本发明专利技术公开了一种可活体成像监测肝脏中IFN-β或NF-κB活性的小鼠模型及其构建方法。本发明专利技术通过构建携带噬菌体整合酶识别位点attB基因、IFN-β启动子或NFκB基因以及萤火虫荧光素酶(Fluc)报告基因的重组载体，用水动力法将其导入小鼠体内，得到受IFN-β启动子或NFκB基因调控表达的萤火虫荧光素酶(Fluc)报告基因整合于小鼠肝脏的小鼠模型。用本发明专利技术的小鼠模型可以评价不同因素在体内对IFN-β启动子或NF-κB活性的调节作用，也可作为天然免疫中干扰素或炎性因子调节药物、分子和病毒的评价模型，可广泛应用于各个门类的生物医学动物实验当中。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物学领域中的动物模型及其构建方法，特别是涉及一种可活体成像监测有IFN- β或NF- K B活性的小鼠模型及其构建方法。
技术介绍
I型干扰素(Interferon，IFN)在天然免疫反应中有着重要作用，其主要成员是IFN-α和IFN-β，肝脏是蛋白合成和许多天然免疫成分活化的一个重要场所，许多免疫相关分子能够被肝细胞来源的信号活化，肝脏的天然免疫系统在肝炎病毒感染及其免疫致病中发挥何种效应，已经成为学者们研究的热点。IFN在细胞水平的研究无法反映出其在复杂完整免疫体系中的真实情况，目前尚无合适的动物模型，用来探讨IFN在活体动物肝脏中的活性。核因子-κ B是1986年由Sen 和Baltimore在小鼠B淋巴细胞中发现的一种能与免疫球蛋白κ轻链基因增强子B位点特异结合的核蛋白因子，并将其命名为NuclearFactor-KB(NF-KB)。核因子_ κ B是一个具有广泛生物活性的转录因子，调控多种信号传导途径。作为细胞内信号传递的一个枢纽，核因子-κ B在免疫、炎症、肿瘤等众多疾病的发生发展过程中都起到重要作用，其表达的异常通常会导致机体的多种病理、生理学改变。然而，现今大多数关于NF-κ B的研究都是基于细胞水平进行的，真正动物整体水平的调控机制研究相对较少、较为困难，其主要原因就是缺乏实时、动态、易于建模、方便使用的动物模型。活体成像技术和生物发光技术由于其实用性，是近年来在生物医学研究领域应用较为广泛的报告基因监测手段。活体成像系统可以使研究人员直接实时的观察活体动物体内的细胞生长和基因表达情况，大大提高了生物学实验的可视性和可操作性，但成本相对较高，结合生物发光技术则可以有效控制由活体成像系统产生的高额成本。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种可活体成像监测肝脏中IFN-β或NF-κ B活性的小鼠模型。本专利技术所提供的可活体成像监测肝脏中IFN-β或NF-κΒ活性的小鼠模型，是肝脏转染有报告基因及IFN-β启动子或NF-κ B基因的小鼠模型，所述IFN-β启动子或NF-κ B基因调控报告基因的表达，所述报告基因用于指示IFN-β或NF-κ B的表达水平。在上述小鼠模型中，所述报告基因可为各种荧光素酶或碱性磷酸酶报告基因，优选为萤火虫荧光素酶(Fluc)基因。本专利技术的第二个目的是提供一种上述活体成像监测肝脏中IFN-β及NF-κ B活性的小鼠模型的构建方法。本专利技术所提供的上述活体成像监测肝脏中IFN-β及NF-κ B活性的小鼠模型的构建方法，可包括以下步骤:I)载体构建:构建携带噬菌体整合酶识别位点attB基因、IFN-β启动子或NFk B基因以及萤火虫荧光素酶(Fluc)报告基因的重组载体，所述噬菌体整合酶识别位点attB基因与IFN-β启动子或NF κ B基因位于Fluc报告基因的上游；2)将步骤I)构建的重组载体及噬菌体整合酶质粒用尾静脉高压注射的方法(水动力法)导入小鼠体内，得到受IFN-β启动子或NF κ B基因调控表达的萤火虫荧光素酶(Fluc)报告基因整合于小鼠肝脏的小鼠模型。在上述小鼠模型的构建方法中，所述步骤I)中用于构建携带噬菌体整合酶识别位点attB基因、IFN-β启动子以及Fluc报告基因的重组载体的出发载体为pGL3-basic，以pGL3-basic为出发载体构建的携带噬菌体整合酶识别位点attB基因和IFN-β启动子及萤火虫荧光素酶(Fluc)报告基因的重组载体为pGL3-attB-1FNi3 ；所述步骤I)中用于构建携带噬菌体整合酶识别位点attB基因、NFkB基因以及Fluc报告基因的重组载体的出发载体为pNFK B-Luc，以PNF κ B-Luc为出发载体构建的携带噬菌体整合酶识别位点attB基因、NF-κ B基因以及萤火虫荧光素酶(Fluc)报告基因的重组载体 pattB-NF κ B-Fluc。所述步骤2)中的噬菌体整合酶质粒为PhiC31o，所述将步骤I)构建的重组载体及噬菌体整合酶质粒用尾静脉高压注射的方法(水动力法)导入小鼠体内的方法具体为:取4-6周龄的雄性小鼠，称重，将重组质粒10 μ g和噬菌体整合酶表达质粒PhiC31o20 μ g混合于相当于小鼠体重10%的生理盐水，在3秒钟以内通过尾静脉快速转染至小鼠肝脏。本专利技术提供了一种可活体成像监`测有IFN-β或NF-κ B活性的小鼠模型及其构建方法。本专利技术的小鼠模型是通过构建含有噬菌体整合酶识别位点attB基因、由IFN-β启动子或NF κ B基因调控萤火虫荧光素酶(Fluc)报告基因表达的重组载体，再通过水动力注射法将该重组载体转染至小鼠肝脏，并可通过活体成像技术检测IFN- β或NF- κ B活性。本专利技术的小鼠模型可用于评价poly (1: C)对IFN- β的活化，HCV NS3/4A对IFN- β的活化信号的抑制作用及MHV病毒感染后对小鼠肝脏IFN- β的活化过程，以及NF- κ B抑制剂TOTC抑制NF-κ B激活的药效作用。用本专利技术的小鼠模型可以评价不同因素在体内对IFN-β启动子或NF-κ B活性的调节作用，也可作为天然免疫中干扰素或炎性因子调节药物、分子和病毒的评价模型，可广泛应用于各个门类的生物医学动物实验当中。下面结合具体实施例对本专利技术做进一步详细说明。附图说明图1为载体pGL3_Basic的物理图谱图2A为可活体成像监测肝脏中IFN-β活性的小鼠模型肝脏中萤火虫荧光素酶(Fluc)活性的活体成像检测结果图2B为可活体成像监测肝脏中IFN-β活性的小鼠模型肝脏中萤火虫荧光素酶(Fluc)表达水平的Western blot检测结果图2C为可活体成像监测肝脏中IFN-β活性的小鼠模型稳定性的活体成像检测结果图2D为可活体成像监测肝脏中IFN-β活性的小鼠模型稳定性的巢式PCR检测结果图3A为可活体成像监测肝脏中IFN-β活性的小鼠模型其IFN-β启动子活化的活体成像检测结果图3Β为可活体成像监测肝脏中IFN-β活性的小鼠模型其血清中IFN-β含量的检测结果图4Α为可活体成像监测肝脏中IFN-β活性的小鼠模型其IFN-β启动子被HCVNS3/4A蛋白酶抑制的活体成像检测结果图4Β为可活体成像监测肝脏中IFN-β活性的小鼠模型其IFN-β启动子被HCVNS3/4A蛋白酶抑制的血清中IFN-β ELISA检测结果图4C为可活体成像监测肝脏中IFN-β活性的小鼠模型其IFN-β启动子被HCVNS3/4A蛋白酶抑制的Western blot检测结果图5为可活体成像监测肝脏中IFN-β活性的小鼠模型来评价真实病毒对IFN-β启动子作用的活体成像检测结果图6Α为重组载体pattB-NF κ B-Fluc的结构示意6Β为可活体成像监测肝脏中NF κ B活性的小鼠模型肝脏Fluc表达情况的活体荧光成像监测结果图7Α为pattB-NF κ B-Fluc质粒在小鼠肝脏长效整合激活再表达情况的检测结果图7Β为nest-PCR对可活体成像监测肝脏中NF κ B活性的小鼠模型整合位点的鉴 定结果图8为利用可活体成像监测肝脏中NF κ B活性的小鼠模型对NF- κ B抑制剂TOTC的作用评价结果具体实施例方式实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种可活体成像监测肝脏中IFN?β及NF?κB活性的小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：1)载体构建：构建携带噬菌体整合酶识别位点attB基因、IFN?β启动子或NFκB基因以及萤火虫荧光素酶(Fluc)报告基因的重组载体，所述噬菌体整合酶识别位点attB基因与IFN?β启动子或NFκB基因位于Fluc报告基因的上游；2)将步骤1)构建的重组载体及噬菌体整合酶质粒利用尾静脉高压注射的方法(水动力法)导入小鼠体内，得到受IFN?β启动子或NFκB基因调控表达的萤火虫荧光素酶(Fluc)报告基因整合于小鼠肝脏的小鼠模型。
【技术特征摘要】
1.一种可活体成像监测肝脏中IFN-β及NF-K B活性的小鼠模型的构建方法，包括以下步骤: 1)载体构建:构建携带噬菌体整合酶识别位点attB基因、IFN-β启动子或NFkB基因以及萤火虫荧光素酶(Fluc)报告基因的重组载体，所述噬菌体整合酶识别位点attB基因与IFN-β启动子或NF K B基因位于Fluc报告基因的上游； 2)将步骤I)构建的重组载体及噬菌体整合酶质粒利用尾静脉高压注射的方法(水动力法)导入小鼠体内，得到受IFN-β启动子或NFk B基因调控表达的萤火虫荧光素酶(Fluc)报告基因整合于小鼠肝脏的小鼠模型。2.根据权利要求1所述的小鼠模型构建方法，其特征在于:所述步骤I)中用于构建携带噬菌体整合酶识别位点attB基因、IFN-β启动子以及Fluc报告基因的重组载体的出发载体为pGL3-basic，以pGL3-basic为出发载体构建的携带噬菌体整合酶识别位点attB基因和IFN-β启动子及萤火虫荧光素酶(Fluc)报告基因的重组载体为pGL3-attB-1FNi3 ；所述步骤I)中用于构建携带噬菌体整合酶识别位点attB基因、NF K B基因以及Fluc报告基因的重组载体的出发载体为pNFk B-Luc，...
【专利技术属性】
技术研发人员：詹林盛，周勇，阎少多，贾帅争，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所，
类型：发明
国别省市：
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