一种卷烟烟气致细胞DNA损伤的定量评价方法技术

一种卷烟烟气致细胞DNA损伤的定量评价方法，属于卷烟烟气基因毒性的毒理学评价技术领域，其特征在于：是基于量子点标记荧光免疫法对烟气诱导的细胞DNA损伤标志物磷酸化的组蛋白（γH2AX）的定量测定方法；具体步骤包括：（1）细胞培养，（2）卷烟烟气染毒，（3）基于量子点标记荧光免疫法对细胞中γH2AX定量测定，（4）数据处理。本发明专利技术的优点在于：通过细胞固定和通透实现细胞样本的直接、高通量检测，省去了蛋白质提取步骤，提高检测速度；可实现96个样品的同时测定，具有高通量的优势。通过测定细胞中总H2AX的荧光信号可消除各检测孔中由细胞个数差异引起的信号偏差，减小平行样本荧光检测信号的偏差，提高方法重现性。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种卷烟烟气致细胞DNA损伤的定量评价方法，其特征在于：是基于量子点标记荧光免疫法对烟气诱导的细胞DNA损伤标志物磷酸化的组蛋白（?H2AX）的定量测定方法；具体步骤如下：1)?、细胞培养：人肺癌细胞A549细胞株培养于以1640培养基为溶剂的细胞培养基中，然后将细胞置于37℃，5％C02培养箱中培养，当细胞汇合率达70%?80%时，用0.25％胰蛋白酶消化法进行细胞接种；96?孔板的最外周36?个孔中每孔加入100?μl?生长培养液作为空白对照，其余每孔加入100?μl?细胞悬液，最终细胞接种密度为5000个/孔，于37?℃、5%?CO2?条件下培养24?h；2)、细胞染毒：使用细胞培养基将...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈欢，付立伟，田永峰，韩书磊，刘彤，侯宏卫，邢军，胡清源，
申请(专利权)人：国家烟草质量监督检验中心，
类型：发明
国别省市：