本发明专利技术公开了一种定性定量检测植物激素活性赤霉素的方法及其专用芯片。本发明专利技术公开的一种辅助定性检测待测样品中是否含有活性赤霉素的方法，是利用表面等离子共振技术进行检测的，包括如下步骤：将待测样品溶液流经生物传感器芯片，进样完毕后，检测响应值A；将蛋白溶液流经生物传感器芯片，进样完毕后，检测对照响应值；若响应值A显著大于对照响应值，则判定待测样品候选为含有活性赤霉素的样品。本发明专利技术从多肽水平出发，构建了一种可批量化生产的稳定高效的M37偶联的SA芯片，利用表面等离子共振技术，可以实现对赤霉素的定性定量分析，从而为赤霉素的检测提供一种高效、灵敏的新方法。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种定性定量检测植物激素活性赤霉素的方法及其专用芯片。本专利技术公开的一种辅助定性检测待测样品中是否含有活性赤霉素的方法，是利用表面等离子共振技术进行检测的，包括如下步骤：将待测样品溶液流经生物传感器芯片，进样完毕后，检测响应值A；将蛋白溶液流经生物传感器芯片，进样完毕后，检测对照响应值；若响应值A显著大于对照响应值，则判定待测样品候选为含有活性赤霉素的样品。本专利技术从多肽水平出发，构建了一种可批量化生产的稳定高效的M37偶联的SA芯片，利用表面等离子共振技术，可以实现对赤霉素的定性定量分析，从而为赤霉素的检测提供一种高效、灵敏的新方法。【专利说明】ー种定性定量检测植物激素活性赤霉素的方法及其专用芯片
本专利技术涉及ー种定性定量检测植物激素活性赤霉素的方法及其专用芯片。
技术介绍
赤霉素(Gibberellin，GA)是广泛存在的ー类植物激素，种类非常复杂，目前已鉴定出136种。赤霉素按功能有活性和非活性之分，其中具有活性的GA数目较少，有GA1、GA3、GA4 等。赤霉素的化学结构十分类似，多为差向异构，结构差异大的赤霉素也仅存在双键、羟基数目或位置的不同，因此，赤霉素的分析检测具有很大的挑战性。国际上对赤霉素的分析研究早已开展，至少可以追溯到20世纪60年代甚至更早，但到目前为止，真正可用的赤霉素的分析检测方法并不多。早期的赤霉素测定以免疫反应为基础，通过制备半抗原，免疫动物来制备抗体，从而实现了免疫亲和色谱提纯，放射免疫测定以及后来发展起来的酶联免疫吸附測定。免疫測定的优点是反应条件温和，能保持生物活性，适合生物学效应研究，但缺点是需要制备半抗原和抗体，工作量大，測定周期长，成本高且难以自动化操作，而且測定效果和重现性也不甚理想。20世纪80年代后，质谱(MS)检测成为赤霉素检测的主力工具，通过与分离装置，如气相色谱(GC)，高效液相色谱(HPLC)，毛细管电泳(CE)等联用进行分析，这些方法具有较高的自动化程度，能同时实现定性定量分析，但是在用MS进行检测时，需要稳定同位素标记的赤霉素标准样品作为内參，然而一些标准样品在国内很难购买到，且价格昂贵。因此，赤霉素的检测仍然非常困难。表面等离子共振(Surface plasmon resonance, SPR)技术是近年来国际上迅速发展的光学生物检测技术，它具有检测过程方便快捷、样品无需标记、实时检测、应用范围广、检测灵敏度高、高通量分析等优点，因此可以广泛应用于生物分子相互作用的研究。
技术实现思路
本专利技术的ー个目的是提供一种辅助定性检测待测样品中是否含有活性赤霉素的方法，该方法是利用表面等离子共振技术进行检测的，包括如下步骤:将待测样品溶液流经生物传感器芯片，进样完毕后，检测响应值，记作响应值A;将蛋白溶液流经生物传感器芯片，进样完毕后，检测响应值，记作对照响应值；若响应值A显著大于对照响应值，则判定所述待测样品候选为含有活性赤霉素的样品。所述待测样品溶液由待测样品、SEQ ID N0.3所示蛋白和缓冲液组成。所述蛋白溶液由SEQ ID N0.3所示蛋白和缓冲液组成。所述生物传感器芯片是在适于表面等离子共振技术中使用的芯片上连接SEQ IDN0.1所示多肽得到的。本专利技术的另ー个目的是提供ー种辅助比较活性赤霉素活性大小的方法，该方法是利用表面等离子共振技术进行检测的，包括如下步骤:将蛋白溶液流经生物传感器芯片，进样完毕后，检测响应值，记作对照响应值；将赤霉素I的溶液流经生物传感器芯片，进样完毕后，检测响应值，记作响应值I ;将赤霉素II的溶液流经生物传感器芯片，进样完毕后，检测响应值，记作响应值II ;若响应值I和响应值II均显著大于对照响应值、且响应值I显著大于响应值II，则判定赤霉素I的活性候选高于赤霉素II。所述蛋白溶液由SEQ ID N0.3所示蛋白和缓冲液组成。所述赤霉素I的溶液由赤霉素1、SEQ ID N0.3所示蛋白和缓冲液组成。所述赤霉素II的溶液由赤霉素I1、SEQ ID N0.3所示蛋白和缓冲液组成。所述生物传感器芯片是在表面等离子共振技术中使用的芯片上连接SEQ ID N0.1所示多肽得到的。本专利技术的另ー个目的是提供ー种定量检测活性赤霉素的方法，该方法是利用表面等离子共振技术进行检测的，包括如下步骤:分别将不同浓度的活性赤霉素标准品的溶液流经生物传感器芯片，进样完毕后，检测响应值，记录各个不同浓度的溶液进样完毕时对应的响应值，以各响应值为纵坐标，以各浓度的自然对数为横坐标，制作标准曲线。将待测赤霉素溶液流经生物传感器芯片，进样完毕时，检测响应值，将该响应值代入标准曲线，即得出待测样品溶液中赤霉素的浓度。所述赤霉素标准品的溶液由赤霉素标准品、SEQ ID N0.3所示蛋白和缓冲液组成。所述待测赤霉素溶液由待测赤霉素、SEQ ID N0.3所示蛋白和缓冲液组成。所述不同浓度的活性赤霉素标准品的溶液中活性赤霉素标准品的浓度为100 μ Μ，10 μ Μ, 1 μ Μ,Ο.1 μ Μ,Ο μ Μ。所述生物传感器芯片是在表面等离子共振技术中使用的芯片上连接SEQ ID N0.1所示多肽得到的。所述待测赤霉素与赤霉素标准品为同一种赤霉素。上述任一所述方法中，所述缓冲液为含体积百分含量0.005%的TWeen20的ρΗ7.4的PBS缓冲液。上述任一所述方法中，所述待测样品的进样量为50μ L，进样流速为30μ L/min。上述任一所述方法中，所述的SEQ ID N0.1所示多肽通过生物素和芯片上的链霉亲和素与芯片连接。上述任一所述方法中，所述活性赤霉素为GA3或GA4。本专利技术的另ー个目的是提供ー种利用表面等离子共振技术检测活性赤霉素中使用的生物传感器芯片，该芯片是在表面等离子共振技术中使用的芯片上连接SEQ ID N0.1所示多肽得到的。上述生物传感器芯片中，所述的SEQ ID N0.1所示多肽通过生物素和芯片上的链霉亲和素与芯片连接。本专利技术的另ー个目的是提供一种多肽，为如下(1)或(2)所示:(1) SEQ ID N0.1 所示的多肽；(2)将SEQ ID N0.1所示的氨基酸序列经过ー个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的多肽。上述多肽在辅助定性和/或定量检测样品中活性赤霉素中的应用也属于本专利技术的保护范围。本专利技术从多肽水平出发，通过合成包含DELLA结构域的多肽M37，基于受体蛋白GIDla与DELLA蛋白相互作用依赖于活性GA浓度的机理，构建了一种可批量化生产的稳定高效的M37偶联的SA芯片，利用表面等离子共振技术，可以实现对赤霉素的定性定量分析，从而为赤霉素的检测提供一种高效、灵敏的新方法。【专利附图】【附图说明】图1为GIDla-GST蛋白的鉴定。图2为M37多肽芯片的特异性分析。图3为M32多肽芯片的特异性分析。图4为M37多肽芯片的赤霉素活性分析。图5为M32多肽芯片的赤霉素活性分析。图6为活性赤霉素浓度分析。图7为活性赤霉素含量标准曲线。【具体实施方式】下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中使用的实验材料及其来源如下:活性赤霉素GA3购自Sigma公司，货号为G7645。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种辅助定性检测待测样品中是否含有活性赤霉素的方法，是利用表面等离子共振技术进行检测的，包括如下步骤：将待测样品溶液流经生物传感器芯片，进样完毕后，检测响应值，记作响应值A；将蛋白溶液流经生物传感器芯片，进样完毕后，检测响应值，记作对照响应值；若响应值A显著大于对照响应值，则判定所述待测样品候选为含有活性赤霉素的样品；所述待测样品溶液由待测样品、SEQ?ID?No.3所示蛋白和缓冲液组成；所述蛋白溶液由SEQ?ID?No.3所示蛋白和缓冲液组成；所述生物传感器芯片是在适于表面等离子共振技术中使用的芯片上连接SEQ?ID?No.1所示多肽得到的。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐文忠，麻密，赵卓亚，
申请(专利权)人：中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：
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