高效液相色谱分析方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种高效液相色谱分析方法及其应用。所述分析方法包括：对含有甾体类化合物的混合物用高效液相色谱法进行成分分析；其中，所述高效液相色谱法采用反相高效液相色谱，并且采用梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的流动相分别为水和95％乙腈。本发明专利技术的方法可同时对含有甾体类化合物的混合物(如含有雄烯二酮和/或植物甾醇的混合物)进行分析，消除了干扰因素、大大缩短了分析时间、操作简单、可靠、准确，改变了以往的操作步骤多、分析时间长，干扰因素较多等因素，因此是提供甾体药物研究工作与生产过程工业化生产管理的有效手段。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及留体药物的微生物合成领域，具体而言，涉及一种高效液相色谱分析方法及其在植物留醇微生物转化生产雄烯二酮中的应用。
技术介绍
近年来留体药物生产持续增长，而传统·的留体药物生产主要是从野生中药材“穿地龙”等植物中提取薯蓣皂苷元后经化学合成而成，其工艺十分复杂，所用原料紧缺，成本很高，而且污染环境，因此，以植物留醇为原料合成留体药物的加工业迅速兴起，并以惊人的速度发展起来。目前植物留醇已成为留体药物合成的主要原料。这从根本上改变传统化学合成留体药物步骤多、得率低、价格贵等方面的不足，还充分利用资源优势，摆脱原材料来源因季节、地域等自然因素对生产的制约，有利于保护自然资源和生态。雄烯二酮(AD)是许多留体药物合成的关键中间体，是生产留体类激素药物的重要原材料之一。作为前体，它可以继续合成诸类皮质激素、雌激素、雄激素、蛋白同化激素等 20多种留体类激素药物。目前生产雄烯二酮的方法是利用特定的微生物菌株，在水/有机溶剂两相发酵系统中，将植物留醇的侧链选择性切除，从而转化成雄烯二酮。雄烯二酮的结构式为

【技术保护点】
一种高效液相色谱分析方法，所述分析方法包括：对含有甾体类化合物的混合物用高效液相色谱法进行成分分析；其中，所述高效液相色谱法采用反相高效液相色谱，并且采用梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的流动相分别为水和95％乙腈。

【技术特征摘要】
1.一种高效液相色谱分析方法，所述分析方法包括对含有留体类化合物的混合物用高效液相色谱法进行成分分析；其中，所述高效液相色谱法采用反相高效液相色谱，并且采用梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的流动相分别为水和95%乙腈。2.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述留体类化合物包括雄烯二酮和/或植物甾醇；优选地，所述植物留醇包含菜籽留醇、菜油留醇、豆留醇和/或谷甾醇。3.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述高效液相色谱法采用的检测器为二极管阵列检测器。4.根据权利要求3所述的分析方法，其中，所述高效液相色谱法采用的检测波长为210nmo5.根据权利要求1所述的分析方法，其中，所述梯度洗脱的条件按时间分段设定为O至6分钟，水为10-15体积份、95%乙腈为90-85体积份；大于6分钟至30分钟，水为O体积份、95%乙腈为100体积份；大于30分钟至35分钟，水为10-15体积份、95%乙腈为90-85体积份。6.根据权利要求5所述的分析方法，其中，所述梯度洗脱的时间与流速的程序如下表所示时间 (分钟)流速 (毫升/分钟)0.001.06.001.06.011.07.001.530.001.530.011.035.001.07.根据权利要求5所述的分析方法，其中，所述流动相分别在A泵和B泵中流动，并且所述梯度洗脱的条件为8.根据权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：岳崇斌，岳光，赵德，
申请(专利权)人：北大方正集团有限公司，北大国际医院集团重庆大新药业股份有限公司，北大国际医院集团有限公司，
类型：发明
国别省市：