本发明专利技术公开了一种维生素K2（MK-7）含量的测定方法，主要涉及维生素K2（MK-7）的样品提取技术和色谱分离技术。该含量测定方法包括以下步骤:（1）样品溶液的制备；（2）维生素K2（MK-7）含量测定：利用高效液相色谱技术对样品溶液进行测定，得到维生素Ｋ2（MK-7）色谱峰的峰面积，根据标准曲线计算供试品中维生素K2（MK-7）的含量，并结合样品的质量，经计算得到维生素K2（MK-7）的含量。该方法可以用于含有维生素K2（MK-7）保健食品、药品、普通食品或预混料的含量快速测定，对含维生素K2（MK-7）的保健食品、药品、普通食品或预混料的质量进行评价，该含量测定方法准确、快捷、方便、有效。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于维生素K2（MK-7）功效成分测定领域，具体地说，涉及一种保健食品、药品、普通食品或预混料中维生素K2（MK-7）的含量的测定方法。
技术介绍
维生素K2是一种脂溶性维生素，是一系列含有2-甲基-1，4-萘醌母核及C3位带有数目不等的异戊二烯结构单元的萜烯侧链化合物的统称，其中最为重要的是维生素K 2(MK-5)、K 2(MK-7)，是人体中不可缺少的重要维生素之一。预防骨质疏松作用的主要是维生素K2(MK-7)。为保证产品质量，其有效成分的含量测定就不能忽视。对食品中维生素K2（MK-7）含量测定很少报道，尤其是复杂组分中的维生素K2（MK-7）的含量测定，国内公开报告仅有《反相高效液相色谱法测定纳豆提取物中维生素K 2(35)含量》（《中国药品标准》2010年第11卷第4期287页），该样品处理方法和色谱条件均不适合复杂组分中微量维生素K2（MK-7）的含量测定，且回收率偏低，色谱过程温度控制高达50℃，保留时间在25~ 35分钟，该色谱条件对色谱柱产生伤害较大，大大缩短了色谱柱的使用寿命，同时保留时间过长，工作效率不高。因此，为了控制产品质量，我们对食品中的维生素K2(MK-7)含量测定进行了研究，为该类产品的质量控制提供了依据。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述检测方法的不足，向质量控制部门提供一种具有灵敏度高、准确度好、操作简便、快速、应用范围广等特点，适用于各类保健食品、药品、普通食品或预混料中维生素K2（MK-7）含量的测定，从而建立一种快速简便的维生素K2（MK-7） 快速测定方法。为了达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种维生素K2（MK-7）含量的测定方法，包括以下步骤：（1）样品溶液的配制：取3.0-5.0g样品于50ml棕色容量瓶中，加入30ml异丙醇，在45~55℃恒温水浴锅涡旋振荡0.5~1.0小时，冷却至室温下，用异丙醇定容至刻度，摇匀，即为样品溶液；（2）高效液相色谱实验条件：色谱柱：JADE-PAK ODS（150×4.6mm，5um）或等效色谱柱；流速：0.8~1.5ml/min；检测波长：270nm；流动相：无水乙醇与乙腈的混合溶液，其中无水乙醇占比50%~60%；进样量：10μl；柱温：35~45℃；洗脱时间：20 min ；（3）对照品溶液的配制 ：取维生素K2（MK-7）对照品【CAS号：2124-57-4】，制成每 1 ml 分别含1.0μg、2.0μg、4.0μg、6.0μg、8.0μg 的对照品溶液；（4）维生素K2（MK-7）含量测定：高效液相色谱测定：不同浓度的对照品溶液分别以10μl 进样，测得各标准品溶液的高效液相色谱峰面积；以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准对照品浓度为横坐标分别做标准曲线，分别计算得线性回归方程；然后对样品溶液进行高效液相色谱测定，得到维生素K2（MK-7）色谱峰的峰面积，根据标准曲线计算样品中维生素K2（MK-7）的含量，并结合样品的质量，经计算得到维生素K2（MK-7）的含量。所述步骤四中的维生素K2（MK-7）含量的计算公式为： 式中 A样：样品溶液的维生素K2峰面积；C：对照品溶液的浓度，μg/ml；A标：对照品溶液的维生素K2峰面积；W样：样品称重，g。所述的样品溶液经0.45um微孔滤膜过滤后再进样。所述的步骤一中的样品为固体样品则需先用研钵及研杵研磨成细粉后使用，若样品为液体样品则直接取用，若样品为胶囊样品则取若干胶囊的内容物，研磨混合均匀后使用。所述方法适用于含维生素K2（MK-7）的片剂、维生素K2（MK-7）类硬胶囊、维生素K2（MK-7）类粉剂、维生素K2（MK-7）类软胶囊、维生素K2（MK-7）类滴剂、维生素K2（MK-7）类丸剂、维生素K2（MK-7）类软糖、维生素K2（MK-7）类饮料，产品可以是保健食品、药品、普通食品或预混料。有益效果本专利技术的色谱温度控制在35~45℃，洗脱时间为20 min，该色谱条件在保证含量测定准确性的前提下，没有对色谱柱造成伤害，延长了色谱柱的使用寿命，洗脱时间仅为20min，有效提高了工作效率；本专利技术的含量测定方法测试时间短、准确度高、仪器试剂简单，整个过程检测成本较低；本专利技术可以用于含有维生素K2（MK-7）保健食品、药品、普通食品或预混料的含量快速测定，对含维生素K2（MK-7）的保健食品、药品、普通食品或预混料的质量进行评价，具有灵敏度高、准确度好、操作简便、快速、应用范围广等特点。附图说明图1是实施例1中维生素K2（MK-7）对照品图谱；图2是实施例1中样品溶液的HPLC-UV；图3是实施例2中维生素K2（MK-7）对照品图谱；图4是实施例2中样品溶液的HPLC-UV；图5是实施例3中维生素K2（MK-7）对照品图谱；图6是实施例3中样品溶液的HPLC-UV。具体实施方式以下通过实施例进一步说明本专利技术，但不作为对本专利技术的限制。实施例11.检测试剂1.1 维生素K2（MK-7）对照品（USP）1.2异丙醇（HPLC）1.3乙腈（HPLC）1.4无水乙醇（HPLC）2.检测2.1对照品溶液配制 精密称取10mg维生素K2（MK-7）对照品于50ml容量瓶中，加入30ml异丙醇，超声使粉末溶解，用异丙醇定容至刻度，作为储备液。将储备液用异丙醇稀释制成每 1 ml 分别含1.0μg、2.0μg、4.0μg、6.0μg、8.0μg 的对照品溶液，阴凉避光保存。2.2 样品溶液配制2.2.1称取3.0g粉剂样品（产品名称：钙粉，批号： YB1402601，生产单位：江苏艾兰得营养品有限公司）于50ml棕色容量瓶中，加入30ml异丙醇，在45℃恒温水浴锅涡旋振荡1.0小时，冷却至室温下，用异丙醇定容至刻度，经0.45um微孔滤膜过滤，进样。2.3 HPLC检测条件2.3.1 色谱柱：JADE-PAK ODS（150×4.6mm，5um）或等效色谱柱2.3.2 流速：1.5ml/min2.3.3 检测波长：270nm2.3.4 流动相：无水乙醇：乙腈=60：402.3.5 进样量：10ul2.3.6 柱温：35℃3.计算 式中 A样：样品溶液的维生素K2峰面积；C：对照品溶液的浓度，μg/ml；A标：对照品溶液的维生素K2峰面积；W样：样品称重，g。4.高效液相色谱测定：不同浓度的对照品溶液分别以10μl 进样，测得各标准品溶液的高效液相色谱峰面积；以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准对照品浓度为横坐标分别做标准曲线，分别计算得线性回归方程；然后对样品溶液进行高效液相色谱测定，得到维生素K2（MK-7）色谱峰的峰本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种维生素K2 （MK‑7）含量的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）样品溶液的配制：取3.0‑5.0g样品于50ml棕色容量瓶中，加入30ml异丙醇，在45~55℃恒温水浴锅涡旋振荡0.5~1.0小时，冷却至室温下，用异丙醇定容至刻度，摇匀，即为样品溶液；（2）高效液相色谱实验条件：色谱柱：JADE‑PAK ODS（150×4.6mm，5um）或等效色谱柱；流速：0.8~1.5ml/min；检测波长：270nm；流动相：无水乙醇与乙腈的混合溶液，其中无水乙醇占比50%~60%；进样量：10μl；柱温：35~45℃；洗脱时间：20 min ；（3）对照品溶液的配制：取维生素K2（MK‑7）对照品【CAS号：2124‑57‑4】，制成每 1 ml 分别含1.0μg、2.0μg、4.0μg、6.0μg、8.0μg 的对照品溶液；（4）维生素K2（MK‑7）含量测定：高效液相色谱测定：不同浓度的对照品溶液分别以10μl 进样，测得各标准品溶液的高效液相色谱峰面积；以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准对照品浓度为横坐标分别做标准曲线，分别计算得线性回归方程；然后对样品溶液进行高效液相色谱测定，得到维生素K2（MK‑7）色谱峰的峰面积，根据标准曲线计算样品中维生素K2（MK‑7）的含量，并结合样品的质量，经计算得到维生素K2（MK‑7）的含量。...
【技术特征摘要】
1.一种维生素K2 （MK-7）含量的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）样品溶液的配制：
取3.0-5.0g样品于50ml棕色容量瓶中，加入30ml异丙醇，在45~55℃恒温水浴锅涡旋振荡0.5~1.0小时，冷却至室温下，用异丙醇定容至刻度，摇匀，即为样品溶液；
（2）高效液相色谱实验条件：
色谱柱：JADE-PAK ODS（150×4.6mm，5um）或等效色谱柱；
流速：0.8~1.5ml/min；
检测波长：270nm；
流动相：无水乙醇与乙腈的混合溶液，其中无水乙醇占比50%~60%；
进样量：10μl；
柱温：35~45℃；
洗脱时间：20 min ；
（3）对照品溶液的配制：取维生素K2（MK-7）对照品【CAS号：2124-57-4】，制成每 1 ml 分别含1.0μg、2.0μg、4.0μg、6.0μg、8.0μg 的对照品溶液；
（4）维生素K2（MK-7）含量测定：
高效液相色谱测定：不同浓度的对照品溶液分别以10μl 进样，测得各标准品溶液的高效液相色谱峰面积；以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准对照品浓度为横坐标分别做标准曲线，分别计算得线性回归方程；然后对样品溶液进行高效液相色谱测定，得到维生素K2（MK-7）色谱峰的峰面积，根据...
【专利技术属性】
技术研发人员：张兴，高平，张国栋，夏旭东，
申请(专利权)人：江苏艾兰得营养品有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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