一种具有生产和回收纤维素葡聚糖苷酶双重功能的酵母菌株的构建制造技术

本发明专利技术公开了一种具有生产和回收纤维素葡聚糖苷酶双重功能的酵母菌株的构建，属于酶工程领域。通过把酿酒酵母TDH3启动子序列、酿酒酵母分泌信号肽编码序列、烟曲霉纤维素葡聚糖苷酶编码序列、酿酒酵母凝聚因子C端的400个氨基酸片段编码序列、酿酒酵母TDH3终止子序列按顺序合成，在两端加上限制性内切酶位点，通过酶切构建到pPIC9K质粒中，再将该质粒转化到酵母中得到具有生产和回收纤维素葡聚糖苷酶双重功能的酵母菌株。其生产纤维素葡聚糖苷酶的回收率达到85%，发酵后的酶活达到1.5U/g湿酵母。本发明专利技术实现了纤维素葡聚糖苷酶生产和同步浓缩回收的一步完成，降低了能源消耗，降低了成本，具有较强的实用性。

【技术实现步骤摘要】
一种具有生产和回收纤维素葡聚糖苷酶双重功能的酵母菌株的构建
本专利技术属于酶工程领域，具体涉及一种具有生产和回收纤维素葡聚糖苷酶双重功能的酵母菌株的构建。
技术介绍
纤维素是地球上最丰富的可再生资源，地球上每年因光合作用产生的纤维素达到100亿吨左右，利用纤维素生产生物能源，是缓解能源危机，实现人类可持续发展的关键。纤维素利用的关键是把纤维素降解为可发酵性的糖类-葡萄糖。纤维素的降解需要外切酶、内切酶、葡聚糖苷酶的共同作用。其中葡聚糖苷酶降解葡萄糖的二聚体生产可发酵性的葡萄糖，是纤维素降解的关键步骤。用纤维素酶降解纤维素具有绿色、条件温和、转化率高的特点，但是纤维素较高的生产成本成为纤维素酶降解纤维素的瓶颈。液体发酵具有发酵体积大，易实现自动化控制等特点，被广泛用来生产纤维素葡聚糖苷酶等。但是液体发酵生产的酶类产品浓度。生产的纤维素葡聚糖苷酶等都游离在发酵醪液中，为得到高浓度的纤维素葡聚糖苷酶或葡聚糖苷酶的固体粉末，需要对发酵醪液进行浓缩。为纯化浓缩纤维素葡聚糖苷酶往往需要通过真空蒸发或喷雾干燥等工艺来浓缩纤。在纤维素蒸发浓缩或喷雾干燥的过程中，纤维素葡聚糖苷酶的活性丧本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于构建具有生产和回收纤维素葡聚糖苷酶双重功能的酵母菌株的DNA片段，其特征在于：包括按顺序排列的酿酒酵母TDH3启动子序列、酿酒酵母分泌信号肽编码序列、烟曲霉纤维素葡聚糖苷酶编码序列、酿酒酵母凝聚因子C端的400个氨基酸片段编码序列、酿酒酵母TDH3终止子序列。

【技术特征摘要】
1.用于构建具有生产和回收纤维素葡聚糖苷酶双重功能的酵母菌株的DNA片段，其特征在于:包括按顺序排列的酿酒酵母TDH3启动子序列、酿酒酵母分泌信号肽编码序列、烟曲霉纤维素葡聚糖苷酶编码序列、酿酒酵母凝聚因子C端的400个氨基酸片段编码序列、酿酒酵母TDH3终止子序列。2.根据权利要求1所述的DNA片段，其特征在于:所述的序列分别如SEQID N0.1~5所示。3.根据权利要求1所述的DNA片段，其特征在于:所述的DNA片段的序列如SEQIDN0.6所示。4.用于构建具有生产和回收纤维素葡聚糖苷酶双重功能的酵母菌株的质粒，其特征在于:为包含权利要求1-3任一项所述的DNA片段的真核表达质粒。5.根据权利要求4所述的质粒,其特征在于:所述的真核表达质粒为pPIC9...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛栋升，汪江波，蔡凤娇，曹敬华，陈茂彬，方尚玲，镇达，
申请(专利权)人：湖北工业大学，
类型：发明
国别省市：