高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒，是一种可方便、灵敏的检测血清、血浆、细胞裂解液等样品的硫氧还蛋白活性的试剂盒。该试剂盒包括试剂盒外包装(1)、以及从上到下依次放置于内部的试剂盒说明书(2)、冷藏层的盖子(3)、冷藏层内部(4)、冷冻层盖子(5)、冷冻层内部(6)、蓄冷剂盒子(7)；冷藏层内试剂为检测缓冲液、终止缓冲液和DTNB粉末，冷冻层内试剂为酶、底物、NADPH粉末和标准品。试剂盒解决了无硫氧还蛋白活性测定试剂盒的问题。样本需求量少，仅需20μl血清、血浆，特别适合血清、血浆检测，能非常专一地检测人血清或血浆硫氧还蛋白活性；其使用不需要昂贵的设备，可广泛应用于多种样品的硫氧还蛋白活性检测。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒
本技术属于高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒，能广泛地用于哺乳动物样品中硫氧还蛋白以及纯化硫氧还蛋白活性的测定。
技术介绍
硫氧还蛋白存在于所有活细胞中，与细胞生长与存活密切相关。硫氧还蛋白也会分泌到细胞外，存在血液及细胞外液中。该蛋白活性变化与许多疾病的发生发展有关。目前，硫氧还蛋白ELISA试剂盒，是以免疫学反应为基础，依靠抗原、抗体的特异性反应，检测硫氧还蛋白的蛋白水平。然而，硫氧还蛋白极易被体内的代谢物、中间产物修饰改变活性，组织和细胞中硫氧还蛋白的蛋白水平，不能确切地反映硫氧还蛋白的功能状态。此外，ELISA试剂盒有独特的组织特异性，实验中可能用到不同来源的样本，需要辨别哪种ELISA试剂盒能测手中的样本。至今，实验室研究中，硫氧还蛋白的测活方法主要有两种:膜岛素测活法(Luthman,.Biochemistry21:6628-6633 ； 1982.)、终点法(Amer, MethodsEnzymo1300:226-239.；1999.)及改良后的终点法(Wu, Y.Atherosclerosis212:351-355 ；2010.)。胰岛素测活法，适合酶动力学研究，不适合大批量样本的测定。终点法及改良后的终点法，各实验室所用的条件及标准不尽相同，步骤较复杂，所测得的结果难以比较。
技术实现思路
为了弥补目前缺乏高通量硫氧还蛋白测活的标准化方法，本技术提供一种高效且使用简便的试剂盒，该试剂盒检测灵敏度高，足以分辨出20微升人血清/血浆中硫氧还蛋白给出的信号。此外，该试剂盒还能检测细胞、组织裂解液及纯化硫氧还蛋白活性。无独特的组织特异性。本技术所提供一种高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒，包括试剂盒外包装(I)、以及从上到下依次放置于内部的试剂盒说明书(2)、冷藏层的盖子(3)、冷藏层内部(4)、冷冻层盖子(5)、冷冻层内部(6)、蓄冷剂盒子(7);冷藏层内试剂为检测缓冲液、终止缓冲液和DTNB粉末，冷冻层内试剂为酶、底物、NADPH粉末和标准品；每种试剂都装在合适大小的塑料试剂瓶或EP管中，试剂瓶或EP管上有说明标签。冷藏层的盖子(3)、冷藏层内部(4)、冷冻层盖子(5)、冷冻层内部(6)、蓄冷剂盒子(7)，都是IOcmX IOcmX 3cm的立方体硬纸或塑料。冷藏层和冷冻层各配有一个盖子，使用者在收货以后，可以将不同试剂独立储存，不易丢失，便于寻找。冷冻层的下方是封装有蓄冷剂的盒子，可以保证试剂盒在运输过程中活性不降低。本技术提供的试剂盒解决了无硫氧还蛋白活性测定试剂盒的问题。样本需求量少，仅需20μ I血清、血浆，特别适合血清、血浆检测。能非常专一地检测人血清或血浆硫氧还蛋白活性。标准曲线的线性范围在O~80ng。使用本技术时，操作者按照试剂盒说明书配制好试剂， 并按照给定的操作步骤进行使用，就可以检测多种样品的硫氧还蛋白活性。本技术简化了实验操作中的很多繁杂步骤，能节约实验者的时间，较好的满足了实验操作的简单化和提高实验结果的准确性。【附图说明】图1:高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒结构图；附图中标号表示:1、试剂盒外包装；2、试剂盒说明书；3、冷藏层的盖子；4、冷藏层内部；5、冷冻层盖子；6、冷冻层内部；7、蓄冷剂盒子。图2:血清Trx活性与tHCy水平的关系图；附图中标号表示:1、非冠心病且同型半胱氨酸正常组(样本数=77) ;2、非冠心病且高同型半胱氨酸组(样本数=19) ;3、冠心病且同型半胱氨酸正常组(样本数=53) ;4、冠心病且高同型半胱氨酸组(样本数=67)。图3:反应体系中Trx含量-活性的标准曲线。【具体实施方式】结合附图对本技术的结构与检测方法，进一步的详细说明如下:检测试剂盒的结构:高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒包括试剂盒外包装1、以及从上到下依次放置于的试剂盒说明书2、冷藏层的盖子3、冷藏层内部4、冷冻层盖子5、冷冻层内部6、蓄冷剂盒子7;冷藏层内试剂为检测缓冲液、终止缓冲液和DTNB粉末，冷冻层内试剂为酶、底物、NADPH粉末和标准品。上述的高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒的冷藏层的盖子3、冷藏层内部4、冷冻层盖子5、冷冻层内部6、蓄冷剂盒子7，都是IOcmX IOcmX 3cm的立方体。试剂盒中的这些试剂已事先按照一定的浓度和比例配制好，具体成分如下:1、检测缓冲液:成分:磷酸钾缓冲液。体积:2ml。2、终止缓冲液:成分:盐酸胍溶液。体积:15ml。3、酶溶液:酶溶液标准化:用标准化方法将酶溶液调整至给定的活性。体积:100μ I。4、底物液:成分:足够浓度的底物溶液。体积:1.7ml。5、标准液:成分:5 μ g/ml人硫氧还蛋白，0.1%牛血清白蛋白(或人血清白蛋白)。体积:200μ I。6 > DTNB:称取10.7mg DTNB。7, NADPH:称取4.5mg NADPH。检测试剂盒的使用方法:一、试剂的配制1、配制测活液:按照下表配制测活液。表1测活液配制方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒，其特征在于包括试剂盒外包装(1)、以及从上到下依次放置于内部的试剂盒说明书(2)、冷藏层的盖子(3)、冷藏层内部(4)、冷冻层盖子(5)、冷冻层内部(6)、蓄冷剂盒子(7)；冷藏层内试剂为检测缓冲液、终止缓冲液和DTNB粉末，冷冻层内试剂为酶、底物、NADPH粉末和标准品，每种试剂都装在合适大小的塑料试剂瓶或EP管中，试剂瓶或EP管上有说明标签。

【技术特征摘要】
1.一种高通量硫氧还蛋白活性检测试剂盒，其特征在于包括试剂盒外包装(I)、以及从上到下依次放置于内部的试剂盒说明书(2)、冷藏层的盖子(3)、冷藏层内部(4)、冷冻层盖子(5)、冷冻层内部(6)、蓄冷剂盒子(7);冷藏层内试剂为检测缓冲液、终止缓冲液和DTNB粉末，冷冻层内试剂为酶、底物、NADPH粉...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴云飞，梁巍，钟良玮，
申请(专利权)人：北京中科研源科技发展有限公司，
类型：实用新型
国别省市：