【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物菌种的诱变选育
，特别涉及一种原生质体亚硝基胍诱变选育虫草素高产菌株的方法，依据此方法可以选育获得高产虫草素的菌株。
技术介绍
蛹虫草(Cbr办ce/75. i7iiari5.),又名蛹草、北冬虫夏草、北虫草，为子囊菌亚门、核菌纲、麦角菌目、麦角菌科、冬虫夏草属真菌,是蛹草拟青霉7 omycesmilitarist的有性型，其功效与冬虫夏草类似，在药化、药理和临床试验中证明与冬虫夏草十分相似，在功能食品、医药和生物学技术方面有很好的实用价值。蛹虫草作为新资源食品和中药新药(中药国药准字Z20030034/35)已获卫生部和国家食品药品监督管理局批准进入市场，在日本、韩国等已将蛹虫草作为冬虫夏草的代用品应用于药品、保健食品的开发。蛹虫草中的药效成分主要有虫草素、腺苷、虫草酸、多糖等，同时含有多种人体必需氨基酸和微量元素。虫草素(Cordyc印in)即3’ -脱氧腺苷，又称虫草菌素、蛹虫草菌素。它是第一个从真菌中分离出来的核苷类抗菌素，是蛹虫草以腺苷为直接前体合成的一种重要次生代谢产物。虫草素的分子式为CltlH13N5O3，分子量为251...
【技术保护点】
一种提高蛹虫草虫草素含量的原生质体诱变选育方法，包括以下步骤：（1）菌株活化培养；（2）菌株菌丝固体培养；（3）液体菌丝体培养；（4）菌丝体酶解；（5）原生质体亚硝基胍（NTG）诱变；（6）原生质体再生培养；（7）再生菌继代培养；（8）发酵培养；（9）过滤得到菌丝体；（10）遗传稳定性测定；其特征在于：（1）菌株活化培养?将实验室保藏的蛹虫草菌株转接到PDA固体斜面培养基进行活化培养，23?26℃恒温静置培养4～5d；按照如上方法菌株活化2次；PDA固体斜面培养基同菌丝固体平板培养基，其配方为：马铃薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨3g，KH2PO4?2g，MgS04?7H2...
【技术特征摘要】
1.一种提高蛹虫草虫草素含量的原生质体诱变选育方法，包括以下步骤:(1)菌株活化培养；(2)菌株菌丝固体培养；(3)液体菌丝体培养；(4)菌丝体酶解；(5)原生质体亚硝基胍(NTG)诱变；(6)原生质体再生培养；(7)再生菌继代培养；(8)发酵培养；(9)过滤得到菌丝体；(10)遗传稳定性测定； 其特征在于: (O菌株活化培养将实验室保藏的蛹虫草菌株转接到PDA固体斜面培养基进行活化培养,23-26°C恒温静置培养4 5d ;按照如上方法菌株活化2次；PDA固体斜面培养基同菌丝固体平板培养基，其配方为:马铃薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨3g，KH2P04 2g，MgS04_7H20lg，琼脂粉 15g，水 1000 11^邛册.8，1211:灭菌201^11 ； (2)菌株菌丝固体培养从活化好的斜面试管上刮取培养好的菌丝体接种于蛹虫草菌丝固体平板培养基中，23-26°C恒温静置培养6 8d ;菌丝培养好后，用于接种液体培养基; (3)液体菌丝体培养从培养好的菌丝固体平板培养基上取菌丝块接种到装有30mL菌丝培养基的250mL锥形瓶中，23-26°C，160 r/min进行恒温震荡培养2_3d ； 菌丝液体培养基配方:葡萄糖30g、蛋白胨8g、(NH4)2SO4 6g、KH2PO4 1.6g、MgS04_7H200.5g、FeS04-7H20 0.03g、酵母粉 4g，加水定容至 1L，pH 6.8，121°C灭菌 20min ; (4)菌丝体酶解a.原生质体制备:将MgS(V 7H20、甘露醇溶解于双蒸水中配制成浓度为0.6 mol/L的渗透压稳定剂溶液，高压灭菌后备用； b.配制裂解酶液:分别称取蜗牛酶及纤维素酶，溶解于0.6mol/L的渗透压稳定剂中，使两种酶的浓度分别达到0.6%和1.2%(ff/V),0.22nm微孔滤膜过滤除菌，然后按照2:1的体积比混合备用；培养好的菌丝体无菌滤纸过滤，并置于无菌离心管中，用以上渗透压稳定溶液洗涤3次，将多余的水分用无菌滤纸吸干，按照每IOOmg制备好的湿菌丝对应加入1.5mL酶液的比例，向菌丝体中加入酶液并置于26°C摇床上50r/min缓缓震荡孵育2_4h，中间用移液枪轻轻吹打悬浮；酶解后用无菌棉花柱过滤除去菌丝，滤液3000-4000r/min离心5-8min，温和地沉淀原生质体，弃去上清，将原生质体悬于渗透压稳定剂中并适当稀释备用； (5)原生质体亚硝基胍NTG诱变用丙酮试剂将亚硝基胍溶液配制成终浓度为2mg/mL ;取I mL NTG处理液与稀释成一定浓度的I mL原生质体悬液混合,于旋转式摇床,转速80r/min, 26°C处理10_60min后，将处理液3000-4000r/min...
【专利技术属性】
技术研发人员：高兆建，杨杰，闫军，
申请(专利权)人：徐州鸿宇农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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