【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种基于桥式PCR检测DNA羟甲基化的方法,其特征是:首先将不同扩增DNA羟甲基化位点的正反向引物固定到芯片或微球;其次,用β?葡萄糖基转移酶将DNA上所有5hmC进行糖基化,再用MspI酶进行酶切,发生羟甲基化的CCGG不能够被切开,未发生羟甲基化的CCGG能够被切开;然后,再以酶切后基因组DNA为模板与芯片进行杂交,并进行在片桥式PCR:?CCGG位点发生羟甲基化的因不能被酶切,而能够进行扩增;反之,CCGG位点未发生羟甲基化的因能被酶切,而不能进行扩增;最后,根据芯片不同矩阵点荧光的有无,判断出基因组DNA不同位置的CCGG是否发生了羟甲基化;???其中所述反向引物长为27bp:近5’端7个bp为T,近3’端20bp与每个CCGG位点的CGG后,包括CGG所在序列反向互补;反向扩增引物序列为CCGG被MspI酶切后CGG+的反向互补序列;正向引物长为20bp,且正向扩增引物序列为待检测CCGG?位点近5’端的125?bp处一段序列;相邻微阵列点间的距离设为80um。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:潘志强,曹君利,郝凌云,杨曦,李燕强,尹翠,张松,唐倩,
申请(专利权)人:徐州医学院,
类型:发明
国别省市:
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