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利用双荧光素酶报告基因检测启动子活性的方法技术

技术编号:9310787 阅读:565 留言:0更新日期:2013-11-06 14:29
本发明专利技术公开了一种利用双荧光素酶报告基因确定核心启动子的方法,包括以下步骤:步骤1:构建含7段不同长度MSTN基因5′调控区片段的pGL3-basic-MSTNpro重组体;步骤2:进行目标细胞的培养和铺板;配制步骤1所述pGL3-basic-MSTNpro与脂质体的混合物,用海肾荧光素酶载体pRL-TK为内参,进行细胞共转染;步骤3:用双荧光素酶报告基因进行荧光素酶活性检测。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种利用双荧光素酶报告基因检测启动子活性的方法,其特征在于:包括以下步骤:步骤1:根据牛MSTN基因5′调控区序列设计7组两端引物,以基因组DNA为模板,利用PCR反应进行扩增,获得7个不同长度MSTN基因5′调控区片段;对7个不同长度MSTN基因5′调控区片段进行酶切及纯化;再将7个不同长度MSTN基因5′调控区片段与所述的载体质粒的连接;然后筛选重组子;步骤2:进行目标细胞的培养和铺板;配制步骤1所述pGL3?basic?MSTNpro重组体与脂质体的混合物,以海肾荧光素酶载体pRL?TK为内参,扎克进行细胞转染;步骤3:用双荧光素酶报告基因进行荧光素酶活性检测;将步骤2所得的共转染后的细胞;经过培养后,进行收集;将所收集的细胞进行裂解;取20μl细胞裂解液于酶标板中,加入工作液,然后用发光仪进行测读。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:许厚强刘敏陈伟陈祥赵佳福
申请(专利权)人:贵州大学
类型:发明
国别省市:

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