一种从蛹虫草培养液中提取纯化虫草素的方法技术

本发明专利技术提供一种从蛹虫草培养液中提取纯化虫草素的方法，步骤为：取蛹虫草培养液为原料，离心或过滤，上清液旋蒸浓缩；将浓缩液上大孔树脂柱，依次使用水、乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩；置于低温结晶。本发明专利技术从液体培养基，通过大孔树脂提取，采用水、乙醇溶剂洗脱，整个过程中无严重污染物，也无废液处理问题；通过本发明专利技术的三步提取方法，相比现有技术中工艺复杂的提取方式生产成本低、工艺简单，易于批量生产。本发明专利技术生成的虫草素白色针状或结晶状，纯度较高能达到95%以上，相比于现有技术大部分只能达到90%有显著的提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种提取纯化虫草素的方法，属于药用真菌有效成分分离领域。
技术介绍
蛹虫草Cordycepsmilitaris(L.)Link又名北虫草、北冬虫夏草，属于麦角菌科虫草属，是世界性广布种。蛹虫草代谢产物含有多种活性化合物，如虫草素、腺苷类、虫草多糖、甘露醇、SOD酶和麦角甾醇等，具有多种生物活性，包括抗肿瘤等。虫草素是蛹虫草主要有效成分，为针状或片叶状结晶，化学名称为3’-脱氧腺苷，分子式为C10H13O3N5，分子量为251.9Da，熔点为225~26℃。虫草素是第一个从真菌中分离出来的核苷类抗菌素，在259nm有最大吸收，具有抗肿瘤、抗菌抗病毒、免疫调节、清除自由基等多种药理作用外，还有良好的临床应用前景。目前美国将虫草素作为治疗白血病药物的研究已经进入II期临床。由于受原料、纯化过程等因素的影响，其价格一直居高不下，成为虫草素开发利用的瓶颈。因此研究虫草素的提取制备工艺具有重要的经济价值和广阔的市场应用潜力。现有专利CN101508715A公开了一种蛹虫草中虫草素提取纯化方法，包括:将蛹虫草原料粉碎后以料水比1∶20比例加水混合，进行超声波提取，将提取液离心过滤上大孔树脂柱，吸附流速1.8BV/HR；以15%甲醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱，用旋转蒸发器在温度60℃下减压浓缩洗脱液，制得蛹虫草虫草素浓缩物。本专利技术可以实现蛹虫草原料中的虫草素在低温条件下水溶液提取，提取率达到85%；利用大孔树脂分离纯化后可去除提取物中的多糖和蛋白成分，使提取物中的虫草素含量达到10%。此专利采用甲醇作为溶剂生成虫草素，由于甲醇有剧毒，对于生产工人及环境存在极大的危害。
技术实现思路
1、本专利技术的目的。本专利技术为了解决现有技术中提取过程中采用的溶剂对环境和人工产生严重危害，且提取工艺复杂，产生虫草素纯度不够高的问题，而提出一种从蛹虫草培养液中提取纯化虫草素的方法。2、本专利技术所采用的技术方案。本专利技术提出的从蛹虫草液体培养基中提取纯化虫草素的方法，按照如下步骤进行：（1）取蛹虫草培养液为原料，离心或过滤，上清液旋蒸浓缩；（2）将浓缩液上大孔树脂柱，依次使用水、乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩；（3）置于低温结晶的虫草素。更进一步的具体实施例中，所述的步骤（2）中的大孔树脂柱填料包括D101、HP-20、AB-8、XAD。更进一步的具体实施例中，所述的步骤（2）中的使用水、乙醇洗脱，乙醇包括浓度为5%-60%低浓度乙醇或95%以上的高浓度乙醇。更进一步的具体实施例中，所述的步骤（2）中的收集乙醇洗脱液是指浓度为5%-60%低浓度乙醇。更进一步的具体实施例中，所述的步骤（2）中的低温为小于等于。3、本专利技术的有益效果。（1）通过本专利技术的三步提取方法，相比现有技术中工艺复杂的提取方式生产成本低、工艺简单，易于批量生产。（2）本专利技术从液体培养基，通过大孔树脂提取，采用水、乙醇溶剂洗脱，整个过程中无严重污染物，也无废液处理问题。（3）本专利技术生成的虫草素白色针状或结晶状，纯度较高能达到99%以上，相比于现有技术大部分只能达到90%有显著的提高。具体实施方式为了使专利局的审查员尤其是公众能够更加清楚地理解本专利技术的技术实质和有益效果，申请人将在下面以实施例的方式作详细说明，但是对实施例的描述均不是对本专利技术方案的限制，任何依据本专利技术构思所作出的仅仅为形式上的而非实质性的等效变换都应视为本专利技术的技术方案范畴。实施例下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明：实施例1一种从蛹虫草培养液中分离纯化虫草素的方法,包括以下步骤:（1）获得500ml蛹虫草培养液，将培养液离心过滤，7500rpm离心10min，收集上清液，旋蒸浓缩至10ml。（2）使用培养液浓缩液上大孔树脂柱HP-20，柱体积100ml，洗脱溶剂依次是水、15%乙醇、95%乙醇，流速3ml/min，洗脱溶剂体积水300ml（30ml/管，10管）、15%乙醇450ml（30ml/管，15管）、95%乙醇400ml（收集在一起）。对接收的洗脱液HPLC检测，结果表明虫草素集中在15%乙醇洗脱液中，纯度高于90%。收集15%乙醇洗脱液，旋蒸浓缩至10ml。（3）将(2)的浓缩液置于4℃冰箱过夜，获得虫草素结晶。为保障虫草素纯度，将上清液吸出，置换成纯水，4℃冰箱过夜重结晶，获得55mg针状虫草素结晶，核磁验证为虫草素。实施例2一种从蛹虫草培养液中分离纯化虫草素的方法，包括以下步骤：（1）获得1L蛹虫草培养液，将培养液使用滤纸抽滤，然后旋蒸浓缩至20ml。（2）使用培养液浓缩液上大孔树脂柱D101，柱体积500ml，洗脱溶剂依次是水、10%乙醇、95%乙醇，流速10ml/min，洗脱溶剂体积水2L（200ml/瓶，10瓶）、10%乙醇2.4L（200ml/瓶，12瓶）、95%乙醇1L（收集在一起）。对接收的洗脱溶剂HPLC检测，结果表明虫草素集中在10%乙醇洗脱液中，纯度高于90%。收集10%乙醇洗脱液，旋蒸浓缩至10ml。（3）将(2)的浓缩液置于4℃冰箱过夜，获得虫草素结晶。为保障虫草素纯度，将上清液吸出，置换成纯水，4℃冰箱过夜重结晶，获得130mg针状虫草素结晶，核磁验证为虫草素。虫草素HPLC检测方法：鉴定虫草素浓度的色谱条件为：色谱柱4.6mm×250mm，5μm，流动相为甲醇（A）：水（B）=15:85，流速为0.5mL/min，进样量为10μL，紫外检测波长为259nm，柱温30℃。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从蛹虫草液体培养基中提取纯化虫草素的方法，其特征在于，步骤如下：（1）取蛹虫草培养液为原料，离心或过滤，上清液旋蒸浓缩；（2）将浓缩液上大孔树脂柱，依次使用水、乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩；（3）置于低温结晶的虫草素。

【技术特征摘要】
1.一种从蛹虫草液体培养基中提取纯化虫草素的方法，其特征在于，步骤如下：
（1）取蛹虫草培养液为原料，离心或过滤，上清液旋蒸浓缩；
（2）将浓缩液上大孔树脂柱，依次使用水、乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩；
（3）置于低温结晶的虫草素。
2.根据权利要求1所述的一种从蛹虫草培养液中提取纯化虫草素的方法，其特征在于：所述的步骤（2）中的大孔树脂柱填料包括D101、HP-20、AB-8、XAD。
3.根据权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨智钧，王锦锦，吕爱平，卞兆祥，
申请(专利权)人：常熟浸大科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32