本发明专利技术公开了一种抑癌基因遗传体质评估的基因检测方法及中医体质调理方案，其特征在于，通过同时检测分析个体的TP53BP1基因、TP53基因SNPs位点基因携带型为所有的受检者提供抑癌基因的遗传体质评估、相关疾病风险规避的中医体质调理方案。本发明专利技术的优点是可在基因损伤发生前就采取中医体质调理干预措施，从而避免基因损伤，从而降低与基因损伤相关的疾病（如肿瘤）的发病率和死亡率；从分子机理上进行肿瘤发病机理的分析，可用于肿瘤分子流行病学调查和肿瘤防治措施的制定。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种抑癌基因遗传体质评估的基因检测方法及中医体质调理方案，其特征在于，通过同时检测分析个体的TP53BP1基因、TP53基因SNPs位点基因携带型为所有的受检者提供抑癌基因的遗传体质评估、相关疾病风险规避的中医体质调理方案。本专利技术的优点是可在基因损伤发生前就采取中医体质调理干预措施，从而避免基因损伤，从而降低与基因损伤相关的疾病（如肿瘤）的发病率和死亡率；从分子机理上进行肿瘤发病机理的分析，可用于肿瘤分子流行病学调查和肿瘤防治措施的制定。【专利说明】一种抑癌能力遗传体质评估的基因检测方法及中医体质调理方案
本专利技术涉及一种抑癌能力遗传体质评估的基因检测方法及中医体质调理方案，用于评估个体对癌症易感性的强弱，针对性地提示受检者面对各种可能导致细胞癌变的外界因素时应采取的恰当中医体质调理方案，改善机体健康，属于分子生物学
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技术介绍
肿瘤已成为二^^一世纪的人类第一杀手,在2005年全世界5800万死亡总数中，癌症死亡者为760万，占总数的13%，并且2005年癌症死亡者的70%以上发生在低收入和中等收入国家，预计全世界癌症死亡者将继续增加，据估计，2015年将有900万人死于癌症，并且2030年将有1140万人死亡。在我国，癌症发病及死亡率一直呈上升趋势，在城镇居民中，癌症已占死因的首位，为此，我国制定了《中国癌症预防与控制规划纲要(2004-2010)》，确定肺癌、肝癌、胃癌、食管癌、结直肠癌、乳腺癌、宫颈癌及鼻咽癌为我国癌症防治重点，强调癌症的早期发现、早期诊断及早期治疗。在人们生活的环境中存着不少物理的、化学的和生物的致癌因子，它们在一定条件下可以诱发肿瘤，其中主要是致癌的化学毒物，但是尽管人们都接触各种致癌因子，却远非人人都发生肿瘤，这表明还存在个体易感性的差异，而易感性在很大程度是遗传物质的结构或功能变化才会使正常细胞转变为癌细胞。目前，我国癌症每年要花掉数百亿元，每死亡5人中就有一个是死于癌症，而在64岁以下的人口中，每死亡4人即有I人死于癌症。不仅影响劳动力人口健康，也是医疗费用上涨的重要因素。目前到医院来看病的病人如果被确诊为肺癌，有80%已经是晚期了，而且有些已经开始转移，所以如何能使癌症的一级病因学预防、重点地区重点人群的二级预防和临床的三级预防结合在一起更显得重要。环境因素是机体患上以下肿瘤`的主要病因，遗传因素做为内因起着重要的作用。首先，现代医学已证明，任何疾病的发生均是遗传因素与外界环境相互作用的结果。遗传因素对疾病发生的作用有强有弱，强到单个基因位点变化就可以导致疾病的发生，如镰刀状贫血就是由于a-球状蛋白6号密码子GAG — GTG的基因突变所引起。遗传因素对疾病的发生可以是由单一一个基因引起，也可以是由多个基因共同作同而产生，如糖尿病已证实是由于多个基因的作用而产生。其次，疾病的遗传易感性是指在相同的环境因素作用下，某些个体、人群患有某种疾病都高的风险(或为可能性)。一个明显的例子是，普通妇女患上乳腺癌的风险约为5~10%，但如果妇女的BRCA1/2基因突变，就会使该妇女患上乳腺癌的风险提闻10~85%不等。因此，抑癌基因的遗传易感风险是指在相同的环境因素情况下，人群由于其本身的遗传体质，发生癌症的可能性，目前的基础研究已能从理论上证明基因分型检测可以用于判断抑癌基因易感性的强弱，而且检测方法简便、检测成本在可接受程度中、检测结果可信。因此，基因分型检测用于评估抑癌基因的可行性是明确的。中医学认为，人体内部以及人体与自然界之间是一个阴阳平衡的整体，一旦这种平衡因为各种原因被打破，疾病就随之产生。恶性肿瘤往往先是自身正气不足，体质虚弱，再加上邪毒侵袭、环境恶化、长期饮食不节、劳逸、情志失调等外因的影响而发生。不同人群在相同环境下有人发生肿瘤有人不发生，原因就是不同个体体质差异对环境的反应性不同。体质的物质基础是人体的脏腑气血津液水平，体质的差异也是由于脏腑气血津液的组成和功能的不同所致，人体正气的盛衰也是由上述基本物质所决定，因此，某种程度上个体体质状态是个人正气的外在表现，当人体体质出现偏颇时，意味着人体正气发生虚弱，而正气虚弱是发病的一个重要因素，现代研究也表明，各种外界因素导致人体癌基因和抑癌基因的失衡是肿瘤发生的一个重要原因，不同体质癌基因的表达也不相同。因此，体质因素与肿瘤发病密切相关。中医将体质类型分为平和质，气虚质、阳虚质、阴虚质、痰湿质、湿热质、淤血质、气郁质和特禀质九型。其中，除平和质之外，其余八种体质在特定环境下都会对疾病的发生和转归产生影响。从体质的形成过程来看，首先个体体质继承了自身家族遗传特性，在生长发育过程是一个不断演变的规律性过程，因此其具有稳定性的特点，同时个体体质又受气候、饮食、情志和各种社会环境的影响，会做出相应适应性改变。与肿瘤发生发展密切相关的中医体质型有淤血质、阳虚质、痰湿质等。临床研究发现肿瘤患者通过长期中药、饮食等调整偏颇体质也可以向平和体质转变，运用中医药调整偏颇体质是预防疾病发生和恶化的一个重要手段。不同的人在相同的环境下抑癌基因易感性存在个体差异，需要根据中医体质分型采取不同的风险预防和调理方案。因此，综合利用现代科学研究成果，开发一项基于分子遗传基础的抑癌基因易感性的基因检测方式具有明确的市场需求，检测意义明确，适用范围广，而且具有可行性，可用于制定群体的肿瘤预防措施和高危行业的劳动保障措施具有很强的社会意义和市场前景。目前对涉及抑癌基因易感性通路的一些基因已经进行了大量研究。其作用机制、生化功能、通路情况、调控、转录等等方面都有明确可靠的研究结果；已经有可靠的检测方法、仪器设备和检测试剂等。因此利用现有科学、技术研究成果来开发这样一个产品，时机是成熟的。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种抑癌基因遗传体质评估的方法，可以让受检者了解自身抑癌能力的强弱，加强对可能发生细胞癌变的环境的辨别能力，采取适当中医体质调理方案防止或降低细胞癌变的发生，对癌症的防治有着十分重大的意义。为实现以上目的，本专利技术的技术方案是提供一种抑癌能力遗传体质评估的方法，其特征在于，其方法为:步骤1.检测的样品类型与采样方法:用采样拭在20-30个被测者口腔中分别左右两腮至少需要各上下刮40次以上，以保证采集到足量的细胞样本；步骤2.基因组DNA的抽提方法:采用硅胶吸附法抽提每一个口腔上皮细胞样本的基因组DNA，时间为2小时一 2.5小时，共抽提20 - 30个被测者样本，经电泳检测后，用肉眼可见清晰白色条带即可判断获得的DNA能进入下一步检测；步骤3:荧光定量PCR反应将每一个被测者样本分别放入3个反应孔，同时检测3个位点，即抑癌基因TP53(P53BP1) SEQ ID NOl:T_885G、抑癌基因 TP53 (P53BP1) SEQ ID N02:Glnll36Lys、抑癌基因TP53 (TP53) SEQ ID N03:Arg72Pro ;20 — 30个被测者样本就有60-90个反应孔，另外根据实验需要增设不含DNA模版的NTC空白对照孔；每一个反应孔的基因分型可以根据下表的引物和探针设计，采用TaqMan?_MGB技术，进行检测试剂合成；在每一个反应孔中加入试剂为荧光定量PCR本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抑癌基因遗传体质评估的基因检测方法及中医体质调理方案，其特征在于，其方法为：?步骤1．检测的样品类型与采样方法：用采样拭在20?30个被测者口腔中分别左右两腮至少需要各上下刮40次以上，以保证采集到足量的细胞样本；步骤2．基因组DNA的抽提方法：采用硅胶吸附法抽提每一个口腔上皮细胞样本的基因组DNA，时间为2小时－2.5小时，共抽提20－30个被测者样本，经电泳检测后，用肉眼可见清晰白色条带即可判断获得的DNA能进入下一步检测；步骤3：荧光定量PCR反应????将每一个被测者样本分别放入3个反应孔，同时检测抑癌基因TP53（P53BP1）SEQ?ID?NO1：T?885G、抑癌基因TP53（P53BP1）SEQ?ID?NO2：Gln1136Lys、抑癌基因TP53（TP53）SEQ?ID?NO3：Arg72Pro?3个位点，20－30个被测者样本就有60?90个反应孔，并增设不含DNA模版的NTC空白对照孔；每一个反应孔的基因分型根据下表的引物和探针设计，采用TaqMan??MGB技术，进行检测试剂合成；在每一个反应孔中加入试剂为荧光定量PCR反应体系，总体积为10μl，即浓度为20ng/μl?的DNA模板2μl?、1μl?10X荧光定量PCR反应缓冲液ABI?Taqman???MGB、0.1μl?25mM?d?NTP合成DNA的四种脱氧核苷酸底物、0.5μl?25mM?MgCl2溶液、0.02μl（5units/μl）Taq?DNA聚合酶、去离子水5.43μl、3个位点分别采用不同的正向引物（20μM，0.225μl）、反向引物（20μM，0.225μl）、VIC荧光探针（10μM，0.25μl）和FAM荧光探针（10μM，0.25μl）工具进行检测，?将101?151个反应孔在ABI9700型PCR扩增仪上进行反应，先进行预热：50℃、2分钟，95℃、10分钟，然后再进行60个循环的95℃、30秒，60℃、1分钟、反应结束后取出后再放入ABI7900型荧光定量PCR仪上读取样品荧光量，并自动将20－30个被测者样本检测3个点位的数据对号入座到3个图中，同时生成3张图，是抑癌基因TP53（P53BP1）SEQ?ID?NO1：T?885G图、抑癌基因TP53（P53BP1）SEQ?ID?NO2：Gln1136Lys图、抑癌基因TP53（TP53）SEQ?ID?NO3：Arg72Pro图；?步骤4：SNP基因型分析将ABI7900型荧光定量PCR仪上显示的最终样本荧光信号的3个表和一个NTC空白对照进行比较，每个位点理论上存在三种不同的信号，纯VIC荧光信号、VIC和FAM杂合荧光信号以及纯FAM荧光信号，分别代表该位点三种不同的基因型；(1)、抑癌基因TP53（P53BP1）SEQ?ID?NO1：T?885G在检测结果图中，共有21?31个点，每个点代表一个被测者样本的检测结果，坐标轴（X：0.4?0.5?Y：0.3?0.4）区域为空白对照、坐标轴（X：0.2?0.4?Y：1.1?1.3）区域为TT基因型、坐标轴（X：0.6?0.8?Y：0.7?1.0）区域为TG基因型、坐标轴（X：0.7?0.9?Y：0.3?0.4）区域为GG基因型，其中，TT、TG为风险基因型，携带风险基因型时，蛋白质翻译减少或编码突变型蛋白质时均可导致细胞的恶变，导致癌症易感性增加；（2）、抑癌基因TP53（P53BP1）SEQ?ID?NO2：Gln1136Lys在检测结果图中，共有21?31个点，每个点代表一个被测者样本的检测结果，坐标轴（X：0.0?0.1?Y：0.1?0.3）区域为空白对照、坐标轴（X：0.0?0.1?Y：1.1?1.3）区域为AA基因型、坐标轴（X：0.2?0.3?Y：0.9?1.2）区域为AG基因型、坐标轴（X：0.35?0.45?Y：0.4?0.6）区域为CC基因型，其中，AA为风险基因型，携带风险基因型时，蛋白质翻译减少或编码突变型蛋白质时均可导致细胞的恶变，导致癌症易感性增加；（3）、抑癌基因TP53（TP53）SEQ?ID?NO3：Arg72Pro在检测结果图中，共有21?31个点，每个点代表一个被测者样本的检测结果，坐标轴（X：0.0?0.1?Y：0.3?0.4）区域为空白对照、坐标轴（X：0.1?0.3?Y：1.6?1.9）区域为CC基因型、坐标轴（X：0.6?0.8?Y：1.1?1.4）区域为CG基因型、坐标轴（X：0.9?1.1?Y：0.4?0.6）区域为GG基因型，其中，CC为风险基因型，携带风险基因型时，蛋白质翻译减少或编码突变型蛋白质时均可导致细胞的恶变，导致癌症易感性增加；每一个被测者的3个点落在3个表上哪个区域，即可知道被测者抑癌基因的遗传体质；步骤5：根据检测结果给予个性化中医体质调理指导建议，...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：毛丹丹，王校，傅咏南，
申请(专利权)人：上海中优门诊部有限公司，
类型：发明
国别省市：
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