用于长期造血种群恢复的方法和组合物技术

一种用于长期造血种群恢复的方法和组合物。公开了分离脐带血细胞的CD133+/CD45-/GlyA-亚群的方法。在一个实施方案中，该方法包括提供脐带血细胞的初始群；使该初始细胞群与对CD133特异的第一抗体、对CD45特异的第二抗体以及对血型糖蛋白A(GlyA)特异的第三抗体，在足以允许每一抗体与初始细胞群每一细胞上的其靶标(如果存在的话)结合的条件下接触；以及分离CD133+、CD45-且GlyA-的细胞亚群。还提供了从脐带血分离的CD133+/GlyA-/CD45-干细胞分离群，在受试者中种群恢复细胞类型的方法，骨髓移植的方法，在CD133+/GlyA-/CD45-干细胞中诱导造血能力的方法，以及包括CD133+/GlyA-/CD45-干细胞的细胞培养系统。

Methods and compositions for long-term hematopoiesis population recovery

A method and composition for the recovery of long-term hematopoietic populations. Methods for separating CD133+/CD45-/GlyA- subsets of cord blood cells are disclosed. In one embodiment, the method includes providing umbilical cord blood cell initial group; the initial population of cells with CD133 specific antibody, the first second antibodies specific to CD45 and glycophorin A (GlyA) third antibody, enough to allow each antibody and the initial cells of each cell on the target (if any) contact with the conditions; and the separation of CD133+, CD45- and GlyA- cell subsets. The group also provides cell separation isolated from umbilical cord blood CD133+/GlyA-/CD45- stem, with subjects of population recovery method of cell types, bone marrow transplant, in the method of CD133+/GlyA-/CD45- induced stem cells in hematopoietic ability, including stem cell culture system of CD133+/GlyA-/CD45- cells.

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】一种用于长期造血种群恢复的方法和组合物。公开了分离脐带血细胞的CD133+/CD45-/GlyA-亚群的方法。在一个实施方案中，该方法包括提供脐带血细胞的初始群；使该初始细胞群与对CD133特异的第一抗体、对CD45特异的第二抗体以及对血型糖蛋白A(GlyA)特异的第三抗体，在足以允许每一抗体与初始细胞群每一细胞上的其靶标(如果存在的话)结合的条件下接触；以及分离CD133+、CD45-且GlyA-的细胞亚群。还提供了从脐带血分离的CD133+/GlyA-/CD45-干细胞分离群，在受试者中种群恢复细胞类型的方法，骨髓移植的方法，在CD133+/GlyA-/CD45-干细胞中诱导造血能力的方法，以及包括CD133+/GlyA-/CD45-干细胞的细胞培养系统。【专利说明】用于长期造血种群恢复的方法和组合物本申请是国际申请日为2009年11月16日、国际申请号为PCT/US2009/064614、进入国家阶段的申请号为200980154497.X、专利技术名称为“用于长期造血种群恢复的方法和组合物”的PCT申请的分案申请。与相关申请的交叉引用 现在公开的主题要求2008年11月14日提交的美国临时专利申请系列号61/199，356的优先权权益；其公开内容在此通过引用全文并入本文。资助声明 该成果得到了美利坚合众国国立卫生研究所资助ROl CA106281-01和ROl DK074720的支持；因此，美国政府对本文公开的主题拥有某些权利。专利
当前公开的主题在一些实施方案中涉及用于在受试者中种群恢复细胞类型的方法。在一些实施方案中，当前公开的主题涉及给有需要的受试者以一定的量及通过一定的途径施与包含多个分离的脐带血衍生的⑶133+/GlyA_/⑶45_干细胞的组合物，所述量和途径足以允许用于在受试者中种群恢复细胞类型的脐带血衍生的至少一部分移入受试者的靶部位并在其中分化，由此在受试者中种 群恢复细胞类型。背景 血液移植术的发展增加了对分离自组织可相容供体的造血干细胞(HSC)的需求。公知合适的骨髓(BM)供体通常是短缺的。不幸的是，脐带血(CB)含有的HSC绝对数量比BM低得多，使得CB在成人患者的治疗用途中不那么优选。此外，当前极难以可靠地扩增分离自BM和CB-HSC的长期种群恢复(LT)的HSC，使得加重了对新的LT-HSC供应的需求。因此，假设胚胎干细胞衍生的HSC可能比分离自诸如BM和CB的常规来源的HSC具有许多优势。然而，这已被证明难以应用，因为难以应用和优化使胚胎干细胞(ESC)沿着造血谱系分化的策略。此外，人类ESC是各种限制的对象，这限制了它们的可利用性和有用性，即使对于实验研究也如此。专利技术概述 本概述列出了当前公开的主题的数个实施方案，以及在许多情况下列出了这些实施方案的变形和互换。这一概述仅是许多且不同的实施方案的示例。给定实施方案的一个或更多个代表性特征的提及同样是示例性的。此类实施方案可在有或无该提及的特征的情况下一般地存在；同样地，这些特征可应用于当前公开的主题的其他实施方案，而无论在这一概述中列出与否。为避免过多的重复，这一概述没有列出或提示此类特征的所有可能组合。当前公开的主题提供了分离脐带血细胞的⑶133+/⑶45_/GlyA_亚群的方法。在一些实施方案中，该方法包括(a)提供脐带血细胞的初始群；(b)使该初始细胞群与对CD133特异的第一抗体、对CD45特异的第二抗体以及对血型糖蛋白A(GlyA)特异的第三抗体，在足以允许每一抗体与初始细胞群每一细胞上的其靶标(如果存在的话)结合的条件下接触；以及(c)分离⑶133+、⑶45_且617么_的细胞亚群。在一些实施方案中，该接触步骤包括使脐带血细胞与特异性结合⑶133、GlyA和⑶45的多个抗体同时地或反复地接触。在一些实施方案中，该方法还包括从CD133+/GlyA7CD45_细胞中分离ALDHs细胞，从CD133+/GlyA_/⑶45_细胞中分离ALDHffi细胞，或分别从⑶133+/GlyA_/⑶45_细胞中分离ALDHs细胞和ALDH低细胞。当前公开的主题还提供了包含基本上纯化的分离自脐带血(CB)的⑶133+/GlyA_/⑶45_细胞的分离的干细胞群。在一些实施方案中，该⑶133+/GlyA_/⑶45_细胞是八0)!^细胞。在一些实施方案中，该CD133+/GlyA_/CD45_细胞是ALDHffi细胞。当前公开的主题还提供了包含当前公开的分离的干细胞群的组合物。在一些实施方案中，该组合物还包含一种或更多种可药用载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，该可药用载体和/或赋形剂对于在人类中的应用是可药用的。当前公开的主题还提供了用于在受试者中种群恢复细胞类型的方法。在一些实施方案中，该方法包括以一定的量和通过一定的途径给受试者施与在可药用载体中包含多个分离的⑶133+/GlyA_/⑶45_干细胞的组合物，所述量和途径足以允许⑶133+/GlyA_/CD45—干细胞的至少一部分移入靶部位并在其中分化，由此在受试者中种群恢复细胞类型。在一些实施方案中，该细胞类型是造血细胞。在一些实施方案中，该靶部位包括骨髓。在一些实施方案中，受试者是哺乳动物。在一些实施方案中，哺乳动物是人。在一些实施方案中，该多个分离的CD1337GlyA7CD45_干细胞包含分离自脐带血的CD1337GlyA7CD45_干细胞。在一些实施方案中，该可药用载体对于对于在人类中的应用是可药用的。当前公开的主题还提供了用于骨髓移植的方法。在一些实施方案中，该方法包括给至少部分地缺乏骨髓的受试者施与包含有效量的分离自脐带血的⑶133+/GlyA_/⑶45_干细胞的药物制备物，其中该有效量包含分离的⑶133+/GlyA_/⑶45_干细胞足以移入受试者骨髓的量。在一些实施方案中，该至少部分地缺乏骨髓的受试者经历了至少部分地减少该受试者骨髓的预治疗。在一些实施方案中，该预治疗包括脊髓减少或脊髓抑制治疗。在一些实施方案中，该预治疗包括给该受试者施与免疫治疗、化疗、放射治疗或其组合。在一些实施方案中，放射治疗包括全身放射。在一些实施方案中，该施与包括静脉内施与该药物制备物。在一些实施方案中，该⑶133+/GlyA7⑶45-干细胞是⑶133+/GlyA7⑶457ALDH高干细胞。在一些实施方案中，该方法还包括在施与步骤前在0P9细胞饲养层的存在下共培养CD133+/GlyA7CD45-干细胞至少 5 天。当前公开的主题还提供了用于诱导⑶133+/GlyA_/⑶45_干细胞的造血能力的方法。在一些实施方案中，该方法包括(a)提供⑶133+/GlyA_/⑶45_干细胞；和(b)在0P9饲养层的存在下共培养CD133+/GlyA_/CD45_干细胞足以诱导该CD133+/GlyA_/CD45_干细胞的造血能力的时间。在一些实施方案中，该⑶133+/GlyA_/⑶45_干细胞是骨髓衍生的⑶133+/GlyA7⑶45—干细胞、脐带血衍生的⑶133+/GlyA7⑶45—干细胞、或其组合。在一些实施方案中，该⑶133+/GlyA7⑶45-干细胞是⑶133+/GlyA7⑶457ALDH低干细胞。在一些实施方案中，该⑶133+/GlyA7⑶45-干细胞是⑶1本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于诱导CD133+/GlyA?/CD45?干细胞的造血能力的方法，所述方法包括：(a)?提供CD133+/GlyA?/CD45?干细胞；和(b)?在OP9饲养层的存在下共培养CD133+/GlyA?/CD45?干细胞足以诱导所述CD133+/GlyA?/CD45?干细胞的造血能力的时间。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：J拉塔查克，EK祖巴叙尔马，M拉塔查克，
申请(专利权)人：路易斯维尔大学研究基金会有限公司，
类型：发明
国别省市：