含有作为活性成分的硫氧还蛋白－１的乳腺癌诊断标记物及使用所述硫氧还蛋白－１的乳腺癌诊断试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及含有作为活性成分的硫氧还蛋白１的乳腺癌诊断标记物，并涉及使用所述硫氧还蛋白１的乳腺癌诊断试剂盒。根据本发明专利技术的硫氧还蛋白１在人类乳腺组织中过表达，使得能够早期诊断乳腺癌或预测乳腺癌的预后，因此，根据本发明专利技术的硫氧还蛋白１作为乳腺癌诊断标记物具有重要用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及含有作为活性成分的硫氧还蛋白-1的乳腺癌诊断标记物，以及使用所述硫氧还蛋白-1的乳腺癌诊断试剂盒。
技术介绍
目前提到的乳腺癌的各种病因包括女性荷尔蒙、癌症史、家族史、没有生育、饮食习惯等，但是迄今为止没有证明乳腺癌与这些病因之间的明确关系。近年来，报道韩国的乳腺癌病例迅速增加。一份韩国的统计学调查报告显示1998年乳腺癌病例超过宫颈癌病例， 并且2001年乳腺癌病例占女性癌症病例的16. 1%，超过胃癌排名第一。此外，2001年和 2002年之间乳腺癌的发病率为11. 1%，大于其他癌症的发病率。现在，认为乳腺癌的高发病率与多种因素有关。所述多种因素包括低出生率、短期母乳喂养、初潮早、绝经晚、饮食习惯西化以及生活环境的污染。另外，当女性发生生理上的活跃改变时，受迅速增加的女性荷尔蒙刺激的女性的腺体组织敏感性增加，这些女性个体会面临更大的患乳腺癌的可能性。考虑到由于生活方式西方化的趋势，预测韩国乳腺癌的发病率和乳腺癌的死亡率在将来相当长的时间内会增加。如同其它癌细胞那样，随着癌细胞的生长，乳腺癌细胞通常渗透到邻近的组织或转移到淋巴结中。在大多数乳腺癌的病例中，患者具有非常少的可检测症状，她们也不自我检查乳房。因此，有效地诊断早期乳腺癌对于降低乳腺癌的死亡率是非常重要的。对于乳腺癌的诊断而言，联合采用了各种方法。到目前为止，乳房自我检查已占乳腺癌病例的70%。然而，通过乳房自我检查区别恶性乳腺肿瘤和良性肿瘤是不可能的。已采用了一些乳腺癌筛查检测，包括X-射线乳房摄影、超声波、细针抽吸细胞学检查以及磁共振成像。最终，采用活体组织检查来诊断乳腺癌。用于乳腺癌的乳房摄影筛查使用χ-射线来检查乳房。乳房摄影有效确定乳房肿瘤是良性还是恶性，并且可检测隐藏的肿瘤。这种方法是在自我检查乳房检测到肿块之前可诊断早期乳腺癌的最有效的技术之一。然而，乳房摄影是有缺陷的，因为，对乳腺高度发达或者具有大量纤维组织的小而致密的乳房(如年轻女性的乳房)的诊断精确度降低。此外，存在这样的争议由于辐射，更加频繁的乳房摄影使得乳腺癌的风险显著增加。采用超声波检查法作为乳房摄影的代替技术。超声波检查法可有效地区别囊肿(cystis)和肿块(lumps)，但是无法有效地告知恶性肿瘤和良性肿瘤。为了补充这些乳房筛查方法，已经尝试使用血液肿瘤标记物水平来诊断乳腺癌。 尽管研究了作为诊断因素或预后因素的血液肿瘤标记物水平的值，但传统肿瘤标记物的使用受到限制，也没有官方推荐的乳腺癌标记物。硫氧还蛋白(Trx)是12kDa的氧化还原酶，所述12kDa的氧化还原酶在依赖NADPH 的反应中通过硫氧还蛋白还原酶而保持在还原状态。有两种哺乳动物硫氧还蛋白硫氧还蛋白I(Trxl)和硫氧还蛋白2(Trx2)。硫氧还蛋白作为过氧化物酶的电子供体起作用，因此，例如，可除去有毒的过氧化氢。硫氧还蛋白也为核糖核苷酸还原酶提供电子。在细菌中硫氧还蛋白在将转录元件结合至DNA方面发挥作用，而硫氧还蛋白影响真核生物中的 NF-kB(核转录因子kB)的活性。因此，硫氧还蛋白与细胞死亡和肿瘤细胞相关，并且在调节肿瘤细胞的生长方面发挥重要作用。作为一般的二硫化物氧化还原酶的硫氧还蛋白通过氧化还原机理促进其它蛋白还原，从而恢复蛋白质的正常功能，所述氧化还原机理基于二硫化物与两个半胱氨酸巯基基团之间的可逆还原反应。在哺乳动物的细胞中，硫氧还蛋白 1和硫氧还蛋白2也参与调节氮氧化物的水平，由此参与细胞死亡。因此，与许多疾病的发生有关的酶具有潜在的重要性，所述疾病包括炎症性疾病、心力衰竭、癌症等。抗硫氧还蛋白抗体的免疫组化分析揭示了硫氧还蛋白在诸如肝脏、结肠、胰腺和宫颈等各种组织的癌细胞中表达，这表明硫氧还蛋白涉及肿瘤形成。需要一种乳腺癌诊断标记物，使得早期乳腺癌得以准确诊断并且做出乳腺癌的预后。在使用硫氧还蛋白1作为乳腺癌诊断标记物方面已进行的研究非常少。
技术实现思路
技术问题本专利技术的专利技术人对乳腺癌的诊断和预后进行了深入和全面的研究，结果发现硫氧还蛋白1在正常乳腺组织中以低水平表达，而在乳腺癌组织中以高水平表达，从而得到了本专利技术。技术方案本专利技术提供含有作为活性成分的硫氧还蛋白1的乳腺癌诊断标记物，和使用所述硫氧还蛋白1的乳腺癌诊断试剂盒。附图说明图1是表示通过96孔HMRT qPCR分析法检测的选自不同种族个体的48个不同的人体正常组织中硫氧还蛋白1转录物的表达谱的图。图2是表示通过CSRT 96-1分析法检测的在八种实体肿瘤(乳腺、结肠、肾脏、肝脏、肺、卵巢、前列腺和甲状腺)中硫氧还蛋白1和硫氧还蛋白2的mRNA水平的图。图3是表示在乳腺癌中硫氧还蛋白1和硫氧还蛋白2的mRNA水平㈧的图和由此获得的诱导倍数anduction fold)的水平(B)的图。图4是表示人体乳腺癌中硫氧还蛋白1的mRNA表达的诱导倍数的散点图(A)，表示硫氧还蛋白1的mRNA表达和癌症发展之间的相关性的箱型图(B)，以及表示在细分的癌症(I期、IIA期、IIB期、IIIA期、IIIB期、IIIC期和IV期)中硫氧还蛋白的mRNA表达的诱导倍数的图(C)。图5表示通过蛋白质印迹分析法检测的人体乳腺癌组织中硫氧还蛋白1的表达水平。图6表示通过蛋白质印迹分析法检测的来自不同个体的四个正常组织和四个癌组织中硫氧还蛋白1的表达水平。图7表示通过蛋白质印迹分析法检测的在乳腺组织的配对组中硫氧还蛋白1的表达水平(将来自同一个体的正常组织和初期癌组织配对；将来自同一个体的初期癌组织和转移性癌组织配对)以及在其它癌组织(肺和结肠)的配对组中硫氧还蛋白1的表达水平。 具体实施例方式本专利技术提供含有作为活性成分的硫氧还蛋白1的乳腺癌诊断标记物。本专利技术还提供含有抗硫氧还蛋白1的抗体的乳腺癌诊断试剂盒。此外，本专利技术提供使用硫氧还蛋白1的抗体检测乳腺组织中的硫氧还蛋白1的方法。下文将会给出本专利技术的详细描述。在本专利技术中，检测了人体正常组织和癌组织中的硫氧还蛋白1的表达水平。通过 qRT-PCR和蛋白质印迹法检测发现在48个不同的正常人体组织的正常乳腺组织中，硫氧还蛋白1的表达水平最低，并且硫氧还蛋白1在乳腺癌组织中的表达水平比在其它癌组织中的表达水平高。此外，随着癌症进一步发展，硫氧还蛋白1的mRNA表达的诱导倍数越高。因此，硫氧还蛋白1的mRNA表达的诱导倍数在乳腺癌II期至IV期变高，特别是在乳腺癌IV 期，即，转移性乳腺癌。另外，因为硫氧还蛋白1的mRNA表达的诱导倍数随着癌症的发展而增加，硫氧还蛋白1的mRNA表达的诱导倍数与癌症的恶性程度密切相关。因此，硫氧还蛋白1的mRNA表达的诱导倍数与细分的癌症阶段有关。如上所述，发现硫氧还蛋白1在人体乳腺癌组织中过表达，硫氧还蛋白1使乳腺癌得以诊断和预后，因此它作为乳腺癌的诊断标记物是有用的。根据本专利技术的含有抗硫氧还蛋白1的抗体的乳腺癌诊断试剂盒可使用本专利技术所述的乳腺癌诊断标记物来容易地制备。本专利技术的乳腺癌诊断试剂盒可包含特异性结合硫氧还蛋白1的抗体、结合了可与底物反应引起颜色变化的标签物的二级抗体、与所述标签物反应显示颜色的底物溶液、洗脱缓冲液和反应终止缓冲液。结合了二级抗体的标签物优选地是当所述标签物与其底物反应时可引起颜色变化的着色剂。其中的代表性的着色剂是本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种乳腺癌诊断标记物，所述诊断标记物包括作为活性成分的硫氧还蛋白１。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：金一韩，
申请(专利权)人：培材大学校产学协力团，
类型：发明
国别省市：KR