高通量液相色谱法串联质谱法检测25羟基维生素D的方法技术

本发明专利技术实施例提供了一种高通量液相色谱法串联质谱法检测25羟基维生素D的方法，向人血清样品加入含有25羟基维生素D内标物的乙腈溶液进行蛋白沉淀；充分混匀后加入正己烷萃取溶剂；再充分混匀后离心，接着移取上清液并进行干燥后，加入复溶剂，得到待测样品；对待测样品用高通量液相色谱串联四级杆质谱仪进行检测；以25羟基维生素D2和/或25羟基维生素D3的相对保留时间和检测的定量离子对的丰度比为定性依据，采用内标标准曲线法定量。本发明专利技术实施例前处理简单，特异性、抗基质干扰能力强；检测时间短，通量高，检测精密度高，成本低廉。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种高通量液相色谱串联质谱法检测25羟基维生素D的方法，其特征在于，包括：（1）、向人血清样品加入含有25羟基维生素D内标物的乙腈溶液进行蛋白沉淀；充分混匀后加入正己烷萃取溶剂；充分混匀后离心，接着移取上清液并进行干燥后，加入复溶剂，得到待测样品；其中，所述人血清样品与所述乙腈溶液、正己烷萃取溶液的体积比为1：2：4；所述上清液与对应的原溶液的体积比为1：2；所述复溶液与人血清样品的体积比为1:2；（2）、对所述待测样品用液相色谱串联四级杆质谱仪进行检测；所述检测采用正离子模式，扫描方式采用多反应监测离子扫描MRM；其中，目标定量离子对包括25羟基维生素D2定量离子对，和25羟基维生素D3定量离子对；目标定量离子的多反应监测离子扫描MRM的条件包括：25羟基维生素D2的母离子的质/荷比为412.7～413.7，对应的子离子的质/荷比为394.8～395.8；25羟基维生素D3的母离子的质/荷比为400.7～401.7，对应的子离子的质/荷比为382.9～383.9；其中，所述液相色谱采用梯度模式洗脱，液相色谱条件包括：色谱柱：2.7um2.1mm×50C18；色谱柱柱温：55℃；进样量：20ul；流速：0.9ml/min；流动相：含0.1%甲酸的甲醇，以及，含0.1%甲酸的水；25羟基维生素D3的保留时间为2.60min，和/或，25羟基维生素D2的保留时间为2.80min；（3）、依据25羟基维生素D2和/或25羟基维生素D3的相对保留时间，以及，25羟基维生素D2定量离子对和/或25羟基维生素D3定量离子对的丰度比，判断25羟基维生素D2和/或25羟基维生素D3的存在；依据25羟基维生素D2和/或25羟基维生素D3与对应内标物在内标标准曲线上的峰面积比值，计算人血清样品中的25羟基维生素D2和/或25羟基维生素D3的含量。FDA00003366128000011.jpg...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵蓓蓓，程雅婷，董衡，梁晓翠，李卓阳，佘旭辉，文国学，陈静宜，李维，吴华顺，潘文敏，
申请(专利权)人：广州金域医学检验中心有限公司，
类型：发明
国别省市：