【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分析化学领域，涉及苯和甲苯代谢产物的分析，特别涉及液相色谱串联质谱技术分析尿液中苯和甲苯四种代谢产物(即反，反粘康酸、1，2-苯二酚、苯巯基尿酸和N-乙酰基卞基半胱氨酸)的方法，该分析方法快速、灵敏，准确度高。
技术介绍
苯和甲苯均为使用非常广泛的化工原料和有机溶剂，由于其具有挥发性，所以在大气以及环境中无处不在。国际癌症研究会(IRAC)已经证明，苯是一种致癌性化合物，长期暴露于苯环境中，会引发白血病、再生性障碍性贫血以及染色体异常等疾病；而甲苯的毒性虽略低于甲苯，但也对中枢神经系统有强烈的毒副作用。除了一些职业场所暴露外，如油漆厂、石化炼油厂、制鞋厂等外，苯、甲苯在我们日常生活中的暴露源主要来自室内装修材料、家具、油漆以及汽车尾气等。因此监测一些职业暴露场所以及普通人群体内的苯、甲苯暴露水平，既预估其面临的环境风险值，也可以用于其健康效应的早期评价。苯有三条不同的代谢途径。苯进入体内，经P450酶催化，转化为苯酚、1，2-苯酚、反，反-粘康酸以及苯巯基尿酸等代谢产物，最终随尿排出体外。反，反-粘康酸是以往研究中使用最多的一种指示苯暴露水平的生物标志物。但由于反，反-粘康酸同时也是一种食品添加剂-山梨酸的代谢产物，因此仅仅用反，反-粘康酸的浓度水平来评价苯的暴露水平是不科学的。最近，苯巯基尿酸也被用于指示苯的环境暴露。甲苯也有不同的代谢途径，绝大多数的甲苯代谢为马尿酸以及各种甲基马尿酸，只有约1%的甲苯代谢为N-乙酰基卞基半胱氨酸。但马尿酸也是尿的内源性代谢产物，因此不是甲苯的特异性生物标志物。而N-乙酰基卞基半胱氨酸自1993年来首次被...
【技术保护点】
一种液相色谱串联质谱分析尿液中苯和甲苯四种代谢产物的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）选取反,反粘康酸、1,2?苯二酚、苯巯基尿酸和N?乙酰基卞基半胱氨酸作为苯和甲苯的特征代谢产物；配制含有上述四种特征代谢产物的单一标准品储备溶液、含有上述四种特征代谢产物同位素内标物的单一标准品储备溶液、以及含有上述四种特征代谢产物及其相应的同位素内标物的混合工作标准品溶液；（2）配制系列浓度的混合标样工作液；系列浓度的混合标样工作液中，内标的浓度保持不变，而目标化合物浓度成比例增长；将系列浓度的混合标样工作液注入色谱柱进行仪器分析，以（标样峰面积/内标样峰面积）为响应值；根据响应值与工作标样浓度之间存在的线性关系，即W=f×A，制成标准曲线；（3）取待测尿样，加入一定量的含四种特征代谢产物同位素内标物混合工作标准品溶液，使内标物的浓度介于标准曲线各浓度点的中部；调节待测样品的pH值为4.5，然后用甲醇、水、醋酸缓冲液分别活化后的固相萃取小柱吸附目标化合物；接着用醋酸缓冲液和水淋洗固相萃取小柱，除去杂质；真空抽干固相萃取小柱，然后用乙腈洗脱目标化合物；洗脱液用氮气吹干后，用少量甲醇溶液溶解，然后进行...
【技术特征摘要】
1.一种液相色谱串联质谱分析尿液中苯和甲苯四种代谢产物的方法，其特征在于包括以下步骤: (1)选取反，反粘康酸、1，2-苯二酚、苯巯基尿酸和N-乙酰基卞基半胱氨酸作为苯和甲苯的特征代谢产物；配制含有上述四种特征代谢产物的单一标准品储备溶液、含有上述四种特征代谢产物同位素内标物的单一标准品储备溶液、以及含有上述四种特征代谢产物及其相应的同位素内标物的混合工作标准品溶液； (2)配制系列浓度的混合标样工作液；系列浓度的混合标样工作液中，内标的浓度保持不变，而目标化合物浓度成比例增长；将系列浓度的混合标样工作液注入色谱柱进行仪器分析，以(标样峰面积/内标样峰面积)为响应值；根据响应值与工作标样浓度之间存在的线性关系，即W=fXA，制成标准曲线； (3)取待测尿样，加入一定量的含四种特征代谢产物同位素内标物混合工作标准品溶液，使内标物的浓度介于标准曲线各浓度点的中部；调节待测样品的PH值为4.5，然后用甲醇、水、醋酸缓冲液分别活化后的固相萃取小柱吸附目标化合物；接着用醋酸缓冲液和水淋...
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