一种肿瘤标记物及其在血液中联合检测方法技术

本发明专利技术公开了一种肿瘤标记物及其在血液中联合检测方法，该肿瘤标记物包括MFG‑E8、CA153和CEA；联合检测方法包括：MFG‑E8、CA153和CEA血清水平检测、临界值设定、统计学分析、MFG‑E8、CA153和CEA血清水平三项指标的检测进行比较、阳性率进行比较；MFG‑E8、CA153、CEA血清水平联合检测。目前大多数标记物敏感性较高特异性较低，而特异性较高者敏感性较低，不能很好对肿瘤作出早期诊断和鉴别诊断，本发明专利技术为弥补单一肿瘤标志物在临床检测中敏感性和特异性不足，选择MFG‑E8、CA153和CEA联合检测，提高其检测的敏感性、特异性和准确性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程
，尤其涉及一种肿瘤标记物及其在血液中联合检测方法。
技术介绍
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁女性健康，其发病率呈逐年上升趋势。乳腺癌患者的生存率与癌症分期密切相关。资料显示,Ⅰ期患者5年和10年生存率分别为90.9％和83.7％；Ⅱ期分别为78.0％和65.8％；Ⅲ期分别为53.5％和43.0％，而乳腺癌远处转移患者(Ⅳ期)5年生存率(23％)明显低于Ⅲ期乳腺癌患者(79％)和Ⅰ-Ⅱ乳腺癌患者(97％)。因此，早期诊断和发现是提高乳腺癌患者生存率和降低死亡率的关键。乳腺癌的早期诊断是一项包括临床体检、自我检查、影像学检查以及分子生物学检查等多学科的联合诊断。多种诊断方法的适当选择和联合应用可提高乳腺癌的早期诊断率，并对复发监测和评价预后起到重要作用。乳腺癌肿瘤标志物的检测可反映肿瘤的生物学特性，对指导治疗、辅助诊断、判断预后均有重要意义。目前发现与乳腺癌相关的标志物有CEA、CA125、CA153、P53、TPS、乳清蛋白等。这些标志物被广泛应用于乳腺癌的早期诊断和预后评估。但目前大多标志物敏感性高者特异性较低，而特异性高者敏感性较低。使用单一的肿瘤标志物进行评估可能灵敏度、准确性不够高，器官特异性不够强，联合检测常常可弥补单项指标检测的不足。选择对MFG-E8、CEA和CA153进行联合检测来诊断乳腺癌，同时与使用单一肿瘤标志物检测进行比较，以探讨联合检测MFG-E8、CEA和CA153诊断乳腺癌的价值。MFG-E8是一种乳汁脂肪小球表面的亲脂性糖蛋白，乳脂由分化的乳腺上皮细胞合成，然后经膜包被分泌入乳导管腔，包被于脂滴表面的这层膜称为乳脂肪球膜，主要由糖蛋白、蛋白、胆固醇、磷脂构成。乳脂肪球表皮生长因子8(MFG-E8)又称lactadherin(乳黏素)或SED1，是乳脂肪球膜主要的糖蛋白之一，由乳腺上皮细胞、巨噬细胞、不成熟树突状细胞分泌。MFG-E8有两个功能结构域，一个是氨基末端结构域中有两个表皮生长因子(EGF)样结构域，在第二个的EGF样结构域中包含一个RGD(Arg-Gly-Asp，即精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸)整合素结合基序，以外延环形式暴露于EGF样结构域表面。RGD基序可连接αvβ3、αvβ5异二聚体整合素，利于细胞粘附及整合素介导的信号转导；另一个是羧基端的两个与凝血因子V和VIII结构域同源的C样结构域，能结合细胞膜的阴离子磷脂双层。另外，第二个C结构域含有一个氨基的置换，可使MFG-E8与磷脂酰丝氨酸膜有更高度的亲和力[3]。通过以上结构域，MFG-E8参与多种细胞间相互作用以及体机免疫清除过程，包括介导精-卵结合、附睾上皮细胞的维持、肠上皮细胞的维持与修复、促进乳腺分支形态发生、促进血管形成、促进树突状细胞外泌体功能、增强吞噬清除凋亡细胞等等。尽管乳脂肪球表皮生长因子最初发现于乳汁中，但它具体作用还不是很清楚，不过在乳腺癌细胞中发现MFG-E8的分泌量显著提高。KamranAtabai等研究发现，MFG-E8通过辨认暴露于凋亡上皮细胞表面的丝氨酸与凋亡的上皮细胞结合并促进吞噬细胞对凋亡细胞的清除，缺乏MFG-E8的小鼠乳腺组织凋亡的细胞数增多，乳腺退化和脂肪细胞再生受阻，并随乳腺退化的进行，乳腺组织出现炎症。Newburg等报道MFG-E8不仅能促进凋亡上皮细胞的清除，还可抑制轮状病毒从而对乳腺起保护作用。MFG-E8能通过循环入血，因此我们可在乳腺癌患者血清中检测出较高水平的MFG-E8，联合肿瘤标志物CA153、CEA可能在乳腺癌的早期诊断中具有临床意义。另外有研究已发现MFG-E8在脑胶质瘤组织中呈现出高表达，因此MFG-E8同样可能在乳腺癌组织中呈现高表达。探索MFG-E8在乳腺癌、癌旁组织及良性肿瘤中的表达、探索MFG-E8在不同组织级别乳腺癌中的表达，可能发现MFG-E8在乳腺癌诊断、浸润、转移及评估预后中的意义，提供一个新的预测指标。综上所述，目前大多标志物敏感性高者特异性较低，而特异性高者敏感性、较低，使用单一的肿瘤标志物进行评估可能灵敏度、准确性不够高，器官特异性不够强。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种肿瘤标记物及其在血液中联合检测方法，，旨在解决目前大多标志物敏感性高者特异性较低，而特异性高者敏感性、较低，使用单一的肿瘤标志物进行评估可能灵敏度、准确性不够高，器官特异性不够强的问题。本专利技术是这样实现的，一种肿瘤标记物，该肿瘤标记物包括MFG-E8、CA153和CEA。本专利技术另一目的在于提供一种肿瘤标记物在血液中联合检测方法，该肿瘤标记物在血液中联合检测方法包括：MFG-E8、CA153和CEA血清水平检测：CA153血清和CEA血清水平检测采用电化学方法检测，MFG-E8血清水平检测采用亲和素-生物素ELISA法检测；临界值设定：CA153的临界值为25U/ml，CEA的临界值为3.4μg/l，超过临界值判定为阳性；统计学分析：数据采取SPSS13.0统计软件分析，检测结果均采用均数±标准差(x±s)表示，样本间均数比较采用t检验；样本率的比较采用X2检验；MFG-E8、CA153和CEA血清水平三项指标的检测进行比较；对MFG-E8、CA153、CEA阳性率进行比较。进一步，所述MFG-E8与CA153、CEA在血液中联合检测前需进行通过临床随机抽样方法，选取未经过放、化疗，无其他重要脏器严重并发症的乳癌组30例，30例乳腺纤维瘤作为良性组，30例正常体检人群作为对照组，备用。进一步，所述MFG-E8、CA153和CEA血清水平检测前需进行乳癌组、良性组、对照组均清晨空腹采静脉血5ml，迅速分离血清，-20℃保存备测。进一步，所述CA153血清和CEA血清水平检测采用美国罗氏E170及配套试剂以电化学方法检测CA153和CEA水平，操作方法采用双抗夹心法，所述双抗夹心法为：生物素化的抗CA153单克隆抗体和钌(Ru)标记的抗CA153单克隆抗体混匀，形成夹心复合物；加入链霉亲和素包被和微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上；反应混合液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。进一步，所述MFG-E8血清水平检测采用亲和素-生物素ELISA法，检测试剂盒为Cusabio公司产品，酶标仪为ThermomultiskanMK3。进一步，所述MFG-E8血清水平、CA153血清水平和CEA血清水平比较中MFG-E8、CA153、CEA三项指标的检测结果差异有统计学意义(P<0.01)。进一步，所述MFG-E8、CA153、CEA阳性率比较中差异有统计学意义，P均<0.05。本专利技术提供的MFG-E8、ER在乳腺癌中的阳性表达率均高于其在癌旁乳腺组织中的阳性表达率，差异有统计学意义(P＜0.01)，MFG-E8与ER的表达均与组织学分级(P＝0.000，P＝0.002)有相关性，差异有统计学意义。MFG-E8和ER在乳腺癌组织中的表达呈正相关(r＝0.424，P＝0.001)，但MFG-E8的阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移及临床分期无显著相关，P＞0.05；乳腺浸润性导管癌组织中存在MF本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肿瘤标记物，其特征在于，该肿瘤标记物由MFG‑E8、CA153和CEA构成。

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤标记物，其特征在于，该肿瘤标记物由MFG-E8、CA153和CEA构成。2.一种如权利要求1所述的肿瘤标记物在血液中联合检测方法，其特征在于，该肿瘤标记物在血液中联合检测方法包括：MFG-E8、CA153和CEA血清水平检测：CA153血清和CEA血清水平检测采用电化学方法检测，MFG-E8血清水平检测采用亲和素-生物素ELISA法检测；临界值设定：CA153的临界值为25U/ml，CEA的临界值为3.4μg/l，超过临界值判定为阳性；统计学分析：数据采取SPSS13.0统计软件分析，检测结果均采用均数±标准差(x±s)表示，样本间均数比较采用t检验；样本率的比较采用X2检验；MFG-E8、CA153和CEA血清水平三项指标的检测进行比较；对MFG-E8、CA153、CEA阳性率进行比较。3.如权利要求2所述的肿瘤标记物在血液中联合检测方法，其特征在于，所述CA153血清和CEA血清水平检测采用美国罗氏E170及配套试剂以电化学方法检测CA153和CEA水平，操作方法采用双抗夹...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨泳，张家衡，李杰宝，宋旗，
申请(专利权)人：杨泳，
类型：发明
国别省市：湖北;42