一种卷烟主流烟气中生物胺的测定方法技术

本发明专利技术属于一种卷烟主流烟气中生物胺的测定方法，包括以下步骤：（1）制备混合系列标准工作溶液：配制具有浓度梯度且含有内标的混合系列标准工作溶液；（2）样品前处理：将捕集了卷烟主流烟气总粒相物的剑桥滤片加入到2%甲酸水溶液，超声萃取30分钟；（3）固相萃取柱净化：取步骤（2）得到的萃取液过混合型阳离子交换固相萃取柱，洗脱后，将洗脱液置于氮气下吹干，再采用2mL乙腈水溶液进行复溶，得到样品净化液；（4）将步骤（1）得到的含有内标的混合系列标准工作溶液和步骤（3）得到的样品净化液在相同条件下进行HPLC‑MS/MS测定；（5）结果计算：由目标分析物峰面积和内标峰面积之比采用内标法进行定量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及卷烟烟气中成分的检测
，具体涉及一种卷烟主流烟气生物胺的测定方法。
技术介绍
生物胺是一类具有生物活性的含氮的低分子量碱性有机化合物的总称，它们是生物体自身合成荷尔蒙、核苷酸、蛋白质的前体，可以看作是氨分子中1-3个氢原子被烷基或芳基取代后形成的低分子量生物碱。生物胺根据其结构可以分为三类：脂肪族(腐胺、尸胺、精胺、亚精胺等)，芳香胺(酪胺、β-苯乙胺等)和杂环胺(组胺、色胺等)。生物胺主要由氨基酸脱羧作用形成，少部分通过醛或酮的胺化作用形成，各种动植物组织细胞中都含有少量的生物胺，其产生的条件主要有三个：一是有可形成生物胺的游离氨基酸，二是存在可代谢产生氨基酸脱羧酶的微生物，三是适合该微生物生长的环境。生物胺普遍纯在于多种食品和含酒精的发酵饮料中。生物胺不仅是食物香气的重要来源，也是N-亚硝基化合物合成的前体。当人体摄入过量生物胺时，极易引起神经系统和心血管系统损伤，我国于2008年出台了相关标准对食品中的生物胺提出了限量要求。目前生物胺的检测一般采用高效液相色谱(HPLC)、毛细管电泳(CE)、薄层色谱法(TLC)和气相色谱法(GC)，上述的检测方法都需要对样品进行衍生，操作较为复杂。目前，高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)由于其不需要对样品进行衍生、且具有高灵敏度和准确性越来越多的应用于痕量高沸点物质的检测。烟草作为一种特殊的食品，其也含有大量的蛋白质和氨基酸，且其生产过程中需要对原料进行纯化，容易产生生物胺。生物胺属于中等沸点化合物，在卷烟抽吸过程中，烟叶中的生物胺容易直接迁移进卷烟烟气中，且氨基酸的脱羧作用也容易产生生物胺，因此建立卷烟烟气中的生物胺的定性和定量的检测方法十分必要。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术中的缺点，提供一种卷烟主流烟气生物胺的测定方法，该方法是利用液相色谱-串联质谱法来同时测定卷烟主流烟气中的7种生物胺，能够快速有效的检测卷烟主流烟气中生物胺的含量。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：一种卷烟主流烟气中生物胺的测定方法，包括以下步骤：(1)制备混合系列标准工作溶液：配制具有浓度梯度且含有内标的混合系列标准工作溶液；(2)样品前处理：将烟支样品(重量在±0.02g范围和平均吸阻在±49Pa/支范围内)放置于21～23℃、相对湿度为58～62％的环境中平衡48～96h，采用转盘式吸烟机，按照每60秒抽吸一口，每口抽吸容量35ml，抽吸持续时间2s，用直径92mm的剑桥滤片捕集卷烟主流烟气总粒相物，每张滤片收集20支卷烟的总粒相物，取收集20支卷烟的总粒相物的1张滤片置于250mL锥形瓶中，加入30mL2vol％甲酸水溶液，超声萃取30分钟；(3)固相萃取柱净化：取步骤(2)得到的萃取液过混合型阳离子交换固相萃取柱(DIKMAProElutPXC150mg/6mL)，洗脱后，将洗脱液置于氮气下吹干，再采用2mL乙腈水溶液进行复溶，得到样品净化液；(4)将步骤(1)得到的含有内标的混合系列标准工作溶液和步骤(3)得到的样品净化液在相同条件下进行HPLC-MS/MS测定；(5)结果计算：由目标分析物峰面积和内标峰面积之比采用内标法进行定量。所述步骤(1)制备混合系列标准工作溶液的具体过程如下：配制浓度梯度为0.5，1，2，5，10，25ng/mL的混合标准工作溶液，每个浓度的混合标准工作溶液的内标1,7-庚二胺的浓度为10ng/mL；浓度梯度为0.5，1，2，5，10，25ng/mL的混合标准工作溶液中，腐胺、尸胺、组胺、酪胺、精胺、亚精胺、色胺七种生物胺的浓度分别均为0.5，1，2，5，10，25ng/mL(比如混合标准工作溶液梯度为0.5ng/mL时，混合标准工作溶液中腐胺、尸胺、组胺、酪胺、精胺、亚精胺、色胺七种生物胺的浓度分别均为0.5ng/mL)。HPLC-MS/MS测定的条件如下：色谱条件：选用亲水作用色谱柱，流速为0.2～0.5mL/min，进样量为5～10μL；分析时间为14min；柱温为40℃；流动相为A和B的混合体系，A为甲酸铵和甲酸的混合水溶液，其中甲酸与水的体积比为0.1:100，甲酸铵的含量15～25mmol/L；B为甲酸乙腈溶液，其中甲酸与乙腈的体积比为0.1:100；采用梯度洗脱，其中B在不同时间段的的体积百分比为：0～1min，95％；1～12min，95％～45％；12～14min，95％；质谱条件：离子源，电喷雾离子源(ESI)；扫描模式，正离子扫描；检测方式，多反应监测(MRM)；电喷雾电压，5500V；气帘气压力，0.124Mpa；辅助气1(N2)压力，0.379Mpa；辅助气2(N2)压力，0.345Mpa；离子源温度，600.00℃。所述步骤(3)中洗脱过程如下：用2mL甲酸水溶液和2mL甲醇依次淋洗后用10mL氨水甲醇溶液洗脱，其中甲酸水溶液中甲酸的体积分数为1～2％，氨水甲醇溶液中氨水(25wt％)的体积浓度为3％～7％。所述的亲水作用色谱柱为AgilentHilic柱，规格为：3.5μm；2.1mm×100mm。本专利技术产生的有益效果是：本专利技术先采用剑桥滤片对主流烟气进行捕集，应用固液萃取-串联固相萃取为前处理手段，采用高效液相色谱法-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定烟草中的七种生物胺(腐胺、尸胺、组胺、酪胺、精胺、亚精胺和色胺)。本专利技术与文献相比，建立了一种适合于测定卷烟主流烟气中生物胺的方法，建立的方法简单可靠，可以应用于卷烟主流烟气中生物胺的检测；该方法对样品分析简单便捷，检出限低、灵敏度高、重复性和回收率好。附图说明图1为标样中腐胺的MRM图；图2为标样中尸胺的MRM图；图3为标样中组胺的MRM图图4为标样中酪胺的MRM图图5为标样中精胺的MRM图图6为标样中亚精胺的MRM图；图7为标样中色胺的MRM图；图8为标样中内标1,7-庚二胺的MRM图。具体实施方式下将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例1一种烟草中生物胺的测定方法，包括以下步骤，(1)制备混合系列标准工作溶液：配制具有浓度梯度且含有内标的混合系列标准工作溶液；(2)样品前处理：将卷烟样品放置于22℃，相对湿度为60％的环境中平衡48h，然后选其平均重量在±0.02g范围和平均吸阻在±49Pa/支范围内的烟支作为测试烟支。采用转盘式吸烟机，按照每60秒抽吸一口，每口抽吸容量35ml，抽吸持续时间2s。用直径92mm的剑桥滤片捕集卷烟主流烟气总粒相物，每张滤片收集20支卷烟的总粒相物，取收集20支卷烟的总粒相物的1张滤片置于250mL锥形瓶中，准确加入30mL2vol％甲酸水溶液，超声萃取30分钟后。(3)固相萃取柱净化：将步骤(2)得到的萃取液取10mL过PCX阳离子交换固相萃取柱(DIKMAProElutPXC150mg/6mL)，用2mL甲酸水溶液(体积分数2％)和2mL甲醇依次淋洗后用10mL氨水甲醇溶液(氨水甲醇溶液中25wt％氨水的体积浓度本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种卷烟主流烟气中生物胺的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备混合系列标准工作溶液：配制具有浓度梯度且含有内标的混合系列标准工作溶液；（2）样品前处理：将捕集了卷烟主流烟气总粒相物的剑桥滤片加入到2%甲酸水溶液，超声萃取30分钟；（3）固相萃取柱净化：取步骤（2）得到的萃取液过混合型阳离子交换固相萃取柱，洗脱后，将洗脱液置于氮气下吹干，再采用2mL乙腈水溶液进行复溶，得到样品净化液；（4）将步骤（1）得到的含有内标的混合系列标准工作溶液和步骤（3）得到的样品净化液在相同条件下进行HPLC‑MS/MS测定；（5）结果计算：由目标分析物峰面积和内标峰面积之比采用内标法进行定量。

【技术特征摘要】
1.一种卷烟主流烟气中生物胺的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备混合系列标准工作溶液：配制具有浓度梯度且含有内标的混合系列标准工作溶液；（2）样品前处理：将捕集了卷烟主流烟气总粒相物的剑桥滤片加入到2%甲酸水溶液，超声萃取30分钟；（3）固相萃取柱净化：取步骤（2）得到的萃取液过混合型阳离子交换固相萃取柱，洗脱后，将洗脱液置于氮气下吹干，再采用2mL乙腈水溶液进行复溶，得到样品净化液；（4）将步骤（1）得到的含有内标的混合系列标准工作溶液和步骤（3）得到的样品净化液在相同条件下进行HPLC-MS/MS测定；（5）结果计算：由目标分析物峰面积和内标峰面积之比采用内标法进行定量。2.如权利要求1所述卷烟主流烟气中生物胺的测定方法，其特征在于，所述步骤（1）制备含有内标的混合系列标准工作溶液的具体过程如下：配制浓度梯度为0.5，1，2，5，10，25ng/mL的混合标准工作溶液，每个浓度的混合标准工作溶液的内标1,7-庚二胺的浓度为10ng/mL；浓度梯度为0.5，1，2，5，10，25ng/mL的含有内标的混合标准工作溶液中，腐胺、尸胺、组胺、酪胺、精胺、亚精胺、色胺七种生物胺的浓度分别均为0.5，1，2，5，10，25ng/mL。3.如权利要求1所述卷烟主流烟气中生物胺的测定方法，其特征在于，剑桥滤片捕集卷烟主流烟气总粒相物的方法如下：将烟支样品放置于21~23℃、相对湿度为58~62%的环境中平衡48~96h，采用转盘式吸烟机，按照每60秒抽吸一口，每口抽吸容量35ml...

【专利技术属性】
技术研发人员：付瑜锋，田海英，胡少东，于建春，王宏伟，段鹍，李耀光，王宝林，郝辉，王鹏飞，
申请(专利权)人：河南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：河南;41