一种测定保健食品中维生素B12的色谱方法，包括以下步骤：（1）流动相制备；（2）对照品溶液制备；（3）供试样品溶液制备；（4）色谱条件设定；（5）进样检测。本发明专利技术通过选择新型流动相和与之配套的其他检测条件，实现直接对复杂基质保健食品中微量维生素B12含量的准确测定和计算，检测结果色谱峰形好，抗干扰能力强，满足实际测定要求。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及保健食和药品测试领域，尤其涉及測定保健食品和药品中微量维生素B12含量的色谱方法。
技术介绍
维生素B12，是人体必需的微量营养成分之一，若摄取不足，则可能引起恶性贫血，骨髓变性，舌炎，神经系症状，四肢僵硬，易受刺激，困倦，精神不振等。为补充人体所需要的维生素B12，目前许多保健食品添加维生素B12，但维生素B12在食品和一些基质成分复杂的保健品中含量很低，这对维生素B12的測定造成很大困难。目前维生素B12的測定方法已有微生物分析法、分光光度法和色谱法。微生物法不能准确区分维生素B12及其类似物，測定结果不精确，且费时费力，操作复杂，对人员技术要求高；分光光度法不适合复杂基质的样品，因为有很多组分光谱峰重叠，不是简单的几次求导就能区分开来的；目前建立的色谱法主要是应用高效液相色谱法(HPLC)，采用甲醇-水体系为流动相，对维生素B12进行检测，检测出现维生素B12组分无法出峰或出峰不明显无法达到測定要求的现象。较微生物法和分光光度法相比，已有的HPLC方法在一般检测过程中提高了灵敏度和准确度，但对于一些组分复杂且维生素B12含量低的保健品，t匕如只有几个ppm，进行测定时，需要对维生素B12进行提前富集，若直接进行采样测定则导致无法找到对应峰或出峰很小，重复性不高，从而达不到检测要求。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种测定保健食品中维生素B12的色谱方法，通过选择新型流动相和与之配套的其他检测条件，实现直接对复杂基质保健食品和药品中微量维生素B12含量的准确测定和计算。本专利技术是这样实现的:一种测定保健食品中维生素B12的色谱方法，其特征在于包括以下步骤:(1)流动相制备:称取一定量的磷酸ニ氢钾，置于容量瓶中，加去离子水溶解后，加85%磷酸配制浓度为0.04 M、pH为3.5±1.5的磷酸钾盐缓冲溶液，将上述缓冲溶液与甲醇按照缓冲溶液:甲醇=69:31的体积比的混合均匀，制成流动相；(2)对照品溶液制备:采用USP标准品作为维生素B12对照品，精密称定一定量的维生素B12对照品，用流动相溶解，配制成浓度为0.01 mg/mL的储备液，毎次试验前用流动相稀释储备液，配制成浓度为I U g/ml的标准工作溶液；(3)供试样品溶液制备:取适量待测样品，研成细粉，精密称定约含有25 Ug维生素B12的样品粉末，置于50mL棕色容量瓶中，精密加入25 mL流动相溶解，用カ震摇，提取2分钟，用0.45 um滤膜过滤；(4)色谱条件设定: a.色谱柱:采用反相 C18 色谱柱,5 V- m , 250 mm X 4.6 mm ；b.流速:0.5-1.5 mL/min ；c.检测器及检测波长:ニ极管阵列检测器，波长为546 nm ；d.进样量:70-150 uL；e.柱温:25-35 ° C ; (5)进样检測:通过供试样品与对照品的保留时间和溶液峰面积关系，按如下方程计算供试样品中维生素B12的含量:《 #= C对XA样X 25/ A对Xm样，其中co#为供试样品中维生素B12的含量，单位为U g/g 为对照品标准浓度 メ w为对照品标准溶液峰面积W#为供试样品溶液峰面积为供试样品的重量，单位为g。本专利技术所述的流动相也可应用磷酸钠盐和其他基质配制缓冲溶液。本专利技术通过选择新型流动相和与之配套的其他检测条件，实现直接对复杂基质保健食品中微量维生素B12含量的准确测定和计算，检测结果色谱峰形好，抗干扰能力強，满足实际測定要求。附图说明图1原有HPLC方法对照品色谱图。图2原有HPLC方法供试样品色谱图。图3本专利技术对照品色谱图。图4本专利技术供试样品色谱图。具体实施例方式參照附图，一种测定保健食品中维生素B12的色谱方法，其特征在于包括以下步骤:(I)流动相制备:称取一 定量的磷酸ニ氢钾，置于容量瓶中，加去离子水溶解后，加85%磷酸配制浓度为0.04 M、pH为3.5±1.5的磷酸钾盐缓冲溶液，将上述缓冲溶液与甲醇按照缓冲溶液:甲醇=69:31的体积比的混合均匀，制成流动相；(2)对照品溶液制备:采用USP标准品作为维生素B12对照品，精密称定一定量的维生素B12对照品，用流动相溶解，配制成浓度为0.01 mg/mL的储备液，每次试验前用流动相稀释储备液，配制成浓度为I U g/ml的标准工作溶液；(3)供试样品溶液制备:取适量待测样品，研成细粉，精密称定约含有25 Ug维生素B12的样品粉末，置于50mL棕色容量瓶中，精密加入25 mL流动相溶解，用力震摇，提取2分钟，用0.45 Pm滤膜过滤；(4)色谱条件设定:a.色谱柱:采用反相C18色谱柱，5 V- m , 250 mm X 4.6 mm ；b.流速:0.5-1.5 mL/min ；c.检测器及检测波长:ニ极管阵列检测器，波长为546 nm ；d.进样量:70-150 u L ；e.柱温:25-35。C ; (5)进样检测:通过供试样品与对照品的保留时间和溶液峰面积关系，按如下方程计算供试样品中维生素B12的含量:《样=C对XA样X25/ A对Xm样，其中《样为供试样品中维生素B12的含量，单位为y g/g 为对照品标准浓度#为对照品标准溶液峰面积#为供试样品溶液峰面积; #为供试样品的重量，单位为g。所述的流动相也可应用磷酸钠盐和其他基质配制缓冲溶液。具体实施时，原有HPLC方法对照品在保留时间t=10.2min附近的峰为维生素B12測定峰，供试样品在保留时间t=10.2min附近没有维生素B12測定峰；本专利技术对照品和供试样品在保留时间t=6.5 min附近都出现明显的维生素B12測定峰，可以顺利而有效地实现測定。本专利技术除采用C18柱外，也可以采用类似的反相柱。下面结合具体实施例对本专利技术作进ー步的说明: 实施例:样品中维生素B12含量的測定: (I)流动相准备:称取5.44 g KH2PO4,置于I L容量瓶中，加去离子水溶解后，用85%磷酸配制浓度为0.04 M、pH为3.5±1.5的磷酸钾盐缓冲溶液，量取310 mL甲醇和690 mL上述缓冲溶液混匀，用0.45 um微孔滤膜过滤、脱气。(2)对照品溶液准备:采用USP标准品作为维生素B12对照品。精密称定一定量的维生素B12对照品，用流动相溶解，配制成浓度为0.01 mg/mL的储备液；每次试验前用流动相稀释储备液，配制成浓度为I U g/ml的标准工作溶液。(3)供试样品处理:取不少于20片的样品，研成细粉，精密称定约含有25 y g维生素B12的样品粉末，置于50mL棕色容量瓶中，精密加入25 mL流动相溶解，用カ震摇，提取2分钟，用0.45 um滤膜过滤。(4)进样检测: 对照品和供试样品色谱图如图3和图4所不，对照品和供试样品保留时间在t=6.5 min附近的峰为维生素B12測定峰。通过供试样品与对照品的保留时间和溶液峰面积关系，按如下方程计算供试样品中维生素BI2的含量:《样=C对XA样X25/ A对Xm样，其中《样为供试样品中维生素B12的含量，单位为y g/g 为对照品标准浓度 メ#为对照品标准溶液峰面积 メ;if为供试样品溶液峰面积为供试样品的重量，单位为g。(5)对照品和供试样品色谱图如图3和图4所不，对照品和供试样品保留时间在t=6.5 min附近的峰为维本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种测定保健食品中维生素B12的色谱方法，其特征在于包括以下步骤：（1）流动相制备：称取一定量的磷酸二氢钾，置于容量瓶中，加去离子水溶解后，加85%磷酸配制浓度为0.04?M、pH?为3.5±1.5?的磷酸钾盐缓冲溶液，将上述缓冲溶液与甲醇按照缓冲溶液：甲醇=69:31的体积比的混合均匀，制成流动相；（2）对照品溶液制备：采用USP标准品作为维生素B12对照品，精密称定一定量的维生素B12对照品，用流动相溶解，配制成浓度为0.01?mg/mL的储备液，每次试验前用流动相稀释储备液，配制成浓度为1?μg/ml的标准工作溶液；（3）供试样品溶液制备：取适量待测样品，研成细粉，精密称定约含有25?μg维生素B12的样品粉末，置于50mL棕色容量瓶中，精密加入25?mL流动相溶解，用力震摇，提取2分钟，用0.45?μm滤膜过滤；（4）色谱条件设定：a.?色谱柱：采用反相C18色谱柱，5?μm?，250?mm?×4.6?mm；b.?流速：0.5?1.5?mL/min；c.?检测器及检测波长：二极管阵列检测器，波长为546?nm；d.?进样量：70?150?μL；e.?柱温：25?35?°C；（5）进样检测：通过供试样品与对照品的保留时间和溶液峰面积关系，按如下方程计算样品中维生素B12的含量：ω样=?C对×A样×25/?A对×m样，其中ω样为待测样品中维生素B12的含量，单位为μg/g；C对为对照品标准浓度；A对为对照品标准溶液峰面积；A样为样品溶液峰面积；m样为样品的重量,单位为g。...
【技术特征摘要】
1.一种测定保健食品中维生素B12的色谱方法，其特征在于包括以下步骤: (1)流动相制备:称取一定量的磷酸ニ氢钾，置于容量瓶中，加去离子水溶解后，加85%磷酸配制浓度为0.04 M、pH为3.5±1.5的磷酸钾盐缓冲溶液，将上述缓冲溶液与甲醇按照缓冲溶液:甲醇=69:31的体积比的混合均匀，制成流动相； (2)对照品溶液制备:采用USP标准品作为维生素B12对照品，精密称定一定量的维生素B12对照品，用流动相溶解，配制成浓度为0.01 mg/mL的储备液，毎次试验前用流动相稀释储备液，配制成浓度为I U g/ml的标准工作溶液； (3)供试样品溶液制备:取适量待测样品，研成细粉，精密称定约含有25u g维生素B12的样品粉末，置于50mL棕色容量瓶中，精密加入25 mL流动相溶解，用カ震摇，提取2分钟,用0.45 u m...
【专利技术属性】
技术研发人员：盛洁，钟瑛瑛，
申请(专利权)人：江苏艾兰得营养品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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