本发明专利技术公开了一种检测男性生育力的凝集素组合物，所述凝集素组合物包括如下凝集素中的两种或多种：Jacalin、GHA、MPL、ACL、VVL和ABA。本发明专利技术还提供了一种检测男性生育力的试剂盒，包括所述凝集素组合物和PBS洗涤液。本发明专利技术利用以上6种凝集素的结合与不同人精子样本结合强度的差异，通过流式细胞仪、荧光显微镜、液态芯片等方法检测荧光强弱来评价精子的质量，实现对男性生育力的评价，为男性不育分子机制的研究以及男性不育病因诊断提供理论依据。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种检测男性生育力的凝集素组合物，所述凝集素组合物包括如下凝集素中的两种或多种：Jacalin、GHA、MPL、ACL、VVL和ABA。本专利技术还提供了一种检测男性生育力的试剂盒，包括所述凝集素组合物和PBS洗涤液。本专利技术利用以上6种凝集素的结合与不同人精子样本结合强度的差异，通过流式细胞仪、荧光显微镜、液态芯片等方法检测荧光强弱来评价精子的质量，实现对男性生育力的评价，为男性不育分子机制的研究以及男性不育病因诊断提供理论依据。【专利说明】检测男性生育力的凝集素组合物及其试剂盒
本专利技术涉及一种凝集素组合物及其试剂盒，具体地，涉及一种检测男性生育力的凝集素组合物及其试剂盒。
技术介绍
在哺乳动物中，精子从睾丸中生成在穿过附睾过程中，其表面覆盖上高密度的糖分子，从而形成20-60nm厚的糖萼，大部分的糖残基附着在蛋白质上，这些糖蛋白有的整合在精子膜上，有的松散地连在精子表面。目前，有关人精子表面糖萼的结构图谱未知，仅知道精子胞膜糖萼的结构与男性生育力密切相关。在食蟹猴中，高度糖基化的β -defensinl26 (DEFB126)从附睾体部分泌并覆盖在整个精子表面，是精子糖萼的主要糖蛋白成分，在精子穿过宫颈黏液，逃避女性生殖道的免疫监视以及免疫反应，介导精子与输卵管上皮细胞的结合等方面起重要的作用。在人类中，约有20%的男性，其DEFB126基因编码区发生两个核苷酸缺失的移码突变，并且发生纯合突变(del/del)的男性其自然生育力显著降低。目前，研究细胞表面糖结构的技术手段不多，主要是利用凝集素与寡糖的特异性结合的流式细胞仪技术(flow cytometry, FCM)和突光显微镜的技术。其中，花生凝集素(PNA)和豌豆凝集素(PSA)可以特异性识别精子的顶体糖蛋白，而用于检测精子的顶体反应能力。但目前没有用凝集素芯片方法对人精子表面糖结构图谱做全面的分析，以及通过凝集素芯片筛选不同生育力男性精子表面的差异结合凝集素，从而获得一种可用于男性生育力筛查的凝集素组合物及其试剂盒，目前现有技术中没有该同类产品。
技术实现思路
本专利技术解决的问题在于提供一种与人精子表面糖结构特异性结合的凝集素组合物，利用不同生育力男性精子细胞与此凝集素组合的结合强度不同，评价男性的生育力，为男性不育分子机制的研究以及男性不育病因诊断提供理论依据。本专利技术还提供了一种主要组成成分为上述凝集素组合、用于筛查男性生育力的试剂盒。本专利技术通过以下技术方案实现:一种检测男性生育力的凝集素组合物，包括如下凝集素中的两种或多种:Jacalin、GHA、MPL、ACL、VVL 和 ΑΒΑ。优选的，所述 Jacalin、GHA, MPL、ACL、VVL 和 ABA 标记有荧光材料。更优选的，所述荧光材料为FITC、AIeXaFluor488或荧光纳米微球。—种检测男性生育力的试剂盒，包括上述凝集素组合物和PBS洗涤液。在本专利技术中，Jacalin指木菠萝全缘石楠凝集素，(Artocarpus integrifolia,AIA), GHA 指棉花凝集素(Gossypium hirsutum agglutinin), ACL 指尾穗觅凝集素(Amaranthus caudatus lectin), MPL 指澄桑凝集素(Maclura pomifera lectin), VVL 指蚕豆凝集素(Vicia villosa lectin)和ABA指双孢子蘑燕凝集素(Agaricus bisporus)。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果:由于DEFB126基因缺陷会导致男性生育力下降，而在本专利技术中用凝集素芯片筛选出6种凝集素，与DEFB126突变型的精子结合下降。用FITC标记(或其它突光标记探针,如AIexaFluor488)的这6种凝集素与待检测精子样本孵育结合，经流式细胞仪、液态芯片或荧光显微镜检测样品的荧光强度，从而判定男性的生育力。本专利技术通过将这些凝集素组合作为男性生育力低下的筛查方法应用于临床，能够评价精液中精子表面糖结构指纹图谱的变化，为男性不育分子机制的研究以及男性不育病因诊断提供理论依据。【专利附图】【附图说明】通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本专利技术的其它特征、目的和优点将会变得更明显:图1为与人精子有特异结合的凝集素结果图；图2为根据DEFB126双碱基缺失突变分类的不同基因型的男性精子与凝集素结合的差异图；图3为用于评估男性生育力的凝集素荧光信号结果图。【具体实施方式】下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本专利技术，但不以任何形式限制本专利技术。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本专利技术的保护范围。为了便于研究因糖萼变化导致不育男性的精子表面糖结构的变化，本专利技术用精子表面糖蛋白主要组成之一-β-防御素126蛋白(DEFB126)，以DEFB126表达缺陷型作为病例组，分析因糖蛋白变化导致糖链图谱的变化，寻找可以作为男性不育检测指标的糖结构图谱的变化规律。下面结合具体的凝集素芯片的检测对本专利技术做进一步的详细说明。实施例1、人精子的采集和荧光标记步骤(1)精液样本的分组抽提男性全血或精子中的基因组DNA，按如下引物序列，及荧光定量PCR条件，对DEFB126基因编码区的rsl40685149位点进行基因分型，将精液样本分为野生型组，杂合型组和纯突变组，在2支qPCR管中分别用2W/W、2D/D引物扩增，扩增完成后，分析数据；qPCR反应体系的具体配方如表1所示，qPCR扩增程序如表2所示:2ff/ff_169bp的正向引物:如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；2ff/ff_169bp的反向引物:如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；2D/D_295bp的正向引物:如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列；2D/D_295bp的反向引物:如SEQ ID N0:4所示的核苷酸序列；表1【权利要求】1.一种检测男性生育力的凝集素组合物，其特征在于，包括如下凝集素中的两种或多种:Jacalin、GHA、MPL、ACL、WL 和 ΑΒΑ。2.根据权利要求1所述的凝集素组合物，其特征在于，所述Jacalin、GHA、MPL、ACL、WL和ABA标记有荧光材料。3.根据权利要求2所述的凝集素组合物，其特征在于，所述荧光材料为FITC、AIexaFluor488或荧光纳米微球。4.一种检测男性生育力的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1、2或3所述凝集素组合物、PBS洗涤液。【文档编号】G01N21/64GK103472044SQ201310415501【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年9月12日 优先权日:2013年9月12日 【专利技术者】施惠娟, 陶生策, 辛爱洁, 周树敏, 程莉, 刁华, 施长根, 袁瑶, 吴斌, 顾一骅, 于合国, 王鹏 申请人:上海市计划生育科学研究所, 上海交通大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测男性生育力的凝集素组合物，其特征在于，包括如下凝集素中的两种或多种：Jacalin、GHA、MPL、ACL、VVL和ABA。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：施惠娟，陶生策，辛爱洁，周树敏，程莉，刁华，施长根，袁瑶，吴斌，顾一骅，于合国，王鹏，
申请(专利权)人：上海市计划生育科学研究所，上海交通大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。