曲霉属菌株与内切壳聚糖酶的编码基因、制备与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种内切壳聚糖酶CsnW2的基因序列及其制备方法与应用。本发明专利技术所涉及的内切壳聚糖酶CsnW2来源土壤新分离菌株Aspergillus?clavatus。本发明专利技术还提供了一种制备该新型壳聚糖酶的方法，即利用基因工程的技术方法，将该新壳聚糖酶的基因克隆到毕赤酵母表达载体上，获得可异源表达该酶的毕赤酵母重组菌株，用该菌株异源表达制备的壳聚糖酶CsnW2在pH3.5-5.0和40℃-60℃下有较高活性，具有降解壳聚糖制备壳寡糖的功能。本发明专利技术提供的壳聚糖酶CsnW2可广泛应用于化工、农业、食品、饲料添加和医药等领域，具有较大的生产潜力和经济价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种内切壳聚糖酶CsnW2的基因序列及其制备方法和应用。本专利技术还提供了该内切壳聚糖酶的重组质粒和重组基因工程菌株。本专利技术的内切壳聚糖酶CsnW2可广泛应用于化工、农业、食品、饲料添加及医药等领域。
技术介绍
壳聚糖(chitosan)，又名聚氨基葡萄糖、壳多糖、脱乙酰甲壳素、脱乙酰甲壳质、可溶性几丁质、壳糖胺、甲壳多聚糖和聚甲壳糖等，化学名为聚β - (I — 4) -2-氨基-2-脱氧-D-葡萄糖。壳聚糖是几丁质经过脱乙 酰基得到的产物，一般几丁质的脱乙酰度超过50%时被认为是壳聚糖。壳聚糖广泛存在于虾、蟹、昆虫外壳以及藻类和菌类的细胞壁中。由于其分子量较大，水溶性差，使其广泛应用受到了很大限制。但其降解产物，一系列壳寡糖和氨基葡萄糖具有独特的生理活性和功能性质，如调节免疫、抗肿瘤、抗菌、降低胆固醇和促进钙的吸收，且易溶于水，是一种新兴的功能性低聚糖，在食品、医药、农业和化妆品等领域有广泛的应用。目前，制备壳寡糖的方法主要有化学法、物理法和生物法。但化学条件苛刻，反应的稳定性和重复性差，产物聚合度不易控制，污染严重，不易得到聚合度相对均一的低聚壳寡糖。物理法本文档来自技高网...

【技术保护点】
曲霉属的菌株，其为棒曲霉W?2，分类命名：棒曲霉Aspergillus?clavatus，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号：CGMCC?NO.7018，保藏日期2012年12月18日。

【技术特征摘要】
1.曲霉属的菌株，其为棒曲霉W-2,分类命名:棒曲霉Aspergillusclavatus,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址:北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号=CGMCC N0.7018，保藏日期2012年12月18日。2.—种来源于权利要求1所述菌株(Aspergillus clavatus)的内切壳聚糖酶基因csnW2，其核苷酸序列具有如下特征之一: 1)具有序列表中SEQID N0.1的核糖核酸(RNA)序列或SEQ ID N0.2的脱氧核糖核酸(DNA)序列； 2)编码SEQID N0.3氨基酸序列的脱氧核糖核酸(DNA)序列； 3)具有与序列表中SEQID N0.2所限定的脱氧核糖核酸(DNA)序列的同源性达到90%及以上，且能编码降解壳聚糖的蛋白质的脱氧核糖核酸(DNA)序列。3.按照权利要求2所述的内切壳聚糖酶基因编码的内切壳聚糖酶，其编码的氨基酸序列具有如下特征之一: 1)序列表中SEQID N0.3从氨基端开始的第1_262或第18-262位氨基酸残基序列； 2)将序列表中的SEQID N0.3从氨基端开始的第1-262或18-262位氨基酸残基序列经过氨基酸残基的取代、缺失、添加中的一种或二种以上后，具有降解壳聚糖活性的蛋白质； 3)与序列表中SEQID N0.3所限定的氨基酸序列的同源性达到90%及以上且具有降解壳聚糖活性的蛋白质。4.一种制备如权利要求3所述的内切壳聚糖酶的方法，其特征在于:是将权利要求2所述的内切壳聚糖酶基因克隆入重组表达载体，导入宿主细胞，获得重组表达的内切壳聚糖酶； 所述的重组表达内切壳聚糖酶的表达载体，是指大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、枯草杆菌表达载体、乳酸菌表达载体...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜昱光，张建平，曹海龙，岳敏，黄李淑馨，李曙光，赵勇，刘航，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：