一种高效液相色谱检测血液中氯丙嗪含量的方法技术

本发明专利技术涉及生物医疗技术领域，提供了一种高效液相色谱检测血液中氯丙嗪含量的方法，包括配制1mg/ml的的氯丙嗪标准溶液、1mg/ml的的安定内标溶液、空白标样、正常人血液标样、病人血液标样，放入色谱仪里绘制色谱图，根据色谱图判断病人血液里面是否含有氯丙嗪；然后根据色谱图绘制氯丙嗪标准曲线，再将病人血液标样色谱图中的氯丙嗪峰值、安定内标溶液峰值与氯丙嗪标准曲线进行比较，计算出病人血液中的氯丙嗪含量。本发明专利技术有效解决了色谱图中杂峰多、灵敏度低、精确度低、成本高、绘制出的氯丙嗪标准曲线线性范围较小、过氧化物多影响氯丙嗪稳定提取的问题。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及生物医疗
，提供了，包括配制1mg/ml的的氯丙嗪标准溶液、1mg/ml的的安定内标溶液、空白标样、正常人血液标样、病人血液标样，放入色谱仪里绘制色谱图，根据色谱图判断病人血液里面是否含有氯丙嗪；然后根据色谱图绘制氯丙嗪标准曲线，再将病人血液标样色谱图中的氯丙嗪峰值、安定内标溶液峰值与氯丙嗪标准曲线进行比较，计算出病人血液中的氯丙嗪含量。本专利技术有效解决了色谱图中杂峰多、灵敏度低、精确度低、成本高、绘制出的氯丙嗪标准曲线线性范围较小、过氧化物多影响氯丙嗪稳定提取的问题。【专利说明】
本专利技术属于生物医疗
，特别涉及。
技术介绍
氯丙嗪属二甲胺族分噻嗪类药物，镇静作用明显，可产生较强的抗胆碱作用及中度的锥体外系症状，止吐作用较强，可制止多种原因引起的呕吐，为抗精神病药的代表药物，小剂量可作为镇吐药使用。氯丙嗪口服易吸收，但吸收不规则，个体差异甚大，吸收速度受胃内食物和抗胆碱药的影响，吸收后2?4h血药浓度达到高峰；氯丙嗪肌内注射吸收迅速，15?30min血药浓度达到高峰。氯丙嗪脂溶性高，易透过血脑屏障，脑内浓度可达血浆浓度的10倍，但是主要代谢在肝脏，易产生药物残留，残留的氯丙嗪和部分具有原药活性的代谢物，能够引起白细胞减少和粒细胞缺乏症，从而引起人体肝脏、肾脏的病变，还会引起眼部并发症等。目前，市场上存在的氯丙嗪血液浓度的测试方法中，浓度较低的点很难提取，例如5、10、20ng/ml的含量点不能在标准曲线上绘制出来，并且标准曲线的最高点的浓度为160ng/ml，临床上有很多病人的氯丙嗪含量远远超过该最高点，故此线性范围过窄；过氧化物多，使对过氧化物敏感的氯丙嗪的提取率不稳定。因此，生物医疗
急需一种杂峰少、灵敏度高、精确度高、能够绘制出较大线性范围的氯丙嗪标准曲线、成本低廉、降低过氧化物存在率，能够稳定提取氯丙嗪的高效液相色谱检测血液中氯丙嗪含量的方法。
技术实现思路
为了克服现有氯丙嗪含量检测不准确的缺点，本专利技术提供，技术方案如下:—种高效液相色谱检测血液中氯丙嗪含量的方法，其特征在于，包含以下步骤:第一步，配制Img / ml的的氯丙嗪标准溶液；首先，称取分析纯氯丙嗪500mg，放入500mL容量瓶中，然后将色谱纯甲醇倒入装有氯丙嗪的容量瓶中，稀释至500ml，摇匀；第二步，配制lmg/ml的的安定内标溶液；首先，称取分析纯安定lOOmg，放入IOOmL容量瓶中，然后将去离子水倒入装有安定的容量瓶中，稀释至100ml，摇匀。第三步，配制17.6 ii g/ml维生素C ;首先，称取维生素Cl.76mg，放入IOOmL容量瓶中，将去离子水加入装有维生素C的容量瓶中，稀释至100ml，摇匀；第四步，配制2129.6ml流动相；首先将甲醇1400ml、冰醋酸5.2ml、四甲基乙二胺4.4ml25000ml的容量瓶中，然后向装有甲醇、冰醋酸、四甲基乙二胺的容量瓶中倒入720ml去离子水，摇匀。第五步，取500 ii I正常人的血清加入IOml具塞抽提管中，作为空白标样；第六步，取500iU正常人的血清加入IOml具塞抽提管中，然后量取150ng安定内标溶液，倒入装有正常人血清的具塞抽提管中，作为标样I ;第七步，取500iil正常人的血清加入IOml具塞抽提管中，然后依次量取300ng氯丙嗪标准溶液，倒入装有正常人血清的具塞抽提管中，作为标样2 ；第八步，取500iU正常人的血清加入IOml具塞抽提管中，然后量取150ng安定内标溶液，分别与10ng、50ng、100ng、200ng、300ng、600ng氯丙嗪标准溶液，一起倒入装有病人血清的具塞抽提管中，作为标样3、4、5、6、7、8 ；第九步，取500iU病人的血清加入IOml具塞抽提管中，然后量取150ng安定内标溶液，倒入装有病人血清的具塞抽提管中，作为标样9 ；第十步，首先分别向空白标样、标样1、2、3、4、5、6、7、8、9中加入维生素ClOO yl，摇匀后再分别加入2mol/l氢氧化钠500 Ul，再加入色谱纯乙醚4.5ml，漩涡振荡3分钟，静置20分钟；第十一步，分别从离心后的空白标样、标样1、2、3、4、5、6、7、8、9中移取3.5ml上清液至10支洁净的IOml具塞抽提管中，放置于50°C下水浴，并在氮气流下蒸发至完全干燥；第十二步，首先将取出的残留物分别用250 Ul流动相漩涡混匀、溶解，然后将溶解物分别吸入10支尖底离心管中；第十三步，分别从10支尖底离心管中取出100 ill，放入10支试管中，再将10支试管放入色谱仪中进行光谱测量，得出10张色谱图；第十四步，根据空白标样、标样1、标样2、标样3的比较可以判断出环己烷羧酸内标溶液的峰值，氯丙嗪标准溶液的峰值；进一步地，根据标样3的色谱图可以判断出标样9中是否含有氯丙嗪；进一步地，色谱仪根据标样3、4、5、6、7、8的色谱图绘制出氯丙嗪标准曲线；进一步地，色谱仪根据色谱图中氯丙嗪的峰值、安定内标溶液的峰值、氯丙嗪标准曲线，计算出标样9中氯丙嗪的含量。如上的一种高效液相色谱检测血液中氯丙嗪的方法，其中，空白标样的色谱图为一条接近于平滑的直线。如上的一种高效液相色谱检测血液中氯丙嗪的方法，其中，氯丙嗪的出峰时间为8.14±0.55 分。如上的一种高效液相色谱检测血液中氯丙嗪的方法，其中，氯丙嗪标准曲线的斜率为 0.9998±0.0002。本专利技术的有益效果是:1.本专利技术实验过程中加入了维生素C，能够有效的消除过氧化物，更加稳定的提取出病人血液中的氯丙嗪。2.能够绘制出氯丙嗪标准曲线，与病人的氯丙嗪色谱图相比较，从而计算出氯丙嗪含量。3.本专利技术使用的实验仪器少、操作简单、灵敏度高、精确度高。4.本专利技术采用色谱仪生成的色谱图杂峰少，具有更好的辨识度。5.本专利技术检测成本低廉，提高了经济效益。【专利附图】【附图说明】下面结合附图和【具体实施方式】来详细说明本专利技术:图1是本专利技术的空白标样产生的色谱图。图2是本专利技术的标样I产生的色谱图。图3是本专利技术的标样2产生的色谱图。图4是本专利技术的标样3产生的色谱图。图5是本专利技术的标样9产生的色谱图。图6是本专利技术根据标样3、4、5、6、7、8色谱图绘制出的氯丙嗪标准曲线。【具体实施方式】为了使本专利技术的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体图示，进一步阐述本专利技术。本专利技术的具体实施步骤如下:第一步，配制Img / ml的的氯丙嗪标准溶液；首先，称取分析纯氯丙嗪500mg，放入500mL容量瓶中，然后将色谱纯甲醇倒入装有氯丙嗪的容量瓶中，稀释至500ml，摇匀。第二步，配制lmg/ml的的安定内标溶液；首先，称取分析纯安定lOOmg，放入IOOmL容量瓶中，然后将去离子水倒入装有安定的容量瓶中，稀释至100ml，摇匀。第三步，配制17.6 U g/ml维生素C ；首先，称取维生素Cl.76mg，放入IOOmL容量瓶中，将去离子水加入装有维生素C的容量瓶中，稀释至100ml，摇匀；第四步，配制2129.6ml流动相； 首先将甲醇1400ml、冰醋酸5.2ml、四甲基乙二胺4.4ml25000ml的容量瓶中，然后向装有甲醇、冰醋酸、四甲基乙二胺的容量瓶中倒入720ml去离子水，摇本文档来自技高网...

【技术保护点】
本专利技术的一种高效液相色谱检测血液中氯丙嗪含量的方法，其特征在于，包含以下步骤：第一步，配制lmg／ml的的氯丙嗪标准溶液；首先，?称取分析纯氯丙嗪500mg，放入500mL容量瓶中，然后将色谱纯甲醇倒入装有氯丙嗪的容量瓶中，稀释至500ml，摇匀；?第二步，配制1mg/ml的的安定内标溶液；首先，称取分析纯安定100mg，放入100mL容量瓶中，然后将去离子水倒入装有安定的容量瓶中，稀释至100ml，摇匀；第三步，配制17.6μg/ml维生素C；首先，称取维生素C1.76mg,放入100mL容量瓶中，将去离子水加入装有维生素C的容量瓶中，稀释至100ml，摇匀；第四步，配制2129.6ml流动相；首先将甲醇1400ml、冰醋酸5.2ml、四甲基乙二胺4.4ml25000ml的容量瓶中，然后向装有甲醇、冰醋酸、四甲基乙二胺的容量瓶中倒入720ml去离子水，摇匀；第五步，取500μl正常人的血清加入10ml具塞抽提管中，作为空白标样；第六步，取500μl正常人的血清加入10ml具塞抽提管中，然后量取150ng安定内标溶液，倒入装有正常人血清的具塞抽提管中，作为标样1；第七步，取500μl正常人的血清加入10ml具塞抽提管中，然后依次量取300ng氯丙嗪标准溶液，倒入装有正常人血清的具塞抽提管中，作为标样2；第八步，取500μl正常人的血清加入10ml具塞抽提管中，然后量取150ng安定内标溶液，分别与10ng、50ng、100ng、200ng、300ng、600ng氯丙嗪标准溶液，一起倒入装有病人血清的具塞抽提管中，作为标样3、4、5、6、7、8；第九步，取500μl病人的血清加入10ml具塞抽提管中，然后量取150ng安定内标溶液，倒入装有病人血清的具塞抽提管中，作为标样9；第十步，首先分别向空白标样、标样1、2、3、4、5、6、7、8、9中加入维生素C100μl，摇匀后再分别加入2mol/l氢氧化钠500μl，再加入色谱纯乙醚4.5ml，漩涡振荡3分钟，静置20分钟；第十一步，分别从离心后的空白标样、标样1、2、3、4、5、6、7、8、9中移取3.5ml上清液至10支洁净的10ml具塞抽提管中，放置于50℃下水浴，并在氮气流下蒸发至完全干燥；?第十二步，首先将取出的残留物分别用250μl流动相漩涡混匀、溶解，然后将溶解物分别吸入10支尖底离心管中；第十三步，分别从10支尖底离心管中取出100μl，放入10支试管中，再将10支试管放入色谱仪中进行光谱测量，得出10张色谱图；第十四步，根据空白标样、标样1、标样2、标样3的比较可以判断出环己烷羧酸内标溶液的峰值，氯丙嗪标准溶液的峰值；进一步地，根据标样3的色谱图可以判断出标样9中是否含有氯丙嗪；进一步地，色谱仪根据标样3、4、5、6、7、8的色谱图绘制氯丙嗪标准曲线；进一步地，色谱仪根据色谱图中氯丙嗪的峰值、安定内标溶液的峰值、氯丙嗪标准曲线，计算出标样9中氯丙嗪的含量。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：冯娟，甄燕，
申请(专利权)人：上海兰卫临床检验有限公司，
类型：发明
国别省市：