从生物样本提取核酸的方法技术

一种从生物样本提取核酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：裂解所述生物样本，以便得到含有核酸的裂解产物；以及从所述裂解产物中分离所述核酸，其中，裂解所述生物样本进一步包括：利用含有溶菌酶、蜗牛酶和溶壁酶的混合物，对所述生物样本进行消化；将消化产物离心，收集沉淀；以及利用裂解液，对所述沉淀进行裂解，以便得到所述含有核酸的裂解产物。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提出了。包括：裂解所述生物样本，以便得到含有核酸的裂解产物；以及从所述裂解产物中分离所述核酸，其中，裂解所述生物样本进一步包括：利用含有溶菌酶、蜗牛酶和溶壁酶的混合物，对所述生物样本进行消化；将消化产物离心，收集沉淀；以及利用裂解液，对所述沉淀进行裂解，以便得到所述含有核酸的裂解产物。利用该方法可以有效地从生物样本中提取核酸。【专利说明】
本专利技术涉及环境微生物学，具体地，本专利技术涉及收集流体中微生物和提取核酸的方法。
技术介绍
空气是人类赖以生存的环境，也是微生物扩散与传播疾病的介质，空气中微生物主要包括细菌、真菌、病毒和放线菌等多种微生物，这是空气污染的主要组成部分，这些微生物的产生与人类活动有密切的关系。空气中微生物主要来源于自然界的水体、土壤、动植物和人类，农业活动、动物饲养、工业生产、污水处理、发酵过程和食品生产厂等，空气中微生物的多少是空气质量的重要标准之一。要了解空气中的微生物就必须将微生物富集，以便观察和分析，这就需要特殊设计的空气微生物采样器。空气微生物采样方法主要分为自然沉降法和机器采样法。自然沉降法是利用空气微生物粒子的重力作用，在一定的时间内，让所处区域的空气中微生物颗粒逐步沉降到带有培养介质的平皿内的一种采样方法。由于此方法是被动取样，采样条件难以控制，微生物粒子的漂移、扩散和沉降会受到风力、电力、磁力、热力、浮力和扩散力等各种力的干扰，因此这种采样方法会造成很大的误差。机器采样法是用采样器来采样，根据采样原理，采样器可分为沉降式、撞击式、离心撞击式、过滤式、静电式、气旋式等。此外，还有温差迫降类和生物类。各种采样器的研制和使用大大推动了空气微生物学的发展，但仍无一种采样器是十全十美的。
技术实现思路
本专利技术旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。为此，本专利技术的一个目的在于提供一种从生物样本中提取核酸的方法。本专利技术提供了一种从生物样本中提取核酸的方法。该提取方法包括:裂解所述生物样本，以便得到含有核酸的裂解产物；以及从所述裂解产物中分离所述核酸，其中，裂解所述生物样本进一步包括:利用含有溶菌酶、蜗牛酶和溶壁酶的混合物，对所述生物样本进行消化；将消化产物离心，收集沉淀；以及利用裂解液，对所述沉淀进行裂解，以便得到所述含有核酸的裂解产物。根据本专利技术实施例的，可以有效地从生物样本中提取核酸，对微生物破壁的效果明显，可以同时提取DNA和RNA，特别是RNA的完整性和纯度都非常高， 同时这种方法也适用于各种环境样品例如空气中微生物的核酸的提取。根据本专利技术实施例的可用于收集各种不同开放环境的空气样本，不仅覆盖面广而且操作简便。另外，本专利技术中提供的提取空气样本核酸的方法非常有效。本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。【专利附图】【附图说明】本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中:图1显示了根据本专利技术实施例的收集流体中微生物的设备结构示意图，其中A、B和C分别显示了根据本专利技术实施例的收集流体中微生物的设备结构示意图；图2显示了根据本专利技术实施例的收集流体中微生物的设备的过滤收集组件的立体分解示意图；图3显示了根据本专利技术实施例的从空气样本中提取RNA后用2100芯片检测的结果图；图4显示了根据本专利技术实施例的空气样本核酸(DNA和RNA)用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测的电泳图；图5显示了根据本专利技术实施例的只采用溶菌酶提取空气样本IRNA提取后用2100芯片检测的结果图；图6显示了根据本专利技术实施例的只采用溶菌酶空气样本I核酸(DNA和RNA)用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测的电泳图；图7显示了根据本专利技术另一实施例的采用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测从胃瘤样本中提取的核酸片段大小，Nanodrop仪器检测DNA浓度及纯度；以及图8显示了根据本专利技术又一实施例的采用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测从牙菌斑样本中提取的核酸片段大小，Nanodrop仪器检测DNA浓度及纯度。【具体实施方式】下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。本专利技术提供了一种从生物样本中提取核酸的方法。根据本专利技术的实施例，该提取核酸的方法包括以下步骤:裂解所述生物样本，以便得到含有核酸的裂解产物；以及从所述裂解产物中分离所述核酸。根据本专利技术的实施例，裂解所述生物样本进一步包括:利用含有溶菌酶、蜗牛酶和溶壁酶的混合物，对所述生物样本进行消化；将消化产物离心，收集沉淀；以及利用裂解液，对所述沉淀进行裂解，以便得到所述含有核酸的裂解产物。根据本专利技术的一个示例，优选地，所述溶菌酶、蜗牛酶和溶壁酶的比例为1:1:lo专利技术人惊奇地发现，通过采用溶菌酶、蜗牛酶和溶壁酶的组合，能够有效地对生物样本进行消化，从而能够以显著高于现有技术的效率，从生物样本尤其是从空气中所收集的微生物中提取核酸。为此，根据本专利技术实施例的，可以有效地从生物样本中提取核酸，尤其是对微生物破壁的效果明显，可以同时提取DNA和RNA，特别是RNA的完整性和纯度都非常高，同时这种方法也适用于各种环境样品例如空气中微生物的核酸的提取。根据本专利技术的实施例，可以用于本专利技术的裂解液的类型并不受特别限制根据本专利技术的一些实施例， 所述裂解液可以含有200mmol/L NaCl, 100mmol/LTris-HCl, pH8.0, 2.0%SDS, 50mmol/L EDTA, 0.5%Triton X-100。根据本专利技术的一个实例，所述裂解液中可以进一步含有蛋白酶K。根据本专利技术的一些实施例，所述裂解是在50-55摄氏度下进行的。由此，可以进一步提高裂解生物样品尤其是从微生物样品的效率，从而进一步提高从生物样品提取核酸的效率。根据本专利技术的实施例，从该裂解产物中分离核酸进一步包括:对所述裂解产物进行离心，收集第一上清液；将含有酚、氯仿和异戊醇的混合物与所述第一上清液按照等体积混合，进行离心后，收集第二上清液，其中，所述含有酚、氯仿和异戊醇的混合物中酚、氯仿和异戊醇的体积比为25:24:1 ;将含有氯仿和异戊醇的混合物与所述第二上清液按照等体积混合，进行离心后，收集第三上清液；以及将含有异丙醇和醋酸钠的混合物与所述第三上清液按照0.7:1的体积比混合，进行离心后，收集核酸沉淀。由此，可以进一步显著地提高所得到核酸样品的纯度。根据本专利技术的实施例，可以利用本专利技术的方法提取核酸的样品来源并不受特别限制。根据本专利技术的一些实施例，所采用的生物样本是从流体收集的微生物样本。根据本专利技术的实施例，可以通过下列方法从流体收集微生物样本:在压力差的作用下，使含有微生物的流体通过滤膜，其中，所述滤膜进样侧的压力高于所述滤膜出样侧的压力，所述滤膜的孔径使得所述微生物被截留在所述滤膜上。由此，可以有效地从流体中收集微生物样本，从而进一步提高从生物样品提取核酸的效率。根据本专利技术的实施例，可以利用本专利技术的方法进行处理的微生物样本类型并不受特别限制，根据本专利技术的一些实例，所述微生物可以为选自细本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从生物样本提取核酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：裂解所述生物样本，以便得到含有核酸的裂解产物；以及从所述裂解产物中分离所述核酸，其中，裂解所述生物样本进一步包括：利用含有溶菌酶、蜗牛酶和溶壁酶的混合物，对所述生物样本进行消化；将消化产物离心，收集沉淀；以及利用裂解液，对所述沉淀进行裂解，以便得到所述含有核酸的裂解产物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郭晶，章文蔚，肖亮，李子华，
申请(专利权)人：深圳华大基因科技有限公司，深圳华大基因研究院，
类型：发明
国别省市：