基于纳米颗粒的肿瘤靶向药物递送制造技术

本发明专利技术提供包含脂质体纳米颗粒的水性分散体的水性肿瘤靶向性脂质体纳米颗粒组合物。所述纳米颗粒优选包封抗癌化疗剂，可将其加至预形成的脂质体组合物或者可在脂质体形成期间掺入脂质体内。脂质体纳米颗粒包含与一种或更多种其它形成胶束或小泡的脂质材料混合的legumain靶向性脂质，所述组合物呈分散在水性载体中的纳米颗粒脂质体形式。优选的肿瘤靶向性脂质体纳米颗粒组合物包含(a)legumain靶向性脂质组分，(b)两性离子脂质组分；(c)氨基取代的脂质组分；(d)中性脂质组分；和(e)聚乙二醇-缀合的脂质组分。所述legumain靶向性脂质组分包含与legumain-结合部分共价连接的疏水脂质部分。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基于纳米颗粒的肿瘤靶向药物递送相关申请的交叉引用 本申请要求2010年9月2日提交的美国临时专利申请序列号61/402，686的权益，其通过引用完全结合到本文中。政府支持 本专利技术在政府支持下进行，政府支持来自美国政府国立卫生研究院，授予号5 ROlCA134364-01A和国立心、肺和血液研究所培训授予号T32HL007195。背景 配体靶向已成为纳米颗粒(NP)介导的药物递送的主要进展，实现高局部浓度和低全身暴露，减少药物毒性同时维持对靶细胞的最佳剂量递送。用抗体和归巢肽(homingpeptide)对于这种策略建立观念的证据，所述抗体和归巢肽结合由肿瘤脉管系统过度表达的粘附受体(包括整联蛋白和HER-2)和肿瘤细胞上的叶酸细胞表面受体。与配体靶向有关的问题包括受体饱和、低受体-配体亲和力、有限的组织渗透和实体瘤的遗传异质性。Legumain是由多种肿瘤细胞过度表达的天冬酰胺酰基内肽酶。因此,Iegumain为将治疗剂引导至肿瘤细胞提供方便的靶标。本专利技术的组合物和方法解决与配体靶向有关的问题，同时为肿瘤特异性药物递送提供有效的方法。专利技术概述 本专利技术提供水性肿瘤靶向性脂质体纳米颗粒组合物，其包含任选包封抗癌化疗剂的脂质体纳米颗粒的水性分散体。本专利技术的水性肿瘤靶向性脂质体纳米颗粒组合物包含Iegumain祀向性脂质,其与一种或更多种其它形成胶束或小泡的脂质材料混合,所述组合物呈纳米颗粒脂质体分散体形式，任选将抗癌化疗剂包封在脂质体纳米颗粒内。Iegumain革巴向性脂质组分包含与Iegumain-结合部分共价连接的疏水脂质部分。可在纳米颗粒制备期间将抗癌化疗剂包封在脂质体纳米颗粒内，或者可预先形成纳米颗粒然后负载化疗剂。优选的水性肿瘤靶向性脂质体纳米颗粒组合物包含(a) Iegumain靶向性脂质组分，(b)两性离子脂质组分；(C)氨基取代的脂质组分；(d)中性脂质组分；和(e)作为纳米颗粒脂质体分散在水性载体(例如生理学上可耐受的缓冲剂，其可包括各种生理学上可接受的赋形剂和常用于药物制剂中的辅剂)中的聚乙二醇缀合的脂质组分。Iegumain靶向性脂质组分包含与Iegumain-结合部分共价连接的疏水脂质部分。Iegumain-结合部分可以是与Iegumain选择性形成稳定复合物或共价键的任何材料。优选的Iegumain革巴向部分是Iegumain的氮杂-Asn迈克尔受体型(Michaelacceptor-type)抑制剂。优选的Iegumain祀向性脂质组分包含与磷脂结合的氮杂-Asn迈克尔受体Iegumain抑制剂。例如，称为RR-1la的抑制剂可与合适的脂质结合，如显示于附图说明图1，(a)区。在一些优选实施方案中，Iegumain靶向性脂质组分包含与1，2_二酰基甘油-磷酸烧醇胺基，比如1，2- 二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DOPE)共价连接的Iegumain-结合部分。优选的两性离子脂质组分 (b)包含1，2- 二酰基甘油-磷酸胆碱化合物，比如1，2- 二- (9Z-十八烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DOPC)。优选的氨基取代的脂质组分(C)包含1，2- 二酰基甘油-磷酸烷醇胺化合物，比如DOPE。优选的中性脂质组分(d)包含胆固醇。优选的聚乙二醇-缀合的脂质组分(e)包含聚乙二醇-缀合的1，2_ 二酰基甘油-磷酸烷醇胺化合物比如1，2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇]，其中化合物的聚乙二醇部分具有约2000个原子质量单位(amu)的平均分子量。在一个优选实施方案中，组分(a)、(b)、(c)、(d)和(e)以约1.1:6.7:6.7:2.2:1的(a): (b): (c): (d): (e)摩尔比存在于脂质体纳米颗粒中。优选脂质体纳米颗粒组合物包封抗癌化疗剂，例如多柔比星，1-[2_氰基-3-，12- 二氧代齐墩果-1，9(11)-二烯-28-酰基]咪唑(也称为⑶DO-1m)，或任何其它已知的抗癌化疗剂。本专利技术的组合物特别适合用于治疗表达Iegumain的肿瘤。本专利技术的方法方面包含给予需要癌症治疗的患者有效量的包封在本专利技术组合物的脂质体纳米颗粒内的抗癌化疗剂。附图简述 图1说明Iegumain-祀向纳米颗粒(NP)的制备和鉴定。(a)区说明RR-1la缀合至1，2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DOPE)。(b)区提供证明肿瘤缺氧的荧光显微镜图像(标度条，100 ym)。(c)区提供特异性结合相对于抗体浓度的图，证明抗小鼠单克隆抗体(mAb)对细胞膜表达的Iegumain的亲和力，如通过Scatchard分析测定的。(d)区提供对于与CoCl2培养约24小时，然后将非靶向纳米颗粒(非靶向)或RR-1la-靶向纳米颗粒(靶向)NP加至细胞的鼠4T1和4T07乳腺癌和CT26结肠癌细胞，罗丹明阳性细胞相对于时间的图(n = 3孔/组；数据表示均值土 s.e.m)。(e)区提供荧光显微镜图像，其显现用本专利技术的靶向(顶行)和非靶向(底行)NP处理的小鼠的肿瘤、肝、脾和肾细胞的NP分布，如通过罗丹明B荧光表示的(n = 2只小鼠/组；标度条，100 u m)。图2证明祀向Iegumain增强PEG-脂质体_包封的多柔比星的摄取和改善NP-介导的药物递送至原发性乳腺肿瘤。(a)区提供平均荧光强度(MFI)相对于时间的图，其中将4T1和4T07细胞与CoCl2培养约24小时然后与负载多柔比星的靶向纳米颗粒组合物(本文称为RDZ-218)、负载多柔比星的非靶向NP (NP-Dox)或者游离多柔比星(游离Dox)培养指定的时间，接着通过流式细胞分析测定多柔比星的平均荧光强度(MFI)(对于每个时间点，n = 3孔/组；数据表示均值土 s.e.m)。(b)区提供显示药物摄取浓度的百分比条形图，该浓度通过比较RDZ-218、NP-Dox和游离Dox-处理的细胞的MFI与连续稀释的多柔比星的MFI而测定。(c)区提供比较死亡4T1和4T07细胞的相对百分比的条形图，所述细胞用对照(无处理)、游离Dox, NP-Dox、游离RR-lla, NP-RRlla (无多柔比星)和RDZ-218处理，在处理后约24小时，所述相对百分比通过分析流式细胞术的前向和侧向散点图确定(显示相对于未处理细胞(对照)的数据；n = 3孔/组；数据表示均值土 s.e.m.*p〈0.05，**P<0.005)。(d)区提供雌性BLAB/c小鼠的肿瘤(顶行)、肝(中间行)和心(底行)细胞的荧光显微镜图像，其中将4T07细胞注入腹股沟的乳房脂肪垫；让肿瘤建立约5天(d)，达到约500 mm3的大小，然后将RDZ-218、NP-Dox或游离Dox 1.v.注射(2次)给小鼠；最后一次注射后约24小时将小鼠处死，分离组织，立即通过荧光显微镜分析以检测多柔比星的分布；组织切片还用DAPI染色使细胞核显现(η = 2只小鼠/组；标度条，100 μ m)。图3证明用RDZ-218治疗性处理4T07荷瘤小鼠，对于以3天间隔5次1.V.注射RDZ-218、NP-Dox、游离多柔比星(游离Dox)、空RR-1la-缀合的NP (NP-RR-1la)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)处理本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.09.02 US 61/402,686;2011.09.02 US 13/224,3991.一种水性肿瘤靶向性脂质体纳米颗粒组合物，其包含与一种或更多种其它形成胶束或小泡的脂质材料混合的Iegumain靶向性脂质，所述组合物呈分散在水性载体中的脂质体纳米颗粒形式，并且任选包封抗肿瘤化疗剂在脂质体纳米颗粒内；legumain祀向性脂质组分包含与Iegumain-结合部分共价连接的疏水脂质部分。2.一种水性肿瘤靶向性脂质体纳米颗粒组合物，其包含任选包封抗癌化疗剂的脂质体纳米颗粒的水性分散体；所述脂质体纳米颗粒包含(a) Iegumain祀向性脂质组分，(b)两性离子脂质组分；(C)氨基取代的脂质组分；(d)中性脂质组分；和(e)聚乙二醇-缀合的脂质组分；所述Iegumain祀向性脂质组分包含与Iegumain-结合部分共价连接的疏水脂质部分。3.权利要求1和2中任一项的组合物，其中所述Iegumain靶向性脂质组分包含与I, 2- 二酰基甘油-磷酸烧醇胺基团共价连接的Iegumain-结合部分。4.权利要求3的组合物，其中所述1，2-二酰基甘油-磷酸烷醇胺是1，2- 二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DOPE)。5.权利要求1至4中任一项的组合物,其中所述Iegumain-结合部分包含氮杂-Asn迈克尔受体型Iegumain抑制剂。6.权利要求1至5中任一项的组合物,其中所述Iegumain-结合部分包含由式(I)代表的基团:7.权利要求1至6中任一项的组合物,其中所述Iegumain祀向性脂质组分包含式(II)化合物:8.权利要求2至7中任一项的组合物，其中所述两性离子脂质组分(b)包含1，2-二酰基甘油-磷酸胆碱化合物。9.权利要求8的组合物，其中所述1，2_二酰基甘油-磷酸胆碱化合物包含.1，2- 二- (9Z-十八烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DOPC)。10.权利要求2至9中任一项的组合物，其中所述氨基取代的脂质组分(c)包含.1，2- 二酰基甘油-磷酸烷醇胺化合物。11.权利要求10的组合物，其中所述1，2-二酰基甘油-磷酸烷醇胺化合物包含DOPE。12.权利要求2至11中任一项的组合物，其中所述中性脂质组分(d)包含胆固醇。13.权利要求2至12中任一项的组合物，其中所述聚乙二醇-缀合的脂质组分(e)包含聚乙二醇-缀合的1，2- 二酰基甘油-磷酸烷醇胺化合物。14.权利要求13的组合物，其中所述聚乙二醇-缀合的1，2-二酰基甘油-磷酸烷醇胺化合物包含1，2- 二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇]，其中化合物的聚乙二醇部分具有约2000个原子质量单位(amu)的平均分子量。15.权利要求2至14中任一项的组合物，其中所述组分(a)、(b)、(C)、(d)和(e)以约1.1:6.7:6.7:2.2:1的(a): (b): (c): (d): (e)摩尔比存在于脂质体纳米颗粒中。16.权利要求1至15中任一项的组合物，其中所述脂质体纳米颗粒组合物包封抗癌化疗剂。17.权利要求16的组合物，其中所述抗癌化疗剂包含多柔比星或1-[2_氰基-3-，12- 二氧代齐墩果-1，9(11)- 二烯-28-酰基]咪唑(CDDO-1m)。18.权利要求16的组合物，其中所述抗癌化疗剂包含至少一种选自下列的化合物:顺钼；卡钼；奥沙利钼；双氯乙基甲胺；环磷酰胺；苯丁酸氮芥；异环磷酰胺；5_氟脲嘧啶；氟尿苷；阿糖胞苷；巯基嘌呤；硫鸟嘌呤；硫唑嘌呤；氟达拉滨；喷司他丁 ；克拉屈滨；依托泊苷；磷酸依托泊苷；替尼泊苷；安吖啶；紫杉醇；甲氨蝶呤；甲氧苄啶，乙胺嘧啶；培美曲塞；vitaxin ;anecorvate,血管他丁 ；内皮他丁 ；角S胺；抗血管生成色氨酰_t_RNA合成酶肽片段；贝伐单抗；tivozanib ;凡德他尼；伐他拉尼；阿仑单抗；西妥昔单抗；吉姆单抗；替伊莫单抗；帕尼单抗；利妥昔单抗；托西莫单抗；曲妥单抗；放线菌素；博来霉素；普卡霉素；丝裂霉素；多柔比星；表柔比星；柔红霉素；戊柔比星；伊达比星；熊果酸；2-氰基-3，12- 二氧代齐墩果-1，9- 二烯-28-酸酯，2-氰基-3，12- 二氧代齐墩果_1，9- 二烯-28-酸酰胺；1-[2-氰基-3-，12-二氧代齐墩果-1,9(11)-二烯-28-酰基]咪唑(也称为⑶DO-1m));及其生理学上可接受的盐和前药。19.权利要求16的组合物，其中所述脂质体纳米颗粒组合物包封抗肿瘤剂。20.权利要求19的组合物，其中所述抗肿瘤剂是涉及肿瘤...

【专利技术属性】
技术研发人员：RA赖斯菲尔德，R向，Y罗，D廖，Z刘，T陈，S陈，D卢，
申请(专利权)人：斯克里普斯研究学院，
类型：
国别省市：