本发明专利技术涉及用于PCR-悬浮芯片方法检测油料的组合物，所述组合物包含1对通用引物和7条探针。本发明专利技术还涉及用于PCR-悬浮芯片方法检测油料的试剂盒，所述试剂盒包含本发明专利技术的组合物。本发明专利技术还涉及检测油料的PCR-悬浮芯片方法及其在检测油料中的应用。本发明专利技术的PCR-悬浮芯片方法具有高通量、灵敏度高、快速、可靠性高等特点，为油料检测开辟了新的分子生物学手段。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，具体而言，本专利技术涉及用于PCR-悬浮芯片方法检测油料的组合物及试剂盒，检测油料的PCR-悬浮芯片方法及其在检测油料中的应用。
技术介绍
目前全球食用油消费主要以植物油为主，近十年基本保持5%左右的年需求及消费增幅。我国是世界第二大食用油消费国，也是世界油料生产大国。食用油品种丰富，因油料和加工工艺的不同而分为20多个品种，主要包括大豆油、花生油、葵花籽油、芝麻油、菜籽油、棕榈油等普通食用油和山茶油、橄榄油、红花油、葡萄籽油等高档食用油。随着食用植物油的消费需求日趋多样化、细分化和高档化，要求政府部门加大对食用油市场的规范和管理力度，以保障消费者利益，促进食用油产业的健康发展。目前食用油标准未对消费者十分关心的一些质量指标和检测方法进行说明。其中，食用油品种标识真实性问题在高端食用油产品中尤为突出。植物性油料作物品种繁多，加工强度大且步骤多，质量问题错综复杂，决定了食用油检测具有较大的技术难度。目前，分子生物学检测手段(例如，普通PCR法、多重PCR法、多重实时荧光PCR法以及芯片检测方法等)在食用油料的检测中具有较为广泛的应用，但尚存在一定的缺陷。常用的普通PCR法一次实验只能检测一种成分，且易产生假阴性及交叉污染现象。多重PCR法一次实验检测到的成分通常小于五种，而且由于需要将多对引物混合，容易出现相互干扰，影响判断。多重实时荧光PCR受到荧光数量的限制，荧光之间存在干扰。芯片检测方法需要对每种目标成分均设计其特异的引物，操作比较繁琐。传统的探针杂交技术因需要多次洗涤步骤，分析结果容易受本底影响，且因对分子集合的光学信号进行检测，不进行统计，结果的可靠性低。因此，寻求简便、准确、高效、可靠的分子生物学检测方法成为该领域的研究热点。PCR-悬浮芯片技术是分子生物学
新兴的一种检测技术，该技术是将PCR和悬浮芯片系统结合使用，首先对样品中的靶基因进行PCR扩增，然后通过液相杂交将偶联有探针的微球与样品中的靶基因序列结合，通过流式细胞技术和酶标检测技术的整合对样品中的多种目标成分进行同时检测。其中，悬浮芯片系统的核心技术是“多功能多指标同步分析体系”(Flexible Multiple Analyte Prof iling,简称xMap)技术,其使用特制的100种不同色标编码的5.5um高分子材料微球。每一种编码的微球标记一种可以捕获相应目标分子的探针，任选几种或多至100种标记好的微球混合后与样品中待检测目标分子作用，然后在液流带动下逐个通过一个微细石英管，两束不同波长激光对每个微球进行检测，一束激光检测微球的色标编码从而区分微球种类并进而确定检测的是何种分子，另一束激光检测与探针结合的目标分子上的荧光标记进行定量，通过计算机分析和标准曲线拟合，直接给出每一种目标分子的分子量。PCR-悬浮芯片技术具有如下独特优点:(I)、高通量，目前供悬浮芯片技术使用的微球有100种，可以同时对于同一样品中的多种不同目标分子进行定性和定量分析。(2)、重复性好，不同种类微球分别标记后混合，再分装成小份，用于分别检测各样品，各小份的性质完全一致。(3)、灵敏度高，悬浮芯片系统使用微球作为反应载体，增加了反应物接触面积，每个微球表面带有100种不同色标，以共价键偶联寡核苷酸探针，探针密度高，产生的信号强，使用荧光检测，放大了反应信号，灵敏度大大提高。(4)、快速，在I小时内可完成对PCR产物的检测。(5)、可靠性高，本技术对多个微球荧光信号进行单独检测后，用配套的软件进行统计分析，使检测结果更加准确可靠。目前，尚无使用PCR-悬浮芯片技术检测油料的报道
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于，提供用于PCR-悬浮芯片方法检测油料的组合物。本专利技术的另一个目的在于，提供用于PCR-悬浮芯片方法检测油料的试剂盒。本专利技术的再一个目的在于，提供用于检测油料的PCR-悬浮芯片方法。本专利技术的再一个目的在于，提供PCR-悬浮芯片方法在检测油料中的应用。针对上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案:本专利技术的专利技术人针对植物性油料作物的叶绿体rbcL基因设计了用于检测油料的通用弓I物和特异性寡核苷酸探针。一方面，本专利技术提供了一种用于PCR-悬浮芯片方法检测油料的组合物，所述组合物包含I对通用引物对和7条探针，所述通用引物由上游引物和下游引物组成，所述上游引物的核苷酸序列为SEQ ID N0.1所示，所述下游引物的核苷酸序列为SEQ ID N0.2所示，所述探针的核苷酸序列为SEQ ID N0.3-9所示，其中，所述下游引物的5’端标记有生物素，所述探针的5’端连接有20个用氨基修饰的T碱基。具体地，上述引物和探针的核苷酸序列分别为:SEQ ID N0.1 (上游引物):5，TTGGCAGCATTCCGAGTAAC 3’ ；SEQ ID N0.2 (下游引物):5’ AGTAAACATGTTAGTAACAG 3’ ；SEQ ID N0.3 (橄榄探针):5，CCATATTGAGCCCGTTCCTG 3，；SEQ ID N0.4 (花生探针):5’ CCGGTTGCTGGCGAAGAAAA 3’ ；SEQ ID N0.5 (菜籽探针):5’ CCAGGAGAAGAAACTCAATT 3’ ；SEQ ID N0.6 (芝麻探针):5，CCGGTTCCTGGAGAAACAGA 3，；SEQ ID N0.7 (大豆探针):5’ CCTGTTGCTGGGGAAGAAAA 3’ ；SEQ ID N0.8 (葵花籽探针):5，TGGACTTGAGCCTGTTCCTG 3，；SEQ ID N0.9 (玉米探针):5，CCCGTTCCTGGGGACCCAGA 3，。另一方面，本专利技术提供了一种用于PCR-悬浮芯片方法检测油料的试剂盒，其中，所述试剂盒包含本专利技术所述的组合物。根据本专利技术所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包含使用说明书，所述说明书中给出的 PCR 扩增条件是:95°C预变性 IOmin ；95°C 30s, 60°C 30s, 72°C 30s，共 35 个循环；72°C延伸5min ;4°C保存；所述说明书给出的杂交条件是95°C变性5min，60°C杂交15min。根据本专利技术所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包含作为标准品的目标油料的DNA和作为阴性对照的无菌双蒸水。根据本专利技术所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包含用于样品DNA提取的试剂和用于PCR扩增反应的试剂。再一方面，本专利技术提供了一种检测油料的PCR-悬浮芯片方法，其中，所述方法包括使用本专利技术所述的组合物或试剂盒。根据本专利技术所述的方法，其中，所述方法还包括使用本专利技术所述的引物进行PCR扩增及使用本专利技术所述的探针进行杂交的步骤。根据本专利技术所述的方法，其中，所述PCR扩增条件为:95 V预变性IOmin ；950C 30s, 600C 30s, 72°C 30s，共 35 个循环；72°C延伸 5min ;4°C保存。根据本专利技术所述的方法，其中，所述杂交条件为:95°C变性5min，60°C杂交15min。根据本专利技术所述的方法，其具体包括如下步骤:(I)、提取待检测样品的DNA模板；(2)、对于本专利技术所述下游引物5’端进行生物素标记； (3)、使用本专利技术所述上游引物和本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于PCR?悬浮芯片方法检测油料的组合物，其特征在于，所述组合物包含1对通用引物和7条探针，所述通用引物由上游引物和下游引物组成，所述上游引物的核苷酸序列为SEQ?ID?No.1所示，所述下游引物的核苷酸序列为SEQ?ID?No.2所示，所述探针的核苷酸序列为SEQ?ID?No.3?9所示，其中，所述下游引物的5’端标记有生物素，所述探针的5’端连接有20个用氨基修饰的T碱基。
【技术特征摘要】
1.种用于PCR-悬浮芯片方法检测油料的组合物，其特征在于，所述组合物包含I对通用引物和7条探针，所述通用引物由上游引物和下游引物组成，所述上游引物的核苷酸序列为SEQ ID N0.1所示，所述下游引物的核苷酸序列为SEQ ID N0.2所示，所述探针的核苷酸序列为SEQ ID N0.3-9所示，其中，所述下游引物的5’端标记有生物素，所述探针的5’端连接有20个用氨基修饰的T碱基。2.种用于PCR-悬浮芯片方法检测油料的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求I所述的组合物。3.据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含使用说明书，所述说明书中给出的PCR扩增条件为:95°C预变性IOmin ；95°C 30s, 60°C 30s, 72°C 30s，共35个循环；72°C延伸5min ;4°C保存；所述说明书给出的杂交条件为:95°C变性5min，60°C杂交15min。...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈颖，吴亚君，李元元，韩建勋，王斌，杨海荣，葛毅强，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，中国农业大学食品科学与营养工程学院，
类型：发明
国别省市：
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