一种乙肝5项化学发光检测试剂盒制造技术

一种乙肝5项化学发光检测试剂盒，涉及一种用于乙肝检测的试剂盒。试剂盒，包括包被的微孔反应板、生物素标记物、碱性磷酸酶标记物、中和试剂、校准品、发光底物液和浓缩清洗液。分别制备链霉亲和素预包被反应板、校准品系列、生物素标记物、碱性磷酸酶标记物、中和试剂、发光底物液、浓缩清洗液，组装乙肝5项化学发光定量检测试剂盒。制备的乙肝5项化学发光检测试剂盒不仅可以灵敏检测出乙肝5项，并且可以对其进行精确的定量鉴定，价格便宜，操作简单，结果准确，环保无污染，具有长远的好处。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及一种用于乙肝检测的试剂盒，尤其是涉及一种采用酶标记生物素-链霉亲和素技术的乙肝5项化学发光检测试剂盒。
技术介绍
乙型肝炎(乙肝)是由乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus, HBV)感染引起的一种严重危害人们身体健康的传染病，据WHO报告，全世界HBV携带者约3.5亿人。我国是乙肝高发区，据统计，我国人群乙肝表面抗原(HBsAg)的检出率达10.09%，HBsAg携带者达1.2亿，男性高于女性(10.3%对7.29%)，农村高于城市(10.2%对7.9%)，总感染率高达35.5% 61.1%，其中慢性肝炎占56%。全球每年有一百万人死于肝衰或肝癌，乙肝已经成为全球第9位死亡原因。对于乙肝病毒的检测与预防是我国目前首要任务之一。乙肝5项，包括乙肝病毒表面抗原(Hepatitis B surface antigen, HBsAg)、乙肝病毒表面抗体(Hepatitis B surface antibody,抗HBs)、乙肝病毒 e 抗原(Hepatitis B eAntigen, HBeAg)、乙肝病毒e抗体(Hepatitis B e Antibody,抗HBe)以及乙肝病毒核心抗体(Hepatitis B core antibody,抗HBc)是目前最常用的乙肝检测手段。常用的方法检测出HBsAg阴性的人群中，有11.0%HBV-DNA呈阳性反应，也就是说，常规的检测方法可能有11.0%的漏检率，究其原因主要是由于抗原含量低于现行方法的可检出水平。另外，传统的检测方法只能提供定性结果，最高也只能进行滴度的分析，在临床使用上有一定的局限性，特别是在疗效观察和疫苗注射后抗体产生情况的观察上存在着明显的不足，故需要一种新的既灵敏快捷准确又不太昂贵的方法来填补这一缺陷。因此对于乙肝5项的定量研究变得尤为重要。目前，国内针对乙肝5项的定量检测大多采用国外进口试剂盒，价格昂贵，成本花费巨大，而我国人口 众多，对于乙肝5项检测的需求量很多，长期使用进口试剂盒不仅在经济上是高额的负担，也不利于大量的使用。
技术实现思路
本技术的目的是提供采用酶标记生物素-链霉亲和素技术的一种乙肝5项化学发光检测试剂盒。本技术包括包被的微孔反应板、生物素标记物、碱性磷酸酶标记物、中和试剂、校准品、发光底物液和浓缩清洗液。所述微孔反应板为包被有链霉亲和素的微孔板，所述微孔反应板的材料为聚苯乙烯；所述生物素标记物共有5种生物素标记物，分别为生物素标记的乙肝表面抗体、生物素标记的乙肝表面体原、生物素标记的乙肝e抗体1、生物素标记的乙肝e抗体2和生物素标记的乙肝核心抗原，所述生物素标记的乙肝e抗体I和生物素标记的乙肝e抗体2的分子成份相同，工作浓度不同，所述生物素标记的乙肝e抗体I用于乙肝e抗原检测，生物素标记的乙肝e抗体2用于乙肝e抗体检测；所述碱性磷酸酶标记物共有5种碱性磷酸酶标记物，分别为乙肝表面抗体碱性磷酸酶标记物、乙肝表面抗原碱性磷酸酶标记物，乙肝e抗体碱性磷酸酶标记物I，乙肝e抗体碱性磷酸酶标记物2和乙肝核心抗体碱性磷酸酶标记物，所述碱性磷酸酶标记的乙肝e抗体I和碱性磷酸酶标记的乙肝e抗体2的分子成份相同，工作浓度不同，所述碱性磷酸酶标记的乙肝e抗体I用乙肝e抗原检测，碱性磷酸酶标记的乙肝e抗体2用于乙肝e抗体检测；所述碱性磷酸酶标记物共有5种碱性磷酸酶标记物，分别为乙肝表面抗体碱性磷酸酶标记物、乙肝表面抗原碱性磷酸酶标记物、乙肝e抗体碱性磷酸酶标记物1、乙肝e抗体碱性磷酸酶标记物2和乙肝核心抗体碱性磷酸酶标记物，所述碱性磷酸酶标记的乙肝e抗体I和碱性磷酸酶标记的乙肝e抗体2的分子成份相同，工作浓度不同，所述碱性磷酸酶标记的乙肝e抗体I用于乙肝e抗原检测，碱性磷酸酶标记的乙肝e抗体2用于乙肝e抗体检测；所述中和试剂为中和试剂乙肝e抗原；所述校准品包括乙肝病毒表面抗原校准品、乙肝病毒表面抗体校准品、乙肝病毒e抗原校准品、乙肝病毒e抗体校准品和乙肝病毒核心抗体校准品共5种校准品，其中乙肝病毒表面抗原校准品的浓度包括 200ng/mL、100ng/mL、25ng/mL、2ng/mL、0.lng/mL、0ng/mL共6个浓度，乙肝病 毒表面抗体校准品的浓度包括1000mIU/mL、500mIU/mL、200mIU/mL、50mIU/mL、10mIU/mL、0mIU/mL共6个浓度，乙肝病毒e抗原校准品的浓度包括40NCU/mL、10NCU/mL、2NCU/mL、0.5NCU/mL、0.lNCU/mL、0NCU/mL 共 6 个浓度，乙肝病毒 e 抗体校准品的浓度包括 0.4NCU/mL、lNCU/mL、2.5NCU/mL、6NCU/mL、12NCU/mL、0NCU/mL 共 6 个浓度，乙肝病毒 c 抗体校准品的浓度包括 4.5NCU/mL、9NCU/mL、18NCU/mL、36NCU/mL、96NCU/mL、0NCU/mL共6个浓度；所述发光底物液为金刚烷胺衍生物csro。本技术可采用以下方法制备:I)制备链霉亲和素预包被反应板链霉亲和素用包被缓冲液稀释,取反应板,将稀释的链霉亲和素加入反应板中，预包被后，甩去包被缓冲液，再加入封板缓冲液，置37°c恒温放置2h，去掉封板缓冲液，烘干后，加干燥剂密封，得链霉亲和素预包被反应板；所述包被缓冲液为pH9.6、50mmol/L的Na2CO3-NaHCO3冲溶液，所述链霉亲和素稀释浓度为8 μ g/mL ;所述稀释的链霉亲和素的加入量可为每反应板150 μ L ;所述预包被的条件可置37°C恒温放置2h进行预包被；所述封板缓冲液的加入量可为每反应板加入150 μ L封板缓冲液；所述烘干的条件可于37°C干燥室烘干2h ;所述封板缓冲液为0.01mol/L TBS-T再加上1%BSA、0.2%明胶；所述干燥室的相对湿度度小于30% ；2)制备校准品系列(I)配制乙肝表面抗原校准品将高值乙肝表面抗原用校准品稀释液稀释，用国家标准品(购自中国生物制品检定所)重复标定3次，3次标定值，取均值作为标定的表面抗原乙肝表面抗原浓度，所述校准品稀释液由0.05mmol/L的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠、0.01mmol/L的氯化钠的1%的牛血清白蛋白及10%新生牛血清组成，pH值7.4，乙肝表面抗原作标准品浓度系列200ng/mL、100ng/mL、25ng/mL、2ng/mL、0.lng/mL、0ng/mL,分装成 0.5mL/ 瓶，2 8°C或一20°C存放备用；(2)配制乙肝表面抗体校准品同乙肝表面抗原的配制，其中校准品系列工作浓度为1000mIU/mL、500mIU/mL、200mIU/mL、50mIU/mL、10mIU/mL、0mIU/mL ；(3)配制乙肝e抗原校准品同乙肝表面抗原的配制，其中校准品系列工作浓度为40NCU/mL、10NCU/mL、2NCU/mL、0.5NCU/mL、0.lNCU/mL、ONCU/mL ；(4)配制乙肝e抗体校准品同乙肝表面抗原的配制，其中校准品系列工作浓度为0.4NCU/mL、INCU/mL、2.5NCU/mL、6NCU/mL、12NCU/mL、0NCU/mL ；( 5 )配制乙肝c抗体校准品同乙肝表面抗 原的配制，其中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种乙肝5项化学发光检测试剂盒，其特征在于包括包被的微孔反应板、生物素标记物、碱性磷酸酶标记物、中和试剂、校准品、发光底物液和浓缩清洗液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈巧钦，严小莉，蔡雅铨，徐镜波，杨家丽，张长弓，
申请(专利权)人：厦门市波生生物技术有限公司，
类型：实用新型
国别省市：