抗CD20的人单克隆抗体制造技术

公开了分离的结合并抑制人CD20的人单克隆抗体，以及相关的基于抗体的组合物和分子。所述人抗体可以通过转染瘤或在非人转基因动物，例如，转基因小鼠中进行生产，所述转基因动物能够通过进行V-D-J重组和同种型转换产生多同种型的人单克隆抗体。还公开了含有所述人抗体的药物组合物，产生所述人抗体的非人转基因动物和杂交瘤，以及利用所述人抗体的治疗和诊断方法。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】公开了分离的结合并抑制人CD20的人单克隆抗体，以及相关的基于抗体的组合物和分子。所述人抗体可以通过转染瘤或在非人转基因动物，例如，转基因小鼠中进行生产，所述转基因动物能够通过进行V-D-J重组和同种型转换产生多同种型的人单克隆抗体。还公开了含有所述人抗体的药物组合物，产生所述人抗体的非人转基因动物和杂交瘤，以及利用所述人抗体的治疗和诊断方法。【专利说明】抗CD20的人单克隆抗体本申请是申请号为“200380106690.9”，专利技术名称为“抗CD20的人单克隆抗体”的专利技术专利申请的分案申请。相关申请本申请要求递交于2002年10月17日的美国临时申请号60 / 419163，和递交于2003年4月2日的美国临时申请号60 / 460028的优选权，二者标题都是抗⑶20的人单克隆抗体，本文将二者的全部内容并入作为参考。专利技术背景⑶20分子(也称为人B淋巴细胞限制性分化抗原或Bp35)是前B细胞和成熟B淋巴细胞上的疏水性跨膜蛋白，分子量大约35kD (Valentine等1989) J.Biol.Ghem.264(19):11282-11287 ;和 Einf ield 等 1988) EMBO J.7 (3):711-717)。CD20 在超过 90% 的来自外周血或淋巴组织的B细胞的表面被发现并且在早期前B细胞发育过程中表达并且保持到浆细胞分化时。⑶20存在于正常B细胞以及恶性B细胞上。特别地，⑶20在超过90%的B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)上表达(Anderson等(1984)，血液63?): 1424-1433)，但在造血干细胞、原B细胞、正常浆细胞或其它正常组织中未发现(Tedder等(1985)，免疫学杂志135(2):973-979)。CD20蛋白的8 5个氨基酸的羧基末端区位于细胞质中。该区的长度与其它B细胞特异性表达结构如IgM、IgD和IgG重链或组织相容性抗原II类α或β链相反，所述结构分别具有相对短的3、3、28、15和16个氨基酸的胞质内区(Komaromy等(1983)NAR11:6775-6785)。在羧基端的最后61个氨基酸中，21个为酸性残基，只有2个是碱性的，提示该区具有净余的负电荷。GenBank登录号为NP_690605。据认为⑶20可能参与B细胞的激活和分化过程中的早期步骤(Tedder等(1986)Eur.J.1mmunol.16:881-887)并且可以作为一种钙离子通道起作用(Tedder等(1990)J.Cell.Biochem.14D:195)。尽管并不确定关于CD20在促进B细胞的增殖和/或分化中的实际作用，它还是为抗体介导的治疗提供了一种重要的靶以控制或杀死参与癌症或自身免疫病症的B细胞。尤其是，在肿瘤细胞，例如，NHL上的⑶20的表达使其成为一种重要的靶以特异性地靶向针对CD20阳性瘤细胞的治疗剂。但是，尽管到目前为止所获得的结果清楚地证实CD20为一种对于免疫疗法有用的靶，它们还显示目前现有的鼠和嵌合抗体并未构成理想的治疗剂。因此，存在对于抗CD20的治疗性抗体的需求，所述抗体能够有效预防和/或治疗多种涉及表达⑶20细胞的疾病。专利技术概述本专利技术提供改进的抗体疗法以治疗和/或阻止与表达CD20细胞相关的疾病，包括肿瘤相关疾病，和免疫疾病，包括自身免疫疾病。对本专利技术包括的抗体进行了改进，它们是完全地人的并且因而，在患者中可能有较小的免疫原性。如本文所例示的，专利技术的人抗体通过许多机制介导表达CD20的B细胞的死亡。在一个实施方案中，在细胞，如慢性B淋巴细胞白血病(Β-CLL)细胞中本专利技术的人抗体诱导补体依赖的细胞毒性(⑶C)，例如，至少大约20%的⑶C介导的裂解，优选大约30%的⑶C介导的裂解，更加优选大约40 %的CDC介导的裂解。在另一个实施方案中，本专利技术的人抗体诱导表达CD20的细胞的凋亡。在另一个实施方案中，本专利技术的人抗体诱导表达CD20的细胞的同型粘着。而且，本专利技术的人抗体在人效应细胞(例如，单核细胞、单核的细胞、NK细胞和多形核细胞)存在时可以诱导表达CD20的细胞的抗体依赖细胞的细胞毒性(ADCC)。而且，本专利技术的人抗体在巨噬细胞存在时可以诱导表达CD20的细胞的吞噬作用。本专利技术的人单克隆抗体可以通过这些机制中的一种或多种起作用。可以被本专利技术的人抗体杀死的细胞的例子包括，但不限于，表达CD20的B细胞，如致瘤B细胞和参与免疫疾病的B细胞。在一个特定的实施方案中，利用人抗体介导在淋巴瘤，例如非霍奇金淋巴瘤处理中的B淋巴细胞的杀伤。本专利技术的人抗体包括IgGl (例如，IgGl，κ )，IgG3(例如，IgG3，κ )和IgG4(例如，IgG4, κ)抗体。但是，本专利技术还包括其它的抗体同种型，包括IgG2、IgM、IgAl、IgA2、分泌型IgA、IgD和IgE。抗体可以是完整的抗体或其抗原结合片段，包括，例如，Fab、F(ab’)2、Fv、单链Fv片段或双特异性抗体。而且，抗原结合片段包括结合结构域免疫球蛋白融合蛋白，它包含(i)融合到免疫球蛋白铰链区多肽上的一种结合结构域多肽(如重链可变区或轻链可变区)，(ii)融合到铰链区上的一种免疫球蛋白重链CH2恒定区，和(iii)融合到CH2恒定区上的免疫球蛋白重链CH3恒定区。这类结合结构域免疫球蛋白融合蛋白在US2003 /0118592和US2003 / 0133939中得到进一步介绍。本专利技术的特定人抗体包括那些称为11B8、2F2和7D8的抗体，为人重链和人κ轻链核酸及其保守的序列修饰物所编码，所述核酸分别在它们的可变区包含如SEQ ID NOs:1、5或9和SEQ ID NOs:3、7或11中所示的核苷酸序列。在另一个实施方案中，人抗体的特征在于，具有人重链和人κ轻链可变区及其保守的序列修饰物，所述可变区分别包含如SEQ ID NOs:2,6或10和SEQ ID NOs:4、8或12中所示的氨基酸序列。仍然在另一个实施方案中，人抗体的特征在于，具有人重链和人κ轻链可变区，所述可变区分别与SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4 ;分别与SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8 ;分别与SEQ ID NO:10和SEQ ID NO: 12中所示的氨基酸序列至少90%同源，优选至少95%同源，更加优选至少98%，或至少99%同源。本专利技术的其它特定人抗体包括那些包含具有人重链和轻链CDR1区、人重链和轻链CDR2区和人重链和轻链CDR3区的CDR结构域的抗体，其中(a)CDRl、CDR2 和 CDR3 人重链包含选自图 53、55*57(SEQ ID NOs: 13-15、19-21和25-27)中所示的氨基酸序列CDR1、CDR2和CDR3，及其保守的序列修饰物的氨基酸序列，和(b)CDRl、CDR2 和 CDR3 人轻链包含选自图 53、55*57(SEQ ID NOs:16-18、22-24和28-30)中所示的氨基酸序列CDR1、CDR2和CDR3，及其保守的序列修饰物的氨基酸序列。在本专利技术中还包括以大约l-ΙΟηΜ或更低的解离平衡常数(KD)由⑶20中解离出来的抗体。这种抗体还包括那 些与相关的细胞表面抗原不交叉反应并且因而不抑制它们的功能的抗体。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的人单克隆抗体，所述抗体结合人CD20。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：J特伊龄，S鲁尔斯，M格兰尼，JGJ范德温克尔，P帕仁，J比得森，ODMS巴德斯伽德，H黄，
申请(专利权)人：根马布股份公司，
类型：发明
国别省市：