释10倍。巯基乙醇购自北京益德益华科技发展有限公司，产品目录号为M-6250。脱脂大豆粉购自安阳市奇天生物技术有限公司，产品目录号为201010101010。Capto Q 填料购自 GE Healthcare，货号为 20091005。XK16/20 柱购自 GE Healthcare，货号为 28_9889-37。CHT 填料购自 Bio-Rad，货号为 Bio-Scale CHTl。实施例1、11S大豆球蛋白的分离纯化一、IlS大豆球蛋白的粗提取(一)将脱脂大豆粉按照lg:20ml的体积比与50mMpH8.0的Tris-HCl缓冲液(含IOmM巯基乙醇)混合，37°C提取I小时，28°C 1000Orpm离心15分钟，收集上清液。(二)用2mol/L的HCl将上清液的pH调至6.4，28°C 1000Orpm离心15分钟，收集沉淀。(三)将沉淀用50mMpH8.0的Tris-HCl缓冲液溶解，经0.45 μ m滤膜过滤收集滤液。二、IlS大豆球蛋白的强阴离子交换层析(一)取IOmlCapto Q填料装填XK16/20柱子(内径1.6cm,填料高度为5cm),装填完毕后用50mM pH8.0的Tris-HCl缓冲液平衡10个柱体积。(二)将步骤一得到的滤液上柱，采用50mM pH8.0的Tris-HCl缓冲液平衡柱子，平衡完毕后采用洗脱缓冲液进行线性梯度洗脱，共洗脱3-4个柱体积，流速为10ml/min，在280nm处测收集管溶液的吸光度，收集各洗脱峰。洗脱缓冲液由A溶液和B溶液组成:A 溶液:50mM ρ本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：谯仕彦，白晶，宋青龙，何涛，
申请(专利权)人：北京龙科方舟生物工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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