本发明专利技术公开了DKK1作为诊断标志物的用途，发明专利技术人通过分析大量的肝细胞癌样本，从中分析了DKK1和AFP的表达情况，首次发现血清DKK1对于诊断肝细胞癌，尤其是诊断甲胎蛋白阴性肝细胞癌、鉴别肝细胞癌和甲胎蛋白阳性慢性肝病和/或诊断早期肝细胞癌或小肝细胞癌具有较高的灵敏度和特异性；更特别地，DKK1联合AFP诊断可大大提高临床诊断的准确性。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了DKK1作为诊断标志物的用途，专利技术人通过分析大量的肝细胞癌样本，从中分析了DKK1和AFP的表达情况，首次发现血清DKK1对于诊断肝细胞癌，尤其是诊断甲胎蛋白阴性肝细胞癌、鉴别肝细胞癌和甲胎蛋白阳性慢性肝病和/或诊断早期肝细胞癌或小肝细胞癌具有较高的灵敏度和特异性；更特别地，DKK1联合AFP诊断可大大提高临床诊断的准确性。【专利说明】DKK1作为诊断标志物的用途
本专利技术属于生物医药领域；更具体地，本专利技术涉及DKKl作为诊断标志物的用途，其可用于:诊断甲胎蛋白阴性肝细胞癌、鉴别肝细胞癌和甲胎蛋白阳性慢性肝病和/或诊断早期肝细胞癌或小肝细胞癌。
技术介绍
肝脏原发性肿瘤包括肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)、肝内胆管癌、混合性肝细胞癌、胆管囊腺瘤、肝母细胞瘤、血管瘤、类癌、淋巴癌、上皮样血管内皮瘤、鳞状细胞癌、畸胎瘤、以及平滑肌肉瘤、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、横纹肌肉瘤等其它肝脏肉瘤。肝细胞癌(HCC)是其中一种组织学亚型。肝细胞癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，发病率位居世界第六位，死亡率位居第三位。在西方国家其发病率逐年上升，中国更是肝细胞癌高发国。据统计，全球2008年肝癌新增患病人数约74.8万，死亡69.6万，其中一半均发生在中国。目前，肝细胞癌的病因尚未完全明确，其发生是一个涉及多因素、多阶段和多基因累积变异的过程，主要的因素有病毒感染、黄曲霉毒素的摄入、酒精中毒、水污染、肝螺旋杆菌以及肝硬化等。乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染是肝细胞癌的主要致病因素，尤其是在亚洲和非洲；丙型肝炎病毒(h印atitis C virus,HCV)感染呈世界性分布，是欧美等西方国家肝细胞癌发病率升高的主要因素。肝硬化是肝细胞癌发生最危险的因素，也是肝硬化病人主要的死因。由于大多数肝细胞癌患者就诊时已属中晚期，失去了最佳治疗时机，目前仅有30-40%的肝细胞癌患者能实施有效手术治疗手段，五年生存率仅有3-5%。所以及时有效的诊断肝细胞癌是提高患者生存率的关键之一。目前，筛查和诊断肝细胞癌最常用的方法是影像学和血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein, AFP)检测。影像包括超声、CT、MRI等,但影像检测花费昂贵,难以广泛应用，且易受操作者经验影响，而且难以区分肝癌和非恶性增生。AFP是当前全世界应用最广泛的肝细胞癌标志物。当其界值为20ng/mL时，AFP诊断肝细胞癌的灵敏度仅为55-60%，产生约40%的假阴性率；且其诊断小肝癌的能力更低，灵敏性降为25-52%，大部分早期肝细胞癌患者AFP均无明显升高。这部分AFP阴性肝细胞癌病人在临床上难以诊断，难以评估其治疗效果和疾病进程。另外部分非肝癌的慢性肝病患者血清AFP浓度也升高，包括15-58%的慢性乙型肝炎病人，10-43%的慢性丙型肝炎病人和11-47%的肝硬化患者，产生一定的假阳性率。因此发现新的可靠的能弥补AFP不足的肝细胞癌诊断标志物，可极大提高和改善临床综合治疗效果，有助于肝细胞癌患者生存期的延长和生存质量的提高。理想的肿瘤标志物需要有较高的特异性，能够将肝细胞癌与肝炎、肝硬化、肝脏再生结节等区别开来，同时还需有较高的灵敏度，能够诊断早期肝细胞癌，且具有易检测、可重复、非侵入性的特点。人类基因组计划的完成，高通量基因表达检测方法的发展和大规模数据分析能力的提高，使人们可以更深入地研究肝细胞癌发生发展过程中基因表达的改变，更好地理解肝细胞癌的发病机制，筛选有望应用于临床的生物标志物和药物靶点。本实验室前期通过 cDNA 表达谱芯片(Affymetrix GeneChip Human Genome U133Plus 2.0Array)技术分析了肝细胞癌患者癌组织及对应癌旁肝组织基因表达谱的差异。结果发现分泌型蛋白DKKl (Dickkopf-1)基因在肝细胞癌组织中高表达；进一步发现DKKl在正常成年人的多种组织中不表达，仅在胎盘组织中表达，具有肿瘤特异性。因此DKKl有潜力成为肿瘤血清蛋白标志物。DKKl是Wnt信号通路的抑制因子，最早克隆于1998年，发现其在非洲爪蟾早期发育中能够抑制fct诱导的轴的复制而参与头部的形成。Wnt通路是一条对胚胎发育起重要调节作用的信号通路，参与细胞增殖、分化、凋亡、细胞极性和运动等过程，其通路中信号分子的突变或异常表达与多种疾病及癌症相关。该信号通路与肝细胞癌的发生发展也密切相关。fct通路受几种分泌蛋白的调控，包括DKK、WIF(Wnt-1nhibitor factor)和SFRP (secreted frizzled related protein)等。DKK家族包含进化上相对保守的4个成员(DKK1-4)。DKKl编码一个分泌型糖蛋白，含有两个富含半胱氨酸的保守区域(Cysl、Cys2)，能够与低密度脂蛋白受体相关蛋白5/6 (low-densitylipoprotein receptor-relatedprotein 5/6, LRP5/6)结合，并在膜蛋白Kremenl/2参与下通过引起LRP5/6内吞抑制ffnt-Frizzled-LRP5/6复合体的形成,而抑制经典的Wnt信号通路。随后本专利技术人采用ELISA方法，首次在10种不同类型人肿瘤细胞培养上清中检测出高浓度的DKKl蛋白，提示多种人肿瘤细胞分泌和高表达DKKl，DKKl可用于人类恶性肿瘤的临床血清诊断。于是2005年本专利技术人申报了国家专利技术专利(CN200510110298.2)和国际PCT专利(PCT/CN2006/000382)。DKKl用于癌症血清诊断的中国专利和国际专利均为本专利技术人首次在国内和国际上提出申请。但是，目前血清DKKl对于肝细胞癌的临床意义，尤其对其甲胎蛋白阴性肝细胞癌的诊断能力、鉴别诊断肝细胞癌和甲胎蛋白阳性慢性肝病的能力、对早期肝细胞癌或小肝细胞癌的诊断能力并不清楚。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供DKKl作为诊断标志物的用途。在本专利技术的第一方面，提供DKKl蛋白或其编码基因在制备诊断试剂或试剂盒中的用途，所述的诊断试剂或试剂盒用于诊断肝细胞癌。在一个优选例中，所述的诊断肝细胞癌包括:诊断甲胎蛋白阴性肝细胞癌；鉴别(区分)肝细胞癌和甲胎蛋白阳性慢性肝病；和/或诊断早期肝细胞癌或小肝细胞癌。在另一优选例中,所述的诊断试剂选自:特异性扩增DKKl蛋白的编码基因的引物；或特异性识别DKKl蛋白的编码基因或其转录本的探针；或特异性抗DKKl蛋白的抗体。在另一优选例中，所述的特异性扩增DKKl蛋白的编码基因的引物是引物对，核苷酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO: 2所示。在另一优选例中，所述的甲胎蛋白阴性肝细胞癌为甲胎蛋白不表达或血清甲胎蛋白含量小于20ng/ml的肝细胞癌；或所述的慢性肝病选自:肝硬化，慢性乙型肝炎；或所述的小肝细胞癌是肿瘤直径小于2cm的肝细胞癌；或所述的早期肝细胞癌是BCLC 0+A级的肝细胞癌。在本专利技术的另一方面，提供一种用于诊断肝细胞癌(包括甲胎蛋白阴性肝细胞癌、鉴别肝细胞癌和甲胎蛋白阳性慢性肝病和/或诊断早期肝细胞癌或小肝细胞癌)的试剂盒，所述的试剂盒中含有本文档来自技高网...
【技术保护点】
DKK1蛋白或其编码基因在制备诊断试剂或试剂盒中的用途，所述的诊断试剂或试剂盒用于诊断肝细胞癌。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：覃文新，沈秋瑾，顾健人，杨胜利，
申请(专利权)人：上海市肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：
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